【正文】 成纖維細胞 低速率 轉錄 ? Promoter CpG 甲基化與轉錄 γ globin gene –200 — +90 有甲基化基團 mCpG 轉錄受阻 除去部分 mCpG 轉錄受阻 除去所有 CpG 轉錄 5氮胞苷抑制甲基化 ,瞬時去甲基化 5NC ? 成纖維細胞 肌肉細胞 ( 多核 ,有條紋 , 可收縮 ) ?甲基化與小鼠胚胎發(fā)育 knock out 甲基轉移酶 gene C 胚胎發(fā)育早期 甲基化格式變換 ,其后細胞內 DNA維持特定的甲基化狀態(tài) 配子發(fā)生期 ,不同性別配子的甲基化格式是特定的。 下一代配子保持相同格式 Igf2 gene IGFⅡ 胰島素 like生長 因子依賴于父本表達 Igf2R gene IGFⅡR 胰島素 like生長 因子受體依賴于母本表達 一條 X染色體的失活 ? 甲基化格式的建立、維持和改變 從無到有 (de novo)甲基化 雙鏈相對 CpG mCpG 確立新格式 甲基化的維持 脫甲基 被動 復制后不再甲基化 主動 甲基轉移 堿基切除修復 ? CpGrich islands 基因組中存在異常非甲基化 CpG順序簇 高含量 C+G 高頻率 CG dimer (10/100bp ) 分布不均 , 長 12 kb， 間隔 ~100 kb 非甲基化 –CpG 存在 ： housekeeping genes tissues specific genes 5’ 啟動子 ——轉錄區(qū) 腺嘌呤磷酸核糖 轉移酶 CpG密度 1/100bp CpG密度 10/100bp –100 ~ 300 1. 二氫葉酸還原酶基因 2. 次黃嘌呤轉磷酸核糖酶基因 3. 核糖體蛋白質基因 1 2 3 CG mCG 抑制轉錄的蛋白質 MeCP1 *CpG 成簇 MeCP2 *CpG DNA甲基化有助于基因關閉 五 . 核酸及其化學組分的化學反應 磷酸二酯鍵 , 磷酸單酯鍵 , N糖苷鍵 a. 酶水解 b. 酸堿水解 ? 磷酸二酯鍵 ? 酸 熱強酸 dA,dG 30mi （ 100176。 ? N糖苷鍵 堿穩(wěn)定 酸不穩(wěn)定 DNA RNA dNs Ns 嘌呤 Ns 嘧啶 Ns 酸堿作用比較 DNA RNA 堿 / 2’ or 3’Nt 產物 酸 Pu, Py, Pu, PyNt, 多聚核糖 P碎片 碎片 磷酸二酯鍵 嘧啶糖苷鍵 穩(wěn) 大 ? ? 定 ? 嘧啶糖苷鍵 磷酸二酯鍵 性 小 ? ? 嘌呤糖苷鍵 嘌呤糖苷鍵 2. β消除反應 連接磷酸基團的 βC 原子上有強的吸電子基團存在時 , 引起 αC 原子和 O 原子間的鍵斷裂。 ? 溫和 ( Soft ) 烷化劑 硫酸二甲酯 甲基硫烷 烷基化物 DMS MMS MeI Me N GN7 AN1 CN3 TN3 DMS作用于 dsDNA AN3(Me) , 阻止 DNA pol. ? 強 (Hard) 烷化劑 N甲基 N亞硝基脲 (MNU) N乙基 N亞硝基脲 (ENU) Me N , O 核酸 50% 磷酸酯烷化 烷化劑直接致癌 DMS GO6 : GN7 = : 1 MNU GO6 : GN7 = : 1 ( 肝 ) GO6 : GN7 = : 1 ( 腦 ) GN7(Me)不改變 G:C配對 GO6(Me)不影響 DNA pol,但改變堿基對 , G T b. 鹵化反應 嘧啶 5 位 5FU 抗癌藥 鹵素分子 嘌呤 8 位 8BrPu 標記 c. 與醛類反應 堿基的 環(huán)外 –NH2 AMP: N6NH2 GMP: N2NH2 甲醛是 DNA不可逆變性劑 ?鑒定 ssDNA or dsDNA ?破壞 RNA高級結構 ， 消除結構對電泳遷移 率的影響 d. 核糖上的反應 ? 核糖的氧化反應 核糖的 2’， 3’順二醇 被高碘酸 ( HIO4)氧化成 順二醛 ，胺催化 β 消除反應 ，同時堿基脫落 , 生成磷酸，堿基和糖碎片?？捎枚ㄌ欠ū壬珳y定 DNA or RNA 含量。 20種 3’ Nt, 22種 5’ Nt, 40種 Ns, 14種抗水 解 NmNp dimer. AmGp ~GmAp CmUp ~ UmCp 2. 鑒定 a. 標準品對照 (電泳 ,層析 ) UV吸收檢出 吸收 UV藍紫色斑點 , G藍色熒光 , D無吸