【正文】 和巨噬細胞，在粘膜和全身淋巴組織誘發(fā)以 Th1 型應答為主的細胞免疫和體液免疫， APCs尤其是 DCs可能在其中起到了關鍵作用。 基因疫苗經黏膜和皮膚組織免疫的抗原呈遞 皮膚或者黏膜是具有高水平免疫監(jiān)視系統(tǒng)的組織， 黏膜淋巴組織的功能：參與粘膜局部免疫應答和產生分泌型 IgA。 常用的方法為氯化鈣共沉淀法和電穿孔法。 （ 4）化學合成 基因疫苗的構建 基因表達載體的組成： 復制原點 +啟動子 +目的基因 +終止子 +標記基因 為了保證抗原基因的定向正確插入，只有以正確的方向插入表達載體讀框啟動子下游才能表達抗原基因，故抗原基因兩端應具有不同的酶切位點，在設計時須注意這點。 ? 1995年 4月 69日，美國弗吉尼亞州。 ? 1992年 Tang等將表達人生長激素的基因質粒 DNA導入小鼠皮內，小鼠產生特異性抗體，從而提出了基因免疫的概念。 人們將多種滅活或減毒疫苗稱為 第一代疫苗 。 基因疫苗被稱為 第三代疫苗 。主題：核酸疫苗。 基因疫苗的構建 基因疫苗構建的基本途徑 基因疫苗的構建 一、構建基因疫苗的載體 載體是將抗原基因導入到機體細胞的必要工具。 感受態(tài)：細菌經過 CaCl2溶液處理和短暫熱激后，容易攝入外源 DNA，這種狀態(tài)稱為感受態(tài)。 （ 2）核酸水平的檢測： RNA印跡； RTPCR檢測?；蛞呙缃涍^黏膜免疫可以很好地激活 B細胞分泌 IgA，同時啟動 Th2細胞功能，但其對細胞免疫（尤其是 CTL細胞）活化不足，通過黏膜免疫獲得的保護作用不如通過肌肉免疫獲得的強烈。 核酸疫苗的優(yōu)缺點 優(yōu)點： 1 免疫保護力增強 2 制備簡單，省時省力 3 同種異株交叉保護 4 應用較安全 5 產生持久免疫應答 6 貯存、運輸方便 7 可用于防治腫瘤 缺點： 1 質粒 DNA可能誘導自身免疫反應 2 持續(xù)表達外源抗原可能產生一些不良后果 3 肌肉注射質粒后，僅有很少部分被肌細胞所攝取 4 影響核酸疫苗誘發(fā)機體免疫應答的因素很多 ５外源 DNA注入體內后，可能整合到宿主基因組上，使宿主細胞抑癌基因失活或癌基因活化，使宿主細胞轉化成癌細胞 核酸疫苗的應用現(xiàn)狀 ? 有關質粒 DNA疫苗在人類及動物產生預防和治療作用的研究報道不斷增加，應用范圍也逐漸擴大。 四 、 核酸疫苗誘導的免疫反應 核酸疫苗誘導的全身免疫應答反應 關于核酸疫苗誘導全身免疫應答反應的機制目前了解的還不十分清楚 ， 但其誘導過程可大致分為以下幾個階段： ① 疫苗的攝取 、 轉運及表達； ② 抗原的加工和提呈； ③ 淋巴細胞的活化； ④ 免疫效應細胞和分子的作用 。 IL4加強體液免疫 IL2能同時加強體液免疫和細胞免疫 集落刺激因子 與基因重組疫苗聯(lián)合應用 050010001500202225003000350040005d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationIFNr pg/ml+ +S+S+pcIL12 +S(ISS)細胞因子產生的動態(tài)變化 0200400600800100012005d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationIL4 pg/ml+ +s+S+p IL12 +S+ISS細胞因子產生的動態(tài)變化 024681 01 21 41 61 85 d 1 0 d 1 7 d 3 5 d 4 2 dd a y s a f t e r p r i m a r y i m m u n i z a t i o nnumber of splenocytes(10^7)p c D N A 3 . 1 + S + p c I L 1 2 p c D N A 3 . 1 + S ( I S S )p c D N A 3 . 1 + S p c D N A 3 . 1 +免疫鼠脾細胞的增殖反應 015d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationOD 450 nm+S(ISS)+S+S+pcIL12+血清特異性抗體的檢測結果 血清特異性抗體的檢測結果 02468101214165d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationnumber of splenocytes(10^7)+S+B7+S++B7+S+免疫鼠脾細胞的增殖反應 011Stimulation Index+ +S+S++B7 +S+B7免疫鼠脾細胞的增殖反應 00 . 10 . 20 . 30 . 40 . 50 . 60 . 70 . 80 . 95 d 1 0 d 1 7 d 3 5 d 4 2 dd a y s a f t e r p r i m a r y i m m u n i z a t i o nOD 450 nmp c D N A 3 . 1 + S + B 7p c D N A 3 . 1 + Sp c D N A 3 . 1 + S + p c D N A 3 . 1 + B 7p c D N A 3 . 1 +血清的抗 NP抗體的測定結果 血清的抗 NP抗體的測定結果 七 、 核酸疫苗的安全性問題 ① 局部反應原性和全身毒性研究