【正文】 向光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大小。，評價一個樣品制備的優(yōu)劣，有哪三個評價指標(biāo)？①細胞的密度，不能低于1106/ml ②非特異熒光，不超過1％.③細胞碎片和聚集體，不能出現(xiàn)肉眼可見的團塊。因此，將數(shù)據(jù)用圖形顯 示更直觀，然后再進行統(tǒng)計分析，這是FCM結(jié)果分析中最常用的分析方法。AnnexinV是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。+依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機切斷，形成180～200bp核小體DNA多聚體。能夠誘發(fā)細胞凋亡的因素很多，如射線、能夠引起染色體損傷的藥物、細胞自身表達的一些受體分子等。2)在油浸觀察時，應(yīng)采用“無熒光油”，在使用U和V激發(fā)方式觀察時更應(yīng)注意。機械裝置主要包括鏡筒、鏡柱、載物臺、鏡座、粗細調(diào)節(jié)螺旋等部分5熒光顯微鏡在細胞生物學(xué)研究中有什么應(yīng)用？5比較放大率與分辨率的含義。Annexin V聯(lián)合PI法。細胞器 細胞凋亡無明顯變化；細胞壞死是腫脹和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)崩解。炎癥反應(yīng) 細胞凋亡無，不釋放細胞內(nèi)容物；細胞壞死有，釋放內(nèi)容物。細胞膜 細胞凋亡是保持完整一直到形成調(diào)亡小體；細胞壞死是破損。顯微鏡也是如此，其最小分辨距離也是有一定限度的。7)汞燈光源點亮后至少點燈15分，關(guān)閉后等待35分再開5光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)光學(xué)顯微鏡在結(jié)構(gòu)上分為光學(xué)系統(tǒng)和機械裝置兩個部分。5熒光顯微鏡使用的注意事項：1)長時間的激發(fā)光照射標(biāo)本，會發(fā)生熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射(觀察)時間。值得注意的是 ,PI不能通過細胞膜完整的細胞4細胞凋亡：凋亡（或程序性細胞死亡）是一個生理性的細胞自我毀滅的過程，在胚胎發(fā)育、生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及多細胞生物防御外在及內(nèi)在傷害方面均起著非常重要的作用。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 178。 43. 簡述磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)聯(lián)合PI法檢測細胞凋亡的原理。液柱與入射的高度聚焦的激光束相交，此時，細胞上的熒光染料被激發(fā)而產(chǎn)生特異性熒光。 2 側(cè)向角散射，即SSC，是指與激光束正交90度方向的散射信號，它對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更敏感，可以提供細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)及顆粒性質(zhì)的信息. 這兩種信號同時被前向光電二極管和90176。開始不易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件下生存，對青霉素有抗藥性。[注意事項]組織塊接種后l～3天，由于游出細胞數(shù)很少．組織塊的粘貼不牢固．在觀察相移動過程中要注意動作輕巧．盡量不要引起液體的振蕩而產(chǎn)生對組織塊的沖擊力使其漂起。28. 簡述原代細胞培養(yǎng)方法及注意事項?常用的有兩種: 細胞培養(yǎng)法 和 組織塊法細胞培養(yǎng)法(1)按組織的消化分離法收獲細胞。％的胰蛋白酶液。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。于加藥后作用24~48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。（4）減少細胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。也稱再培養(yǎng)。（3）膠原酶：適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。 (5）組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本；另一方面手術(shù)時使用碘酒消毒，這些混入組織中的碘可以影響細胞生長。如凈化工作臺使用過久，濾器受塵埃阻塞，可使凈化工作不能正常進行。3. 過濾消毒：將液體或氣體用微孔慮膜過濾,使大于孔徑的的細菌等微生物顆粒阻留, 壓滅菌的物品。防止交叉污染16. 分別指出下列物品通常使用那種消毒方法進行消毒？（培養(yǎng)室、工作臺、玻璃制品、金屬器械、塑料制品，橡膠制品，培養(yǎng)用液、布類）.消毒方法分為三類： （A） 物理滅菌法（紫外線、濕熱、過濾等）。12. 簡述完全培養(yǎng)基的組成及配制方法?組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基80％一95％血清 5％一20％ g/L青、鏈霉素 各100單位／毫升. 配制方法:⑴認(rèn)真閱讀說明書⑵配制時要保證充分溶解，各種物質(zhì)要在培養(yǎng)基完全溶解后添加⑶配制水應(yīng)為雙蒸水或三蒸水⑷所用器皿應(yīng)十分清潔⑸配制好后馬上過濾，低溫?zé)o菌保存。10. 體外培養(yǎng)細胞生長的條件（1） 細胞的營養(yǎng)需要：氨基酸、單糖、維生素、無機離 子、微量元素、激素、生長因子等。⑵傳代期:細胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中（不論稀釋與否）。（4）培養(yǎng)液中離子成分及其濃度。密度抑制（density inhibition）：細胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象。貼壁期：細胞附著于底物上，游離期 結(jié)束。培養(yǎng)條件：不同的細胞對培養(yǎng)基需求不同，當(dāng)前尚無一種培養(yǎng)基是萬能的，應(yīng)選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。特點：在懸浮液中生長良好、細胞圓形，單個或小細胞團。（細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化特征、生理功能為細胞分化的三項指標(biāo)），由于體外培養(yǎng)細胞失去了神經(jīng)、激素等體液的調(diào)節(jié)和細胞間相互影響，經(jīng)多次傳代增殖，久之則發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象逐漸減弱或不顯，形態(tài)與功能趨于單一化，或傳一定代數(shù)后衰老死亡；發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲不死性而成為能無限傳代的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。2體外細胞的分化特點？細胞分化：在個體發(fā)育過程中，子代細胞產(chǎn)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能差異的過程。細胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運動，．懸浮生長型細胞概念：:來自血，脾或骨髓，尤以血中白細 胞多見，癌腫細胞也可能。來自同一個體的組織，分化低的比分化高的容易培養(yǎng)。 5簡述每代貼附生長細胞的生長過程分哪幾期？游離期 ： 細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮 狀態(tài)．也稱懸浮期此時細胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。（接觸抑制：當(dāng)一個貼壁生長的體外正常細胞生長至與另一個細胞的表面相互接觸時，便停止了分裂增殖，相互雖然緊密接觸，但不形成交叉重疊生長，也不進入S期。（3）減少培養(yǎng)液中血清的含量，使培養(yǎng)液黏度降低。此期一般持續(xù)1～4周。⑶繪制細胞生長曲線，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時間，縱坐標(biāo)為細胞濃度。⑤血清的消毒：過濾除菌⑥一般說來．含5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細胞可以維持細胞不死．但支持細胞生長一般需加 10％血清．⑦對于血清支持細胞生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚．⑧血清中不僅存在促細胞生長因子，同對也存在細胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞所反映的生物學(xué)特性是細胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。如吸管不能碰到廢液缸。常用物品消毒壓力及時間：培養(yǎng)液、橡膠制品10磅10分鐘；布類、玻璃制