09級細胞生物學(xué)技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 最先進的細胞定量分析技術(shù)。它不僅可測量細胞大小、內(nèi)部顆粒的性狀, 還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內(nèi)DNA、RNA含量等,可對群體細胞在單細胞水平上進行分析,培養(yǎng)細胞受支原體污染后，部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。3原代培養(yǎng)3—5d需換液一次．去除漂浮的組織塊和殘留的血細胞，因為已漂浮的組織塊及很多細胞碎片含有有毒物質(zhì)，影響原代細胞的生長，要及時清除。 對原代培養(yǎng)要及時觀察．發(fā)現(xiàn)細胞游出后要照像記錄。25ml培養(yǎng)瓶(）以20一30小塊為宜。(3)已過濾的消化液，800一1000rpm，低速離心5min后，去除上清，加含血清培養(yǎng)液，輕輕吹打形成細胞懸液。取材時應(yīng)盡量選用易培養(yǎng)的組織進行培養(yǎng)。取材時應(yīng)嚴(yán)格無菌操作。2 .半懸浮生長細胞傳代（Hela細胞）此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹 打法使細胞從瓶壁脫落下來，進行傳代。在傳代期培養(yǎng)時應(yīng)注意：為保持二倍體細胞性質(zhì)，細胞應(yīng)在傳代后早期凍存（不出10代內(nèi)凍存）。吹打細胞時動作要輕巧盡可能減少對細胞的損傷。另外將受支原體污染的細胞放置在41℃作用5—10h．最長不超過18h，以殺滅支原體．25. 培養(yǎng)細胞的生長測定方法1,細胞計數(shù)法2,臺盼蘭染色法3,MTT比色法4,細胞生長曲線法5,[3H]TdR([3H]胸腺嘧啶核苷）摻入法6,BrdU (5bromo2—deoxyuridine，5溴脫氧尿嘧啶核苷 ）摻入法26. 如何估計是否傳代及傳代的方式？估計:(1)細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急于傳代。 公式中乘以104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為： （長）（寬）（高）＝ 而 1ml＝1000mm3 24. 在細胞培養(yǎng)中如何防止污染？（1）使用抗生素清除細菌和真菌。（2）減少細胞被微生物污染的危險性。3如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反．結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂。4原代培養(yǎng)（primary culture）：從體內(nèi)取出細胞或組織的第一次培養(yǎng)。但膠原酶價格較高，大量使用將增加實驗成本。用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用 （1）EDTA液：常用濃度為 ％，配制時采用無Ca2+、Mg2+平衡鹽液溶解，高壓滅菌后即可使用。胰蛋白酶液濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。培養(yǎng)兩種以上細胞時，操作不規(guī)范、交叉使用吸管或營養(yǎng)液瓶等有可能導(dǎo)致細胞交叉污染。污染空氣可侵入操作野，造成污染。17. 你認為細胞培養(yǎng)中微生物污染主要是通過那些途徑導(dǎo)致的，并簡要說明。4化學(xué)消毒法：利用消毒劑來消毒那些不能用物理方法消毒的物品和場地。2. 溫?zé)嵯荆杭锤邏赫魵庀?，是一種使用最廣泛、效果最好的消毒方法。 （ C） 抗生素。動作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如：培養(yǎng)液、各種酶類等。④血清的滅活（消除補體活性）：56 ℃ ，30 分鐘。（3） 無污染。每個孔計數(shù)2次，得出細胞濃度平均值。⑶衰退期:此期細胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，細胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。8簡述體外培養(yǎng)細胞的分期？⑴原代培養(yǎng)期:取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng) 原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強，細胞克隆形成率低。（5）培養(yǎng)液的溫度: 低溫會減低細胞的活動，妨礙黏附和貼壁 。（2）減少接種時培養(yǎng)液的量：待細胞粘附和貼壁之后，再補充足夠的培養(yǎng)液。（2）生物因素：血清、培養(yǎng)液中的促附著因子。機制：接觸抑制、密度依賴性。潛伏期此時細胞有生長話動，而無細胞分裂。轉(zhuǎn)化與否：未轉(zhuǎn)化，成纖維樣，轉(zhuǎn)化后，可成上皮樣。血清，Hela：高血清成纖維細胞樣低血清上皮樣細胞。組織和細胞供體年齡：幼年個體比老年者易于培養(yǎng)，所有動物的胚胎組織都是最好的培養(yǎng)對象。培養(yǎng)條件。：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細胞類似的細胞來源：由中胚層間質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細胞；心肌，平滑肌，成骨細胞形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài) 胞體梭形或不規(guī)則三角形胞質(zhì)向外伸出2—： 排列成放射狀，漩渦狀 并不緊靠連成片， 細胞—細胞接觸易斷開而單獨行動,游離的單獨的成纖維樣細胞，(不定型)：本型細胞在支持物上散在生長，一般不連成片。來源：來源于外胚層，內(nèi)胚層細胞 如：皮膚及其衍生物 ；消化道，乳腺，肺泡 ；上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細胞。用于研究細胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對活細胞的影響。 在無菌條件下,從動物(植物也可)或在人體中取出組織或細胞,置于模擬體內(nèi)的生理環(huán)境中(無菌,適當(dāng)?shù)臏囟群鸵欢ǖ臓I養(yǎng)條件)使之生存和增殖生長的技術(shù)方法。 3體外培養(yǎng)細胞的分型 ？并說明各自的形態(tài)特點?分型:1 貼壁型細胞(上皮細胞型,成纖維細胞型,游走細胞型) 2懸浮型細胞. :僅形態(tài)上似體內(nèi)上皮細胞，實際上不完全等于體內(nèi)同名的細胞。生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動。優(yōu)點：生存空間大，提供數(shù)量大， 傳代方便(不需消化) ：觀察不方便 很多細胞不能懸浮生長(尤以正常細胞)4那些培養(yǎng)條件改變時，細胞形態(tài)可有變化？（見表一）組織和細胞供體年齡。促生長因子。應(yīng)了解所培養(yǎng)細胞的生物學(xué)形狀和特殊需求成分。生長狀態(tài)改變：懸浮或貼附：懸浮時圓形 ，貼附成纖維或上皮樣。細胞株平均在10分鐘～4小時貼壁。停止期（平臺期）：細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂。 6影響貼壁的因素和促進細胞粘附措施有哪些？1因素：（1）各種細胞強弱： (附著最強)巨噬細胞、成纖維細胞；上皮細胞、血細胞(最弱)。低溫：可抑制附著）2措施：（1）包被：對分化程度高、生長能力差的細胞，可在培養(yǎng)瓶皿表面包被有利于細胞粘附和生長的生物活性物質(zhì). 血清內(nèi)含有多種能夠促進細胞粘附的成分，細胞本身也可能產(chǎn)生一些粘附分子。如，培養(yǎng)液中的Ca2+含量過低時不利于細胞的粘附、貼壁和鋪展。此期一般持續(xù)1～4周。持續(xù)時間最長，其特 點是細胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型。⑵每隔24小時吸去3個孔的培養(yǎng)板，加入消化液，混懸細胞，計算細胞數(shù)目。（2） 細胞的生存環(huán)境：溫度: 37 ℃、O2 、CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCOpH: 、滲透壓。③優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細菌、支原體、病毒污染。？簡述過濾除菌的全過程？將液體或氣體用微孔慮膜過濾,使大于孔徑的的細菌等微生物顆粒阻留,達到除菌的目的.
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