【正文】 常用于不易高壓滅菌的物品。 （如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。 （B） 化學滅菌法（各種化學消毒劑）。時間30分鐘。如：培養(yǎng)液、各種酶類等。 5抗生素消毒：即抗生素滅菌，主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預防培養(yǎng)物污染。工作時不戴口罩或面對操作野大聲講話、咳嗽等使外界氣流過強。另外需要注意的是CO2溫箱．由于溫箱內濕度大，溫度適宜，取存細胞時不慎將培養(yǎng)液漏出，易使細菌、霉菌孽生，而CO2溫箱內是開放式培養(yǎng)．如不定期消毒,可形成污染. (3）操作：實驗操作無菌觀念不強、動作不準確、使用污染的器具．或封瓶時不嚴，都可發(fā)生污染。？配制時需注意什么？（見表二）？應如何配制?如何終止其活性？胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，從而使細胞分離。胰蛋白酶液消化時間：210分鐘。鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS或含血清的培養(yǎng)液配制，這樣實驗操作簡便同時提高細胞成活率。2密度抑制（density inhibition）：細胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象3接觸抑制（contact inhibition）：細胞匯合相互接觸后失去運動的現(xiàn)象。21．細胞凍存與復蘇的基本原則是什么？1慢凍快融2當細胞冷到零度以下，可以產生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，并在細胞內形成冰晶。這是保存細胞的最主要目的。（5）避免有限細胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉化。 公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1：1稀釋。（2）用MRA（mycoplasma removal agent）處理細胞，每4天換一次液，連續(xù)處理15天清除支原體效果好。另外，早期傳代培養(yǎng)的細胞較已經建系的培養(yǎng)消化時間相對較長。細胞傳代過程需注意的問題：操作全過程注意無菌操作；胰酶消化時間要適度；吹打細胞時用力要適度，盡量減少氣泡。直接傳代法：懸浮細胞沉淀在瓶壁時，將上清培養(yǎng)液去除l／2～2／3，然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。27．組織細胞取材及培養(yǎng)的基本要求取材的組織最好盡快培養(yǎng)。一般來講．胚胎組織較成熟個體的組織容易培 養(yǎng)．分化低的較分化高的組織容易生長、腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。(2）在消化過程中．可隨時吸取少量消化液在鏡下觀察。(2)將剪切好的組織小塊．用眼科鑷送入培養(yǎng)瓶內。在原代培養(yǎng)的1一2d內要持別注意觀察，是否有細菌、霉菌的污染．一旦發(fā)現(xiàn)，要及時清除，以防給培養(yǎng)箱內的其它細胞帶來污染。2在原代培養(yǎng)的1一2d內要持別注意觀察，是否有細菌、霉菌的污染．一旦發(fā)現(xiàn)，要及時清除，以防給培養(yǎng)箱內的其它細胞帶來污染。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。同時具有分析和分選細胞功能。能夠分類收集(分選)某一亞群細胞,分選純度＞95%。流式細胞儀的工作原理：待測樣品制成單個細胞的懸液，經特異性熒光染料對細胞（或表面抗原等）染色后放入上樣管中，在清潔氣體的壓力下將待測樣品壓入流動室，與此同時，不含細胞的磷酸鹽緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。 待測樣品制成單個細胞的懸液，經特異性熒光染料對細胞（或表面抗原等）染色后放入上樣管中，在清潔氣體的壓力下將待測樣品壓入流動室，與此同時，不含細胞的磷酸鹽緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱。方向的光電倍增管接收。計算機把所測量到的各種信號進行計算機處理，將分析結果顯示在計算機屏幕上，也可以打印出來，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進一步分析。在與入射激光和液柱都垂直的方向設置有熒光測量系統(tǒng)，包括透鏡、光闌、濾片、檢測器等，將細胞的熒光信號變成電信號輸出到計算機，用專用軟件進行分析。HLAB27基因表達在所有含核的細胞上，尤其是淋巴細胞的表面含量豐富。（見表三）？校準儀器的軟件名稱？流式細胞儀數(shù)據(jù)顯示通常有哪幾種方式？、處理、分析，但由于數(shù)據(jù)大，又缺乏直觀性，不利于觀察各參數(shù)及其相互的關系。1分析速度快2 多參數(shù)3當代最先進的細胞定量分析技術4精度高42. 在使用流式細胞儀進行分析時，為什么要進行光譜重疊的校正？當細胞攜帶兩種熒光素如PE和FITC, 受激光激發(fā)而發(fā)射出兩種不同波長的熒光時，理論上，可選擇濾片使每種熒光僅被相應的檢測器檢測到，而不會檢測到另一種熒光。磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。因此將AnnexinV與PI匹配使用，就可以將正常細胞、凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開主要是通過PI與細胞核DNA結合，測定細胞內DNA含量。+和Mg178。45. 簡述流式細胞術PI染色進行細胞周期分析的原理? PI ,即碘化丙錠 ,可以與細胞內DNA和RNA結合 ,采用RNA抑制劑將RNA消化后 ,通過流式細胞術檢測到的與DNA結合的PI的熒光強度直接反映了細胞內DNA含量的多少。凋亡過程的紊亂，可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關系，如腫瘤、自身免疫性疾病、神經退行性變及局部損傷等。5簡述細細胞凋亡的形態(tài)學特征有哪些？（見表四）①染色質聚集、分塊、位于核膜上，胞質凝縮，最后核斷裂， ②凋亡小體內有結構完整的細胞器，還有凝縮的染色體，可被鄰近細胞吞噬消化，因始終有膜封閉，沒有內溶物釋放，故不會引起炎癥；③凋亡細胞中仍需要合成一些蛋白質。暫時不觀察時，可用擋板遮蓋激發(fā)光源。使用帶有遮光罩的目鏡時可將其撥出使用，以防雜光進人干擾。 光學系統(tǒng)主要包括目鏡、物鏡、聚光器、光闌及光源等部分。分辨率又稱“鑒別率”或“分辨本領”，是衡量顯微鏡性能的一個重要參數(shù)。5試論述細胞凋亡的檢測方法。形態(tài)學檢查 Ladders實驗 流式細胞儀檢查 Annexin V聯(lián)合PI檢測細胞凋亡。染色質是凝聚在核膜下呈半月狀；細胞壞死呈絮狀。基因組DNA 細胞凋亡有控降解，電泳圖譜呈梯狀；細胞壞死隨機降解，電泳圖譜呈涂抹狀。12 / 12