分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-展示頁(yè)
2024-08-30 20:31本頁(yè)面
【正文】 PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù) ?ＰＣＲ技術(shù)實(shí)際上是在模板ＤＮＡ， 引物和４種脫氧核苷酸存在的條件下依賴于ＤＮＡ聚合酶的酶促合反應(yīng)，ＰＣＲ技術(shù)的特異性取決于引物和模板ＤＮＡ結(jié)合的特異性。 1. 本實(shí)驗(yàn)中所用到的各試劑的作用是什么 ? CTAB, 氯仿 , 異丙醇 , 75%乙醇 , EDTA 2．提取基因組 DNA的方法有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？ 七、問(wèn) 題 一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘? ? 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase chain reaction)簡(jiǎn)稱ＰＣＲ技術(shù) ，是８０年代中期發(fā)展起來(lái)的一種體外擴(kuò)增特異ＤＮＡ片段的技術(shù) 。 （ 2）移液器的使用。l TE(含 RNase)緩沖 液，使 DNA溶解，置于 37℃ 恒溫箱約15 h，使 RNA消解； （ 15）置于 20℃ 保存、備用。l 5 M的醋酸鈉，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，用手指彈管尖，使 沉淀與管底的 DNA塊狀物浮游于液體中； （ 9） 10000 rpm離心 1 min后，立即倒掉液體，注意勿 將白色 DNA沉淀倒出，將離心管倒立于鋪開(kāi)的紙巾上； （ 11）放置 30 min，使 DNA塊狀物的不純物溶解； （ 12） 10000 rpm離心 1 min后，倒掉液體， 再加入 800 181。l的異丙醇加入另一新的滅菌離心管中； （ 8） 10 000 rpm離心 1 min后，移液器輕輕地吸取上清夜， 轉(zhuǎn)入含有異丙醇的離心管內(nèi)，將離心管慢慢上下?lián)u動(dòng) 30 sec，使異丙醇與水層充分混合至能見(jiàn)到 DNA絮狀物； （ 10） 60 sec后，直立離心管，加入 720 181。 五、實(shí)驗(yàn)步驟 1. DNA的提取 （ 1） 2%CTAB抽提緩沖液在 65℃ 水浴中預(yù)熱。上清液中加入無(wú)水乙醇使 DNA沉淀，沉淀 DNA溶于 TE溶液中，即得植物總 DNA溶液。 十二烷基肌酸鈉 (sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化銨(hexadyltrimethyl ammomum bromide，簡(jiǎn)稱為 CTAB)、十二烷基硫酸鈉 (sodium dodecyl sulfate，簡(jiǎn)稱 SDS)等離子型表面活性劑，能溶解細(xì)胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使 DNA得以游離出來(lái)?？梢哉f(shuō)某特定物種的基因組，包含了該物種生長(zhǎng)，發(fā)育，繁殖等各項(xiàng)生理活動(dòng)的幾乎全部信息量，因而對(duì)真核細(xì)胞基因組的結(jié)構(gòu)，組成，以及表達(dá)調(diào)控的研究是至關(guān)重要的，而研究的起點(diǎn)就是要獲得純度高－不含蛋白質(zhì)、糖類、酚、氯仿等污染；得率好－以便有足夠量用于分析；基因組相對(duì)完整－－斷裂的基因組以便用于以后ＰＣＲ分析， RFLP分析，基因文庫(kù)的構(gòu)建，基因探測(cè)等的研究。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 2022年 3月 實(shí)驗(yàn)一 植物基因組 DNA的提取 實(shí)驗(yàn)二 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ( polymerase chain reaction, PCR) 基因擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠 電泳檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)三 植物總 RNA的提取 實(shí)驗(yàn)四 蛋白質(zhì)印跡 ? 高等動(dòng)物，高等植物的基因組相當(dāng)寵大， 如人類細(xì)胞基因組由 30億個(gè)堿基對(duì)組成，果蠅基因組有１．４ １０８?jìng)€(gè)堿基對(duì)，水稻基因組有１．４ １０９個(gè)堿基對(duì)。真核細(xì)胞基因組中，約１萬(wàn)－１．５萬(wàn)個(gè)可表達(dá)的結(jié)構(gòu)基因，其它大量存在的是調(diào)控序列和內(nèi)含子序列。 實(shí)驗(yàn)一 植物基因組 DNA的提取 一 . 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘? ?真核細(xì)胞基因組在提取過(guò)程中一般有以下幾步，首先是機(jī)械法破細(xì)胞抽提；然后去除蛋白質(zhì)，糖類等細(xì)胞內(nèi)雜質(zhì)污染；最后純化出ＤＮＡ，由于真核細(xì)胞基因組較大，在操作中應(yīng)注意動(dòng)作輕柔，且在低溫下進(jìn)行，
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