[基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)]核酸疫苗及免疫研究進(jìn)展(參考版)
2025-02-25 00:53本頁(yè)面
【正文】 其研究方向符合兒童計(jì)劃免疫“一種疫苗預(yù)防多種疾病”的目標(biāo)，具有廣泛的應(yīng)用前景。 其它不良反應(yīng) 進(jìn)行的 Ⅰ 期臨床試驗(yàn)表明 ， 未觀察到不可接受的不良反應(yīng) 。 ? 用各種構(gòu)建的質(zhì)粒載體進(jìn)行的質(zhì)粒 DNA的免疫并未發(fā)現(xiàn)抗 DNA抗體的產(chǎn)生。 關(guān)于自身免疫性疾病的研究 ? 潛在性誘導(dǎo)抗質(zhì)粒 DNA的免疫反應(yīng)是另一個(gè)必須關(guān)注的安全性問(wèn)題。 ? HBsAg轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行 DNA免疫 ， 使已經(jīng)建立的對(duì) HBsAg的特異性免疫耐受狀態(tài)被打破 ，使小鼠產(chǎn)生抗 HBsAg的特異性抗體 。 持續(xù)高表達(dá) 超免反應(yīng)發(fā)生 — 免疫抑制 — 其它病原感染。 一些事實(shí)已清楚地證明脾內(nèi)或口服裸 DNA可能導(dǎo)致整合 關(guān)于免疫耐受的研究 外源性抗原的持續(xù)表達(dá)可能產(chǎn)生不良后果：耐受性 、 自動(dòng)免疫 、 過(guò)敏反應(yīng) 、 超免反應(yīng)等 。 尚無(wú)證據(jù)證明以自身表達(dá)質(zhì)粒的形式存在于染色體外的外源 DNA能整合入宿主染色體中 。 IL4加強(qiáng)體液免疫 IL2能同時(shí)加強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫 集落刺激因子 與基因重組疫苗聯(lián)合應(yīng)用 050010001500202225003000350040005d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationIFNr pg/ml+ +S+S+pcIL12 +S(ISS)細(xì)胞因子產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化 0200400600800100012005d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationIL4 pg/ml+ +s+S+p IL12 +S+ISS細(xì)胞因子產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化 024681 01 21 41 61 85 d 1 0 d 1 7 d 3 5 d 4 2 dd a y s a f t e r p r i m a r y i m m u n i z a t i o nnumber of splenocytes(10^7)p c D N A 3 . 1 + S + p c I L 1 2 p c D N A 3 . 1 + S ( I S S )p c D N A 3 . 1 + S p c D N A 3 . 1 +免疫鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng) 015d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationOD 450 nm+S(ISS)+S+S+pcIL12+血清特異性抗體的檢測(cè)結(jié)果 血清特異性抗體的檢測(cè)結(jié)果 02468101214165d 10d 17d 35d 42ddays after primary immunizationnumber of splenocytes(10^7)+S+B7+S++B7+S+免疫鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng) 011Stimulation Index+ +S+S++B7 +S+B7免疫鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng) 00 . 10 . 20 . 30 . 40 . 50 . 60 . 70 . 80 . 95 d 1 0 d 1 7 d 3 5 d 4 2 dd a y s a f t e r p r i m a r y i m m u n i z a t i o nOD 450 nmp c D N A 3 . 1 + S + B 7p c D N A 3 . 1 + Sp c D N A 3 . 1 + S + p c D N A 3 . 1 + B 7p c D N A 3 . 1 +血清的抗 NP抗體的測(cè)定結(jié)果 血清的抗 NP抗體的測(cè)定結(jié)果 七 、 核酸疫苗的安全性問(wèn)題 ① 局部反應(yīng)原性和全身毒性研究，即考慮 DNA疫苗是否有免疫毒性作用，機(jī)體是否對(duì)疫苗編碼的抗原產(chǎn)生耐受性，或是否導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)，還應(yīng)對(duì)疫苗中污染的細(xì)菌蛋白是否誘發(fā)抗體產(chǎn)生進(jìn)行評(píng)估； ②遺傳性作用，即質(zhì)粒 DNA是否與宿主基因組的整合問(wèn)題； ③生殖毒性研究，可采用 PCR方法對(duì)經(jīng)質(zhì)粒 DNA疫苗免疫的雄性或雌性動(dòng)物的性腺 DNA提取物進(jìn)行檢測(cè) ④致腫瘤性研究，如果質(zhì)粒 DNA疫苗構(gòu)建具有與人的基因組同源的 DNA序列，或其載體含有已知的潛在致癌基因序列時(shí)，需展開(kāi)這方面的研究。 間隔 2周 細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化 常規(guī)方法分離脾細(xì)胞 ， 濃度 1 107 24孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入脾細(xì)胞懸液 ， NP10?l(同時(shí)設(shè)空白對(duì)照孔 ， ConA刺激孔 )均設(shè) 3個(gè)復(fù)孔 37℃ 、 5%CO2孵箱培養(yǎng) 48小時(shí)后 收集脾細(xì)胞上清液 ， 貯于 70℃ ， 統(tǒng)一用 ELISA kits 檢測(cè) IL4和 IFN? 分別于免疫后 5d, 10d, 17d, 35d,42d每組處死 3只小鼠 淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng) : 脾細(xì)胞取自初次免疫后 42d的免疫鼠 以重組的核蛋白刺激免疫小鼠的脾細(xì)胞 陰性對(duì)照孔和陽(yáng)性對(duì)照孔 (ConA) 用 MTT法檢測(cè)脾細(xì)胞的增殖反應(yīng) ， 計(jì)算刺激指數(shù) （ SI） 常規(guī)方法分離脾細(xì)胞 ,濃度調(diào)整至 2 106 免疫鼠血清的抗 NP抗體的測(cè)定 : 免 疫 前 和 免 疫 后 5d, 10d, 17d, 35d,42d經(jīng)尾靜脈采血 N=6/group 以被檢標(biāo)本復(fù)孔 （ 3孔 ） OD值與免疫前血清 （ 陰性對(duì)照 ）的比值 ≥ 。 間接免疫熒光法 重組質(zhì)粒 pTARGEThanS體外瞬間表達(dá) : 核蛋白的瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果 作為 DNA免疫的注射樣品 。 多肽合成疫苗的核酸推導(dǎo)序列作用核酸疫苗的候選基因 從病原體亞單位成分中篩選保護(hù)性抗原及編碼基因 3． 1 免疫篩選法
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1