醫(yī)學(xué)]20xx生化與分子生物學(xué)實(shí)用技術(shù)-展示頁
2025-01-13 05:54本頁面
【正文】 為 載 體 的 DNA 克 隆 過 程 目 錄 ?載 體 ? 定義： 能夠攜帶外源基因并且具有自主復(fù)制能力的 DNA,是將目的 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的工具。 ? DNA克隆 技術(shù)水平： 分子克隆 (molecular clone)即 DNA 克隆 細(xì)胞克隆 個(gè)體克?。▌?dòng)物或植物） DNA克隆 應(yīng)用酶學(xué)的方法 ， 在體外將各種來源的遺傳物質(zhì) （ 同源的或異源的 、 原核的或真核的 、 天然的或人工的 DNA） 與載體 DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的 DNA分子 —— 復(fù)制子 (replicon)， 繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞 ， 篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 ， 再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一DNA 分子 ， 也稱基因克隆或重組 DNA (rebinant DNA) 。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)總體設(shè)計(jì) ? 時(shí)間：周二 8： 30~10:00 ? 地點(diǎn)： 309室 ? 內(nèi)容：講授： DNA的實(shí)驗(yàn)方案 —— cDNA mRNA 提取、 PCR(酶切位點(diǎn)） 實(shí)驗(yàn)：上午 提取 2. PCR 下午 3. 電泳 (分組操作） ? 時(shí)間：周三 ? 地點(diǎn)： 309室 ? 實(shí)驗(yàn)：上午 （分組操作） （分組操作） 下午 （分組操作） ? 時(shí)間：周四 ? 地點(diǎn)： 309室 ? 實(shí)驗(yàn)：下午：質(zhì)粒提?。ǚ纸M操作） 酶切電泳（略） ? 主要知識(shí)點(diǎn)：基因重組的概念及過程；用于重組 DNA技術(shù)的理想載體應(yīng)該具備的特點(diǎn)；獲得目的基因的途徑；真核表達(dá)體系的優(yōu)點(diǎn)；常用真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的種類； RTPCR的基本實(shí)驗(yàn)步驟（包括PCR）；限制性內(nèi)切酶的特點(diǎn) 重組 DNA技術(shù) Rebinant DNA Technology ? 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone):來自同一始祖的相同副本或 拷貝的集合。 獲取同一拷貝的過程稱為克隆化 (cloning)， 即 無性繁殖 。 目的 ① 分離獲得某一感興趣的基因或 DNA ② 獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物（蛋白質(zhì)） 基因工程 (geic engineering) —— 實(shí)現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關(guān)的工作稱 基因工程 ，又稱重組 DNA工藝學(xué)。 在重組 DNA技術(shù)中，常用基因載體有兩種類型： 克隆載體 表達(dá)載體 ?載體的特點(diǎn) ? 具有自主復(fù)制能力，保證重組 DNA分子可以在宿主細(xì)胞內(nèi)得到擴(kuò)增； ? 具有較多的拷貝數(shù)，易與宿主細(xì)胞的染色體 DNA分開，便于分離提純； ? 具有一個(gè)或多個(gè)篩選標(biāo)記（如對(duì)抗生素的抗性、營養(yǎng)缺陷型或顯色表型反應(yīng)等），便于重組體的篩選和鑒定； ? 有克隆位點(diǎn)（外源 DNA插入點(diǎn)），常具有多個(gè)單一酶切位點(diǎn)，稱為多克隆位點(diǎn)，便于目的基因的克??； ? 分子量相對(duì)較小，易于操作，以容納較大的外
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