【正文】 基因組DNA 細(xì)胞凋亡有控降解，電泳圖譜呈梯狀；細(xì)胞壞死隨機(jī)降解，電泳圖譜呈涂抹狀。形態(tài)學(xué)檢查 Ladders實(shí)驗(yàn) 流式細(xì)胞儀檢查 Annexin V聯(lián)合PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡。分辨率又稱(chēng)“鑒別率”或“分辨本領(lǐng)”，是衡量顯微鏡性能的一個(gè)重要參數(shù)。使用帶有遮光罩的目鏡時(shí)可將其撥出使用，以防雜光進(jìn)人干擾。5簡(jiǎn)述細(xì)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征有哪些？（見(jiàn)表四）①染色質(zhì)聚集、分塊、位于核膜上，胞質(zhì)凝縮，最后核斷裂， ②凋亡小體內(nèi)有結(jié)構(gòu)完整的細(xì)胞器，還有凝縮的染色體，可被鄰近細(xì)胞吞噬消化，因始終有膜封閉，沒(méi)有內(nèi)溶物釋放，故不會(huì)引起炎癥；③凋亡細(xì)胞中仍需要合成一些蛋白質(zhì)。45. 簡(jiǎn)述流式細(xì)胞術(shù)PI染色進(jìn)行細(xì)胞周期分析的原理? PI ,即碘化丙錠 ,可以與細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合 ,采用RNA抑制劑將RNA消化后 ,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到的與DNA結(jié)合的PI的熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量的多少。因此將AnnexinV與PI匹配使用，就可以將正常細(xì)胞、凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)主要是通過(guò)PI與細(xì)胞核DNA結(jié)合，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DNA含量。1分析速度快2 多參數(shù)3當(dāng)代最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)4精度高42. 在使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析時(shí)，為什么要進(jìn)行光譜重疊的校正？當(dāng)細(xì)胞攜帶兩種熒光素如PE和FITC, 受激光激發(fā)而發(fā)射出兩種不同波長(zhǎng)的熒光時(shí)，理論上，可選擇濾片使每種熒光僅被相應(yīng)的檢測(cè)器檢測(cè)到，而不會(huì)檢測(cè)到另一種熒光。HLAB27基因表達(dá)在所有含核的細(xì)胞上，尤其是淋巴細(xì)胞的表面含量豐富。計(jì)算機(jī)把所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理，將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上，也可以打印出來(lái)，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲(chǔ)在硬盤(pán)上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出，形成細(xì)胞柱。流式細(xì)胞儀的工作原理：待測(cè)樣品制成單個(gè)細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料對(duì)細(xì)胞（或表面抗原等）染色后放入上樣管中，在清潔氣體的壓力下將待測(cè)樣品壓入流動(dòng)室，與此同時(shí)，不含細(xì)胞的磷酸鹽緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液管?chē)姵?，鞘液管入口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形的流束，待測(cè)細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過(guò)檢測(cè)區(qū)域。同時(shí)具有分析和分選細(xì)胞功能。2在原代培養(yǎng)的1一2d內(nèi)要持別注意觀察，是否有細(xì)菌、霉菌的污染．一旦發(fā)現(xiàn)，要及時(shí)清除，以防給培養(yǎng)箱內(nèi)的其它細(xì)胞帶來(lái)污染。(2)將剪切好的組織小塊．用眼科鑷送入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。一般來(lái)講．胚胎組織較成熟個(gè)體的組織容易培 養(yǎng)．分化低的較分化高的組織容易生長(zhǎng)、腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除l／2～2／3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。另外，早期傳代培養(yǎng)的細(xì)胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。 公式中乘以2因?yàn)榧?xì)胞懸液于染液是1：1稀釋。這是保存細(xì)胞的最主要目的。2密度抑制（density inhibition）：細(xì)胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象3接觸抑制（contact inhibition）：細(xì)胞匯合相互接觸后失去運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。胰蛋白酶液消化時(shí)間：210分鐘。另外需要注意的是CO2溫箱．