【正文】 不牢固．在觀察相移動過程中要注意動作輕巧．盡量不要引起液體的振蕩而產生對組織塊的沖擊力使其漂起。開始不易發(fā)現，能在偏堿條件下生存，對青霉素有抗藥性。流式細胞術是二十世紀七十年代發(fā)展起來的高科學技術,流式細胞儀集計算機技術、激光技術、流體力學、細胞化學、細胞免疫學于一體,在血液學、免疫學、腫瘤學、藥物學、分子生物學等學科廣泛應用。 流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。 2 側向角散射，即SSC，是指與激光束正交90度方向的散射信號，它對細胞膜、胞質、核膜的折射率更敏感，可以提供細胞內結構及顆粒性質的信息. 這兩種信號同時被前向光電二極管和90176。 這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度，經光電倍增管接收后可轉換為電信號，再通過模／數轉換器，將連續(xù)的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號。液柱與入射的高度聚焦的激光束相交，此時，細胞上的熒光染料被激發(fā)而產生特異性熒光。1HLAB27分析2細胞周期分析3凋亡分析4淋巴細胞亞群分析5白血病分型6細胞因子分析7血小板分析8干細胞分析9流式細胞儀在其它方面的應用。（安裝488和635nm激光）能同時檢測到的六大參數分別是什么？41. 簡述流式細胞儀的特點和檢測范圍。 43. 簡述磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)聯合PI法檢測細胞凋亡的原理。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 178。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3’OH形成，很少能夠被染色。值得注意的是 ,PI不能通過細胞膜完整的細胞4細胞凋亡：凋亡（或程序性細胞死亡）是一個生理性的細胞自我毀滅的過程，在胚胎發(fā)育、生物體內環(huán)境的穩(wěn)定及多細胞生物防御外在及內在傷害方面均起著非常重要的作用。50、熒光激發(fā)濾色鏡分哪幾類?各自的激發(fā)波長是多少？激發(fā)濾色鏡為觀察不同性質的物體所設計的濾色鏡或濾色鏡組，通常可分為紫外激發(fā)(U激發(fā))、紫色激發(fā)(V激發(fā))、藍色激發(fā)(B激發(fā))和綠色激發(fā)(G激發(fā))等四種。5熒光顯微鏡使用的注意事項：1)長時間的激發(fā)光照射標本，會發(fā)生熒光衰減和消失現象，故應盡可能縮短照射(觀察)時間。3)標本所發(fā)的熒光較弱，觀察時應盡可能在較暗的室內條件下進行。7)汞燈光源點亮后至少點燈15分，關閉后等待35分再開5光學顯微鏡基本結構光學顯微鏡在結構上分為光學系統和機械裝置兩個部分。好的顯微鏡最大可放大2000倍，可分辨相距1X10－6cm的兩點。顯微鏡也是如此，其最小分辨距離也是有一定限度的。細胞凋亡的主要檢查手段。細胞膜 細胞凋亡是保持完整一直到形成調亡小體；細胞壞死是破損。凋亡小體 細胞凋亡有，被鄰近細胞或巨噬細胞吞噬；細胞壞死無，細胞自溶。炎癥反應 細胞凋亡無，不釋放細胞內容物；細胞壞死有，釋放內容物。蛋白質合成 細胞凋亡有；細胞壞死無。細胞器 細胞凋亡無明顯變化；細胞壞死是腫脹和內質網崩解。TUNEL法檢測細胞凋亡細胞凋亡和細胞壞死的區(qū)別：起因 細胞凋亡是生理或病理性的；細胞壞死是病理性變化或劇烈損傷。Annexin V聯合PI法。正常人眼在照明良好的情況下，若小于這個距離，就分辨不清是兩個物體點，而被誤認為是一點。機械裝置主要包括鏡筒、鏡柱、載物臺、鏡座、粗細調節(jié)螺旋等部分5熒光顯微鏡在細胞生物學研究中有什么應用？5比較放大率與分辨率的含義。4)熒光顯微照相時，因曝光時間相對較長，可采用感光度較快的膠片 5)避免直視紫外線光源，將紫外線防護板(黃色)裝在載物臺前以防紫外線損傷視網膜。2)在油浸觀察時，應采用“無熒光油”，在使用U和V激發(fā)方式觀察時更應注意。④核酸內切酶活化，導致染色質DNA在核小體連接部位斷裂，形成約200bp整數倍的核酸片段，凝膠電泳圖譜呈梯狀；⑤凋亡通常是生理性變化 5根據標本染色的不同如何選擇濾光片：染成藍色或綠色的標本使用紅色濾光片、染成紅色的標本使用綠色濾光片、染成黃色或棕色的標本使用藍色濾光片、染成紫色的標本使用綠色濾光片、染成藍——紫色的標本使用黃色濾光片5細胞凋亡的生物學意義。能夠誘發(fā)細胞凋亡的因素很多，如射線、能夠引起染色體損傷的藥物、細胞自身表達的一些受體分子等。由于細胞周期各時相的DNA含量不同 ,通常正常細胞的G1 /G0期具有二倍體細胞的DNA含量 (2N) ,而G2 /M期具有四倍體細胞的DNA含量 (4N) ,而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。+依賴的核酸內切酶作用下，在核小體單位之間被隨機切斷，形成180～200bp核小體DNA多聚體。亞二倍體峰的出現，實際上是由于細胞凋亡時DNA含量低于正常細胞，使其在直方圖上表現為一個熒光強度比正常細胞要小的峰（亞二倍體峰），即凋亡細胞DNA對PI可染性降低。AnnexinV是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。但由于目前所使用的各種熒光染料都是寬發(fā)射譜性質，雖然它們之間各自發(fā)射峰值各不相同，但發(fā)射譜范圍有一定的重疊，FITC探測器會探測到少量的PE光譜，而PE探測器則檢測到較多的FITC光譜。因此，將數據用圖形顯 示更直觀，然后再進行統計分析，這是FCM結果分析中最常用的分析方法。HLAB27軟件首先在FSCFL2的點圖上確定CD3強陽性細胞群體的位置，設定一個CD3+T淋巴細胞門，然后再根據FSC設定光散射門，去除FSC過大或過小的細胞，確保門內至少有50%的CD3+T淋巴細胞，這樣通過二者的結合，將隨后進行的分析嚴格地定位在T淋巴細胞上。，評價一個樣品制備的優(yōu)劣，有哪三個評價指標？①細胞的密度，不能低于1106/ml ②非特異熒光，不超過1％.③細胞碎片和聚集體，不能出現肉眼可見的團塊。，鞘液有哪些作用？鞘液的作用有二：一是約束樣品使之在噴嘴中心以提高測量精度；二是防止樣品靠近噴孔壁以避免堵塞噴孔。前向光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大小。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，分析出其體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學特征。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。與傳統熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優(yōu)點， 成為當代