【正文】 向光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè)，這種信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大小。，評(píng)價(jià)一個(gè)樣品制備的優(yōu)劣，有哪三個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)？①細(xì)胞的密度，不能低于1106/ml ②非特異熒光，不超過1％.③細(xì)胞碎片和聚集體，不能出現(xiàn)肉眼可見的團(tuán)塊。因此，將數(shù)據(jù)用圖形顯 示更直觀，然后再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，這是FCM結(jié)果分析中最常用的分析方法。AnnexinV是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。+依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180～200bp核小體DNA多聚體。能夠誘發(fā)細(xì)胞凋亡的因素很多，如射線、能夠引起染色體損傷的藥物、細(xì)胞自身表達(dá)的一些受體分子等。2)在油浸觀察時(shí)，應(yīng)采用“無(wú)熒光油”，在使用U和V激發(fā)方式觀察時(shí)更應(yīng)注意。機(jī)械裝置主要包括鏡筒、鏡柱、載物臺(tái)、鏡座、粗細(xì)調(diào)節(jié)螺旋等部分5熒光顯微鏡在細(xì)胞生物學(xué)研究中有什么應(yīng)用？5比較放大率與分辨率的含義。Annexin V聯(lián)合PI法。細(xì)胞器 細(xì)胞凋亡無(wú)明顯變化；細(xì)胞壞死是腫脹和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)崩解。炎癥反應(yīng) 細(xì)胞凋亡無(wú)，不釋放細(xì)胞內(nèi)容物；細(xì)胞壞死有，釋放內(nèi)容物。細(xì)胞膜 細(xì)胞凋亡是保持完整一直到形成調(diào)亡小體；細(xì)胞壞死是破損。顯微鏡也是如此，其最小分辨距離也是有一定限度的。7)汞燈光源點(diǎn)亮后至少點(diǎn)燈15分，關(guān)閉后等待35分再開5光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)光學(xué)顯微鏡在結(jié)構(gòu)上分為光學(xué)系統(tǒng)和機(jī)械裝置兩個(gè)部分。5熒光顯微鏡使用的注意事項(xiàng)：1)長(zhǎng)時(shí)間的激發(fā)光照射標(biāo)本，會(huì)發(fā)生熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射(觀察)時(shí)間。值得注意的是 ,PI不能通過細(xì)胞膜完整的細(xì)胞4細(xì)胞凋亡：凋亡（或程序性細(xì)胞死亡）是一個(gè)生理性的細(xì)胞自我毀滅的過程，在胚胎發(fā)育、生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及多細(xì)胞生物防御外在及內(nèi)在傷害方面均起著非常重要的作用。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 178。 43. 簡(jiǎn)述磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)聯(lián)合PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。液柱與入射的高度聚焦的激光束相交，此時(shí)，細(xì)胞上的熒光染料被激發(fā)而產(chǎn)生特異性熒光。 2 側(cè)向角散射，即SSC，是指與激光束正交90度方向的散射信號(hào)，它對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更敏感，可以提供細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)及顆粒性質(zhì)的信息. 這兩種信號(hào)同時(shí)被前向光電二極管和90176。開始不易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件下生存，對(duì)青霉素有抗藥性。[注意事項(xiàng)]組織塊接種后l～3天，由于游出細(xì)胞數(shù)很少．組織塊的粘貼不牢固．在觀察相移動(dòng)過程中要注意動(dòng)作輕巧．盡量不要引起液體的振蕩而產(chǎn)生對(duì)組織塊的沖擊力使其漂起。28. 簡(jiǎn)述原代細(xì)胞培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)?常用的有兩種: 細(xì)胞培養(yǎng)法 和 組織塊法細(xì)胞培養(yǎng)法(1)按組織的消化分離法收獲細(xì)胞。％的胰蛋白酶液。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。于加藥后作用24~48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。（4）減少細(xì)胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。也稱再培養(yǎng)。（3）膠原酶：適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。 (5）組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來(lái)源于組織樣本；另一方面手術(shù)時(shí)使用碘酒消毒，這些混入組織中的碘可以影響細(xì)胞生長(zhǎng)。如凈化工作臺(tái)使用過久，濾器受塵埃阻塞，可使凈化工作不能正常進(jìn)行。3. 