【正文】 的小鼠卵母細(xì)胞體外成熟過程中的超微結(jié)構(gòu)變化，目的是在亞細(xì)胞水平上尋找由于卵丘細(xì)胞的去除而導(dǎo)致卵母細(xì)胞質(zhì)量降低的原因?？梢姡懵咽且活惿形闯墒旒蹿呌谕嘶穆炎?，不能正常受精及進(jìn)一步發(fā)育。因此，需要進(jìn)一步研究來確定卵丘擴(kuò)展與卵母細(xì)胞成熟是否有關(guān)系 . 響 卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞層數(shù)是影響卵母細(xì)胞成熟的重要因素。一般絕大多數(shù)的 1級(jí)成熟卵和多數(shù)的 2,級(jí)成熟卵均已達(dá)到成熟狀態(tài)，排出第一極體 . 卵丘擴(kuò)展與卵母細(xì)胞成熟之間的關(guān)系很復(fù)雜。 ，添加卵丘細(xì)胞 ( 106個(gè)／ mL)可以促進(jìn)牛有完整放射冠的卵母細(xì)胞的發(fā)育，但在培養(yǎng)液中，添加與COCs中卵丘細(xì)胞濃度相同的卵丘細(xì)胞數(shù)（ 106個(gè)／ mL）對(duì)于裸卵的發(fā)育無作用， ～ 106個(gè)卵丘細(xì)胞／ mL對(duì)于帶有完整縫隙連接的卵母細(xì)胞的體外成熟效果最好。如果兩者間縫隙連接過早破壞，卵母細(xì)胞可能停止發(fā)育 ［ 2］ 。在這些卵泡細(xì)胞內(nèi)，線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富。 NGF 也是豬卵母細(xì)胞體外成熟過程中重要的調(diào)節(jié)物質(zhì)之一，能影響豬卵母細(xì)胞成熟的動(dòng)力學(xué)，加快進(jìn)入 M11 期。 豬卵泡液 (pig follicular fluid， pFF)是豬卵母細(xì)胞發(fā)育的微環(huán)境，對(duì)卵母細(xì)胞的成熟有著重要的調(diào)節(jié)作用，主要表現(xiàn)在提高豬卵母細(xì)胞成熟的質(zhì)量并增加胚胎的發(fā)育能力。蔡令波等在培養(yǎng)后期去除促性腺激素也得出了相似結(jié)果。s 液中 Lalantha等人認(rèn)為在不添加蛋白質(zhì)添加物的情況下 TCM199 更有利于卵母細(xì)胞的核成熟，而在Waymouth基礎(chǔ)液中成熟的卵母細(xì)胞其核成熟率雄原核形成率和囊胚發(fā)育率較低。相對(duì)于普通的單皿培養(yǎng)法而言，微滴培養(yǎng)法和套皿培養(yǎng)法可以更好的保持細(xì)胞發(fā)育所需要的微環(huán)境，同時(shí)減少微生物的污染。此外，培養(yǎng)箱所用的水的純度和高度無菌也是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵性因素。 A 級(jí) ： 卵丘細(xì)胞在 3 層或 3層以上。相對(duì)于其他哺乳動(dòng)物而言，豬卵母細(xì)胞對(duì)溫度的敏感度較高，較高或較低都會(huì)直接影響到體外成熟的效果，一般來講，豬卵巢的保存溫度在 28~35℃ ，文國(guó)藝等研究表明，當(dāng)卵巢的保存溫度低于 25℃ ，豬卵母細(xì)胞體外成熟收到明顯的影響并進(jìn)而影響到受精的結(jié)果 。反之，取自仔豬、處女豬、老母豬及老弱病殘豬的卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)效果則較差。燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說 明 書 2 有些細(xì)胞質(zhì)成熟過程依賴于細(xì)胞核成熟。卵母細(xì)胞的體外成熟包括細(xì)胞核的成熟、細(xì)胞質(zhì)的成熟、卵丘細(xì)胞的成熟、透明帶的成熟以及其卵丘 卵母細(xì)胞復(fù)合體的發(fā)育成熟等一系列復(fù)雜的變化過程，主要表現(xiàn)在細(xì)胞核成熟和細(xì)胞質(zhì)成熟兩個(gè)方面。 ............................................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 ........................................................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 ............................................................................1 2. 影響豬卵母細(xì)胞體外成熟的因素 ..................................................................2 ...........................錯(cuò)誤 !未定義書簽。本設(shè)計(jì)主要探討卵丘細(xì)胞對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。通過本次設(shè)計(jì)，擬定探討卵丘細(xì)胞的存在和不同形態(tài)對(duì)豬卵母細(xì)胞的成熟率的影響。 .........................................................................3 .......................................................3 體外成熟培養(yǎng)條件 ............................................................................4 .............................................................................4 .............................................................................4 .......................................................4 .......................................................................................4 ..................................................................................................5 ..................................................................................................5 ..............................................................................................6 ....................................................................................6 ............................................................7 聯(lián)系 ....................7 ...........................................................8 ....................................................9 ...................... 10 第二部分 課程設(shè)計(jì)部分 .........................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 .......................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 ................................................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 細(xì)胞質(zhì)的成熟包括細(xì)胞器的變化和細(xì)胞基質(zhì)的變化，皮質(zhì)顆粒在胞質(zhì)合成后，逐漸遷移到質(zhì)膜下的皮質(zhì)區(qū)。 在卵母細(xì)胞的成熟過程中，有很多化學(xué)物質(zhì)及因子參與反應(yīng)，因此，只有當(dāng)體外成熟條件與體內(nèi)卵母細(xì)胞發(fā)育所需要的環(huán)境非常接近時(shí)，才能獲得較高的成熟率，從而為進(jìn)一步的科研工 作提供優(yōu)質(zhì)大量成熟的卵母細(xì)胞。崔亞利等認(rèn)為豬卵泡期卵母細(xì)胞的培養(yǎng)效果要高于黃體期，但差異不顯著。韓毅冰等也證明小直徑卵泡卵母細(xì)胞 (1~2 mm)成熟率不如大直徑卵泡卵母細(xì)胞（ 2~6mm）。 A 級(jí)卵母細(xì)胞的培養(yǎng)效果要優(yōu)于 B 級(jí)和 C 級(jí)。多數(shù)培養(yǎng)基在配制前都已將 pH 值調(diào)好，并具有一定的緩沖能力，因此， 5%CO2 則剛好是維持 pH 所必需。豬卵母細(xì)胞的 IVM 液有 Whitten39。 在卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系中， FSH、 LH 有利于改變卵丘細(xì)胞的代謝機(jī)能，并阻斷卵丘細(xì)胞通過胞間連接向卵母細(xì)胞分泌減數(shù)分裂抑制因子的途徑，從而使卵母細(xì)胞恢復(fù)成熟分裂過程 。蔡令波等曾研究表明發(fā)情牛血清（ Estrus cows serum， ECS）較新生犢牛血清（ Newborn Calf Serum， NCS）更有利于豬卵母細(xì)胞體外成熟。 Vatzias 等研究發(fā)現(xiàn)冷凍卵泡液在促進(jìn)卵母細(xì)胞的成熟、降低多精受精方面優(yōu)于新鮮卵泡液，孟慶剛等認(rèn)為在激素存在的條件下， pFF 具有促進(jìn)豬小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟的作用。卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞、卵丘擴(kuò)展與卵母細(xì)胞成熟之間的關(guān)系很復(fù)雜。壁層顆粒細(xì)胞與卵丘細(xì)胞之間，卵丘細(xì)胞與卵丘細(xì)胞之間以及卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞之間，存在著廣泛的縫隙連接?？傊?，在卵母細(xì)胞成熟過程中，卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞的發(fā)育是必需的。卵母細(xì)胞也可能通過分泌特殊因子或通過促卵泡素（ FSH）和 EGF刺激卵丘透明質(zhì)酸酶的合成，調(diào)節(jié)卵丘擴(kuò)散，從而解除卵丘卵母細(xì)胞的異源連接，促使減數(shù)分裂恢復(fù)。在體內(nèi)卵丘擴(kuò)展可促進(jìn)精子獲能，保證正常受精和合子發(fā)育。卵丘細(xì)胞的形態(tài)不依賴于供體的類型，擁有完整多層并且擴(kuò)散的卵丘細(xì)胞的卵母細(xì)胞的比例最大（ ％～ 46％ ），其次是帶有致密多層的卵丘細(xì)胞的卵母細(xì)胞（ ％～ 28％ ），裸卵的比例小于 7％ 。 綜上所述，在卵母細(xì)胞體外成熟過程中，卵丘細(xì)胞發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。 (3) 去除卵丘細(xì)胞的小鼠卵母細(xì)胞在體外成熟過程中，皮質(zhì)顆粒可能存在繼發(fā)性生成障礙或者數(shù) 量異常，該結(jié)果可能是去除卵丘細(xì)胞的小