【正文】 核酸中核糖僅一種構(gòu)型 ： β D型 構(gòu)象 (conformation) 化合物內(nèi)可以自由轉(zhuǎn)動的單鍵上的原子或基團(tuán) ,繞單鍵旋轉(zhuǎn)或隨單鍵扭轉(zhuǎn) ,產(chǎn)生幾種不同的空間排列形式。 C) rA,rG 1M HCl 60min rC, rU 12M HClO4 60min ? 堿 DNA 不作用 RNA 鄰接基團(tuán)參與效應(yīng) ,生成磷酸 基轉(zhuǎn)移中間物 ,水解。 b. 紫外光譜鑒定 ? 溶液樣品在 220290nm 波長內(nèi)掃描 , 確定 λmax and λmin , 對照參數(shù) (特定 pH )。 ? Base 與 Ns 吸收值差異大 Ns~dNs~Nm Ns~Nt~dNt ? Gua類在酸性時 ,UV下蘭色熒光 ,光譜曲線有 肩。 OH R– P– O– CH2– CH2– Z (–CHO, C=O , –HC=N ) O α β DNA and RNA 化學(xué)法測序 主鏈斷開 3. 堿基上反應(yīng) a. 烷基化反應(yīng) (CH3 ) 堿基上除 Pu N9 , Py N1外 ,所有 N和 O原子 均可因親電攻擊而甲基化。 ? 內(nèi)式構(gòu)象 (endo)偏離平面的方向和 C5’同向 ? 外式構(gòu)象 (exo) 偏離平面的方向和 C5’反向 1. 信封式 (Envelope, E ) 糖環(huán)的 C 2’或 C 3’ 1個原子偏離平面的折疊 C2’endo ( 2E ) C3’endo ( 3E ) C2’exo ( E2 ) C3’exo ( E3 ) 內(nèi)式 外式 側(cè)視圖 2. 扭轉(zhuǎn)式 ( Twist, T ) 糖環(huán)的 C2’ 和 C3’ 兩個原子都偏離糖平面 ,而且取方向相反的折疊。 酮式 烯醇式 氨基 亞胺 N糖苷鍵 C1 與嘧啶 N1 連接 C1 與嘌呤 N9 連接 oligo 表示法 poly U 均聚物 poly (dAdT) 交替排列 poly (dA ]) 二聚體 NmpNp 3. 糖苷鍵不同 假尿苷 ψ (tRNA rRNA) C5C1’ 糖苷鍵 4. 修飾符號 m1A m7G Cm Ψm m2G m3 G 2 5. 分布 a. RNA ~70 ? mRNA ( hnRNA mRNA ) 5’Cap: m7G Nm 分子內(nèi) : m6A m5C ? rRNA 原核 m5C 真核 Nm mN Ψ 高度修飾成分 ( m1ncp3Ψ ) Hela cell 28S rRNA 65Nm ( 70 ) 18S rRNA 40Nm 6mN ? tRNA 60余種分布在環(huán)區(qū) anticodon loop 高度修飾 Q W ? SnRNA uRNA 5’end Cap m3 G ? 稀有堿基的形成 酶催化 CH3 堿基交換 Q tRNA鳥嘌呤 糖苷轉(zhuǎn)移酶 G34 (tRNA) Q34 (tRNA) Q Gua N 糖苷鍵打斷、重建 b. DNA ? ~10 種 甲基化 ? 形成 合成時 om5dC參入 phage T 合成后甲基化 m5dC m6dA m4dC DNA 甲基化酶 S腺苷甲硫氨酸（甲基供體） a. 原核生物 DNA甲基化 ? 限制修飾系統(tǒng) ? DNA甲基化與復(fù)制 E. coli dam G *ATC dcm C *CA/TGG 完全甲基化 oriC 復(fù)制活性 半甲基化 oriC 抑制復(fù)制活性 oriC, dna 甲基化速度與復(fù)制循環(huán) 半甲基化 oriC 與膜結(jié)合抑制復(fù)制 (抑制劑 ) * dam– 半甲基化產(chǎn)物積累 DNA甲基化 ? 甲基化在兩條鏈上 , 對稱分布 真核生物 5’mCpG3’ 植物 5’mCNG3’ dC mdC 影響 DNA蛋白質(zhì) 相互作用 ? 甲基化格式具有組織專一性 pattern of methylation 格式變化 : 配子發(fā)生時期 , 胚胎發(fā)育早 期 ,病毒感染 格式維持 :DNA甲基化酶維持配子和體 細(xì)胞甲基化狀態(tài) 甲基化格式的維持 C*CGG CCGG CCGG 甲基化格式的限制性內(nèi)切酶分析 ?甲基化與基因表達(dá) 雞珠蛋白基因的組織特異性分析 (Mspl Hpall) CpG 表達(dá) (紅細(xì)胞） mCpG 不表達(dá)（腎、腦 …… ) 肌動蛋白 ( actin gene)表達(dá) 高速率 轉(zhuǎn)錄