過濾消毒：將液體或氣體用微孔慮膜過濾,使大于孔徑的的細(xì)菌等微生物顆粒阻留, 壓滅菌的物品。防止交叉污染16. 分別指出下列物品通常使用那種消毒方法進(jìn)行消毒？（培養(yǎng)室、工作臺(tái)、玻璃制品、金屬器械、塑料制品，橡膠制品，培養(yǎng)用液、布類）.消毒方法分為三類： （A） 物理滅菌法（紫外線、濕熱、過濾等）。12. 簡(jiǎn)述完全培養(yǎng)基的組成及配制方法?組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基80％一95％血清 5％一20％ g/L青、鏈霉素 各100單位／毫升. 配制方法:⑴認(rèn)真閱讀說(shuō)明書⑵配制時(shí)要保證充分溶解，各種物質(zhì)要在培養(yǎng)基完全溶解后添加⑶配制水應(yīng)為雙蒸水或三蒸水⑷所用器皿應(yīng)十分清潔⑸配制好后馬上過濾，低溫?zé)o菌保存。10. 體外培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的條件（1） 細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需要：氨基酸、單糖、維生素、無(wú)機(jī)離 子、微量元素、激素、生長(zhǎng)因子等。⑵傳代期:細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中（不論稀釋與否）。（4）培養(yǎng)液中離子成分及其濃度。密度抑制（density inhibition）：細(xì)胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象。貼壁期：細(xì)胞附著于底物上，游離期 結(jié)束。培養(yǎng)條件：不同的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基需求不同，當(dāng)前尚無(wú)一種培養(yǎng)基是萬(wàn)能的，應(yīng)選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。特點(diǎn)：在懸浮液中生長(zhǎng)良好、細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)。（細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化特征、生理功能為細(xì)胞分化的三項(xiàng)指標(biāo)），由于體外培養(yǎng)細(xì)胞失去了神經(jīng)、激素等體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間相互影響，經(jīng)多次傳代增殖，久之則發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象逐漸減弱或不顯，形態(tài)與功能趨于單一化，或傳一定代數(shù)后衰老死亡；發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲不死性而成為能無(wú)限傳代的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。2體外細(xì)胞的分化特點(diǎn)？細(xì)胞分化：在個(gè)體發(fā)育過程中，子代細(xì)胞產(chǎn)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能差異的過程。細(xì)胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運(yùn)動(dòng)，．懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞概念：:來(lái)自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì) 胞多見，癌腫細(xì)胞也可能。來(lái)自同一個(gè)體的組織，分化低的比分化高的容易培養(yǎng)。 5簡(jiǎn)述每代貼附生長(zhǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過程分哪幾期？游離期 ： 細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮 狀態(tài)．也稱懸浮期此時(shí)細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。（接觸抑制：當(dāng)一個(gè)貼壁生長(zhǎng)的體外正常細(xì)胞生長(zhǎng)至與另一個(gè)細(xì)胞的表面相互接觸時(shí)，便停止了分裂增殖，相互雖然緊密接觸，但不形成交叉重疊生長(zhǎng)，也不進(jìn)入S期。（3）減少培養(yǎng)液中血清的含量，使培養(yǎng)液黏度降低。此期一般持續(xù)1～4周。⑶繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時(shí)間，縱坐標(biāo)為細(xì)胞濃度。⑤血清的消毒：過濾除菌⑥一般說(shuō)來(lái)．含5％小牛血清的培養(yǎng)基對(duì)大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長(zhǎng)一般需加 10％血清．⑦對(duì)于血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對(duì)血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚．⑧血清中不僅存在促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，同對(duì)也存在細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。如吸管不能碰到廢液缸。常用物品消毒壓力及時(shí)間：培養(yǎng)液、橡膠制品10磅10分鐘；布類、玻璃制