由于溫箱內(nèi)濕度大，溫度適宜，取存細(xì)胞時(shí)不慎將培養(yǎng)液漏出，易使細(xì)菌、霉菌孽生，而CO2溫箱內(nèi)是開(kāi)放式培養(yǎng)．如不定期消毒,可形成污染. (3）操作：實(shí)驗(yàn)操作無(wú)菌觀念不強(qiáng)、動(dòng)作不準(zhǔn)確、使用污染的器具．或封瓶時(shí)不嚴(yán)，都可發(fā)生污染。 5抗生素消毒：即抗生素滅菌，主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染。時(shí)間30分鐘。 （如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時(shí)仍要過(guò)火。③優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無(wú)沉淀物，無(wú)細(xì)菌、支原體、病毒污染。⑵每隔24小時(shí)吸去3個(gè)孔的培養(yǎng)板，加入消化液，混懸細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞數(shù)目。此期一般持續(xù)1～4周。低溫：可抑制附著）2措施：（1）包被：對(duì)分化程度高、生長(zhǎng)能力差的細(xì)胞，可在培養(yǎng)瓶皿表面包被有利于細(xì)胞粘附和生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì). 血清內(nèi)含有多種能夠促進(jìn)細(xì)胞粘附的成分，細(xì)胞本身也可能產(chǎn)生一些粘附分子。停止期（平臺(tái)期）：細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂。生長(zhǎng)狀態(tài)改變：懸浮或貼附：懸浮時(shí)圓形 ，貼附成纖維或上皮樣。促生長(zhǎng)因子。生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng)，很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng)。 在無(wú)菌條件下,從動(dòng)物(植物也可)或在人體中取出組織或細(xì)胞,置于模擬體內(nèi)的生理環(huán)境中(無(wú)菌,適當(dāng)?shù)臏囟群鸵欢ǖ臓I(yíng)養(yǎng)條件)使之生存和增殖生長(zhǎng)的技術(shù)方法。來(lái)源：來(lái)源于外胚層，內(nèi)胚層細(xì)胞 如：皮膚及其衍生物 ；消化道，乳腺，肺泡 ；上皮性腫瘤形態(tài)：類(lèi)似體內(nèi)的上皮細(xì)胞。培養(yǎng)條件。血清，Hela：高血清成纖維細(xì)胞樣低血清上皮樣細(xì)胞。潛伏期此時(shí)細(xì)胞有生長(zhǎng)話動(dòng)，而無(wú)細(xì)胞分裂。（2）生物因素：血清、培養(yǎng)液中的促附著因子。（5）培養(yǎng)液的溫度: 低溫會(huì)減低細(xì)胞的活動(dòng)，妨礙黏附和貼壁 。⑶衰退期:此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡。（3） 無(wú)污染。如：培養(yǎng)液、各種酶類(lèi)等。 （ C） 抗生素。4化學(xué)消毒法：利用消毒劑來(lái)消毒那些不能用物理方法消毒的物品和場(chǎng)地。污染空氣可侵入操作野，造成污染。胰蛋白酶液濃度越高，作用越強(qiáng)，但超過(guò)一定限度會(huì)損傷細(xì)胞。但膠原酶價(jià)格較高，大量使用將增加實(shí)驗(yàn)成本。3如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反．結(jié)晶就大，大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂。另外將受支原體污染的細(xì)胞放置在41℃作用5—10h．最長(zhǎng)不超過(guò)18h，以殺滅支原體．25. 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)測(cè)定方法1,細(xì)胞計(jì)數(shù)法2,臺(tái)盼蘭染色法3,MTT比色法4,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線法5,[3H]TdR([3H]胸腺嘧啶核苷）摻入法6,BrdU (5bromo2—deoxyuridine，5溴脫氧尿嘧啶核苷 ）摻入法26. 如何估計(jì)是否傳代及傳代的方式？估計(jì):(1)細(xì)胞沒(méi)有生長(zhǎng)到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急于傳代。在傳代期培養(yǎng)時(shí)應(yīng)注意：為保持二倍體細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞應(yīng)在傳代后早期凍存（不出10代內(nèi)凍存）。取材時(shí)應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作。(3)已過(guò)濾的消化液，800一1000rpm，低速離心5min后，去除上清，加含血清培養(yǎng)液，輕輕吹打形成細(xì)胞懸液。 對(duì)原代培養(yǎng)要及時(shí)觀察．發(fā)現(xiàn)細(xì)胞游出后要照像記錄。培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后，部分敏感細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢，部分細(xì)胞變圓，從瓶壁脫落。與傳統(tǒng)熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)， 成為當(dāng)代最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。前