分子生物學(xué)實驗(參考版)
2024-08-26 20:31本頁面
【正文】 2． RNA酶是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶類 ， 除了細胞內(nèi)源 RNA酶外 ， 外界環(huán)境中均存在 RNA酶 ， 所以操作時應(yīng)戴手套 ， 并注意時刻換新手套 。 將 RNA樣品加到凝膠點樣孔中 ， 在 5 V/cm條件下電泳 30 min， 然后在 EB中染色 1520 min， 在紫外燈下觀察提取的 RNA的質(zhì)量 。 RNA 2 μl 甲醛 μl 甲酰胺 μl 10 MOPS 2 μl RNA Loading Buffer 2 μl 滅菌的 DEPC 水 4 μl 混合液輕輕混勻并離心，放于 65℃ 下溫育 5 min后，置于冰上。 14. 將沉淀 RNA室溫下稍干燥。 12. 4℃ ， 13000 r/min，離心 20 min。 10. 4℃ ， 13000 r/min，離心 6 min。 8. 4℃ ， 13000 r/min，離心 15 min。 6. 棄上清，在沉淀中加入 1 mL 4 mol/L LiCl，使其溶解。 5. 4℃ ， 8000 r/min， 離心 13 min。 3. 棄沉淀 ， 取上清至另一干凈無菌離心管中 。 加入 4 mol/L異硫氰酸胍 4 mL 苯酚 3 mL 2 mol/L NaAc (pH ) mL 氯仿 mL 混勻 ， 冰浴放置 30 min。 3. 5ΧMOPS 電泳緩沖液 (pH ) MOPS mol/L NaAc 40 mmol/L EDTA 5 mmol/L 四 、 實驗步驟 （ 一 ） 總 RNA的提取 （ 方案一 ） 1. 實驗前 10天左右播種水稻種子 ， 在 34葉期 ， 剪取 g幼葉 。 1. 焦碳酸二乙酯 (DEPC) 2. 嗎啉代丙烷磺酸 (MOPS) 3. 異硫氰酸胍 4. 醋酸鈉 (NaAc) 5. 氯仿 6. 苯酚 7. 甲醛 8. 乙醇 9. 乙二胺四乙酸 (EDTA) 10. 瓊脂糖 11. 異丙醇 (三 ) 試劑配方 1. % DEPC水 DEPC 加入 100 ml三蒸水中 ， 振搖過夜 ， 再濕熱滅菌 。 （ 5）底物溶液（ ）： 25mg 四氯奈酚，加 5mL 甲醇溶解 后，加 10ml 在 30℃ 水浴中溫浴的 TBS 溶液，混合后再加 50mlTBS，然后再加入 10μl 30% 過氧化氫立即使用。 （ 3）抗體溶液：牛血清白蛋白質(zhì) TBS 溶液， 1%BSATBS。 試劑 （ 1） TBS 要 TrisHCl NaCl 緩沖液： 20mml/L TrisHCl， 500mmol/LNaCl， PH： 。 內(nèi)容：本實驗采用雞卵清白蛋白為材料，對此蛋白質(zhì)進行 SDS— PAGE電泳后，用電轉(zhuǎn)移法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄 膜上，將預(yù)先制備好的雞蛋清免疫而成的抗血清，作為 初級抗體，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔為第二抗體， 在底物存在下，通過顯色電泳條帶，測定蛋白質(zhì)性質(zhì)。 實驗三 RNA提取 三 、 儀器 、 藥品與試劑配方 (一 ) 儀器 1． 低溫離心機 2． 分光光度計 3． 瓊脂糖膠電泳系統(tǒng) ， 用前先用 1% Na OH溶
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