【正文】 常用于不易高壓滅菌的物品。 （如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時(shí)仍要過火。 （B） 化學(xué)滅菌法（各種化學(xué)消毒劑）。時(shí)間30分鐘。如：培養(yǎng)液、各種酶類等。 5抗生素消毒：即抗生素滅菌，主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染。工作時(shí)不戴口罩或面對(duì)操作野大聲講話、咳嗽等使外界氣流過強(qiáng)。另外需要注意的是CO2溫箱．由于溫箱內(nèi)濕度大，溫度適宜，取存細(xì)胞時(shí)不慎將培養(yǎng)液漏出，易使細(xì)菌、霉菌孽生，而CO2溫箱內(nèi)是開放式培養(yǎng)．如不定期消毒,可形成污染. (3）操作：實(shí)驗(yàn)操作無菌觀念不強(qiáng)、動(dòng)作不準(zhǔn)確、使用污染的器具．或封瓶時(shí)不嚴(yán)，都可發(fā)生污染。？配制時(shí)需注意什么？（見表二）？應(yīng)如何配制?如何終止其活性？胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，從而使細(xì)胞分離。胰蛋白酶液消化時(shí)間：210分鐘。鈣、鎂離子和血清成分不會(huì)影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS或含血清的培養(yǎng)液配制，這樣實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便同時(shí)提高細(xì)胞成活率。2密度抑制（density inhibition）：細(xì)胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象3接觸抑制（contact inhibition）：細(xì)胞匯合相互接觸后失去運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。21．細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的基本原則是什么？1慢凍快融2當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。這是保存細(xì)胞的最主要目的。（5）避免有限細(xì)胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉(zhuǎn)化。 公式中乘以2因?yàn)榧?xì)胞懸液于染液是1：1稀釋。（2）用MRA（mycoplasma removal agent）處理細(xì)胞，每4天換一次液，連續(xù)處理15天清除支原體效果好。另外，早期傳代培養(yǎng)的細(xì)胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。細(xì)胞傳代過程需注意的問題：操作全過程注意無菌操作；胰酶消化時(shí)間要適度；吹打細(xì)胞時(shí)用力要適度，盡量減少氣泡。直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除l／2～2／3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。27．組織細(xì)胞取材及培養(yǎng)的基本要求取材的組織最好盡快培養(yǎng)。一般來講．胚胎組織較成熟個(gè)體的組織容易培 養(yǎng)．分化低的較分化高的組織容易生長(zhǎng)、腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。(2）在消化過程中．可隨時(shí)吸取少量消化液在鏡下觀察。(2)將剪切好的組織小塊．用眼科鑷送入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。在原代培養(yǎng)的1一2d內(nèi)要持別注意觀察，是否有細(xì)菌、霉菌的污染．一旦發(fā)現(xiàn)，要及時(shí)清除，以防給培養(yǎng)箱內(nèi)的其它細(xì)胞帶來污染。2在原代培養(yǎng)的1一2d內(nèi)要持別注意觀察，是否有細(xì)菌、霉菌的污染．一旦發(fā)現(xiàn)，要及時(shí)清除，以防給培養(yǎng)箱內(nèi)的其它細(xì)胞帶來污染。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。同時(shí)具有分析和分選細(xì)胞功能。能夠分類收集(分選)某一亞群細(xì)胞,分選純度＞95%。流式細(xì)胞儀的工作原理：待測(cè)樣品制成單個(gè)細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料對(duì)細(xì)胞（或表面抗原等）染色后放入上樣管中，在清潔氣體的壓力下將待測(cè)樣品壓入流動(dòng)室，與此同時(shí)，不含細(xì)胞的磷酸鹽緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形的流束，待測(cè)細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測(cè)區(qū)域。 待測(cè)樣品制成單個(gè)細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料對(duì)細(xì)胞（或表面抗原等）染色后放入上樣管中，在清潔氣體的壓力下將待測(cè)樣品壓入流動(dòng)室，與此同時(shí)，不含細(xì)胞的磷酸鹽緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形的流束，待測(cè)細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測(cè)區(qū)域。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出，形成細(xì)胞柱。方向的光電倍增管接收。計(jì)算機(jī)把所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理，將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上，也可以打印出來，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲(chǔ)在硬盤上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析。在與入射激光和液柱都垂直的方向設(shè)置有熒光測(cè)量系統(tǒng)，包括透鏡、光闌、濾片、檢測(cè)器等，將細(xì)胞的熒光信號(hào)變成電信號(hào)輸出到計(jì)算機(jī)，用專用軟件進(jìn)行分析。HLAB27基因表達(dá)在所有含核的細(xì)胞上，尤其是淋巴細(xì)胞的表面含量豐富。（見表三）？校準(zhǔn)儀器的軟件名稱？流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)顯示通常有哪幾種方式？、處理、分析，但由于數(shù)據(jù)大，又缺乏直觀性，不利于觀察各參數(shù)及其相互的關(guān)系。1分析速度快2 多參數(shù)3當(dāng)代最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)4精度高42. 在使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析時(shí)，為什么要進(jìn)行光譜重疊的校正？當(dāng)細(xì)胞攜帶兩種熒光素如PE和FITC, 受激光激發(fā)而發(fā)射出兩種不同波長(zhǎng)的熒光時(shí)，理論上，可選擇濾片使每種熒光僅被相應(yīng)的檢測(cè)器檢測(cè)到，而不會(huì)檢測(cè)到另一種熒光。磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。因此將AnnexinV與PI匹配使用，就可以將正常細(xì)胞、凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開主要是通過PI與細(xì)胞核DNA結(jié)合，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DNA含量。+和Mg178。45. 簡(jiǎn)述流式細(xì)胞術(shù)PI染色進(jìn)行細(xì)胞周期分析的原理? PI ,即碘化丙錠 ,可以與細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合 ,采用RNA抑制劑將RNA消化后 ,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到的與DNA結(jié)合的PI的熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量的多少。凋亡過程的紊亂，可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關(guān)系，如腫瘤、自身免疫性疾病、神經(jīng)退行性變及局部損傷等。5簡(jiǎn)述細(xì)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征有哪些？（見表四）①染色質(zhì)聚集、分塊、位于核膜上，胞質(zhì)凝縮，最后核斷裂， ②凋亡小體內(nèi)有結(jié)構(gòu)完整的細(xì)胞器，還有凝縮的染色體，可被鄰近細(xì)胞吞噬消化，因始終有膜封閉，沒有內(nèi)溶物釋放，故不會(huì)引起炎癥；③凋亡細(xì)胞中仍需要合成一些蛋白質(zhì)。暫時(shí)不觀察時(shí)，可用擋板遮蓋激發(fā)光源。使用帶有遮光罩的目鏡時(shí)可將其撥出使用，以防雜光進(jìn)人干擾。 光學(xué)系統(tǒng)主要包括目鏡、物鏡、聚光器、光闌及光源等部分。分辨率又稱“鑒別率”或“分辨本領(lǐng)”，是衡量顯微鏡性能的一個(gè)重要參數(shù)。5試論述細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法。形態(tài)學(xué)檢查 Ladders實(shí)驗(yàn) 流式細(xì)胞儀檢查 Annexin V聯(lián)合PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡。染色質(zhì)是凝聚在核膜下呈半月狀；細(xì)胞壞死呈絮狀?；蚪MDNA 細(xì)胞凋亡有控降解，電泳圖譜呈梯狀；細(xì)胞壞死隨機(jī)降解，電泳圖譜呈涂抹狀。12 / 12