【正文】 polymer system)，抗原—抗體反應(yīng)結(jié)合后，第二抗體上標(biāo)記有多聚化合物(葡聚糖)酶復(fù)合物(EnVision復(fù)合物)，與第一抗體結(jié)合，進(jìn)而由酶作用底物進(jìn)行顯色定位。吸收對(duì)照：用相應(yīng)的純化抗原（過(guò)量）中和吸收特異性第一抗體，使其結(jié)合點(diǎn)全部被外源性抗原結(jié)合，不能再與組織內(nèi)的靶抗原反應(yīng)，用這種吸收后的第一抗體作免疫組化染色，結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性對(duì)照還有空白對(duì)照，替代對(duì)照，吸收對(duì)照，抑制實(shí)驗(yàn)等自身對(duì)照：在同一標(biāo)本切片上，靶抗原的陽(yáng)性反應(yīng)與其他無(wú)關(guān)結(jié)構(gòu)或成分的陰性結(jié)果形成鮮明對(duì)照?？乖迯?fù)能最大程度地恢復(fù)在制片等過(guò)程中損失的抗原性，使原來(lái)認(rèn)為不能在石蠟切片上進(jìn)行IHC的許多抗體獲得了良好的染色結(jié)果，成為一種有效的補(bǔ)救措 施，ARIHC已廣泛應(yīng)用于臨床的研究中。透明：組織經(jīng)酒精脫水后，還必須經(jīng)過(guò)一個(gè)媒劑透明過(guò)程浸蠟：經(jīng)過(guò)透明的組織塊，進(jìn)一步移入熔化的石蠟內(nèi)浸漬，稱為浸蠟。而突變型P2P53的表達(dá)的蛋白如果在多種腫瘤過(guò)度表達(dá)則說(shuō)明腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度非常快，并且發(fā)生了轉(zhuǎn)移，惡性程度較高。免疫組織化學(xué)顯色是一種酶促反應(yīng)，抗原抗體的復(fù)合物的堿性磷酸酶和過(guò)氧化物與底物反應(yīng)，就生產(chǎn)了一種由顏色的復(fù)合物，沉淀在組織或者細(xì)胞中的抗原位置。 選取2013年1月2015年1月我院收治的腫瘤患者50例，分別采用活檢穿刺和免疫組織化學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，比較兩種方法的檢測(cè)陽(yáng)性率。封片中不能對(duì)著切片呼氣。（2）染色石蠟切片經(jīng)水洗后放入Harris蘇木精染色，一般情況下在新配的蘇木精溶液中只需要染1min左右，應(yīng)根據(jù)染片的多少，逐步把染色時(shí)間延長(zhǎng)。（3）Gill改良蘇木精染液的配制 蘇木精2g無(wú)水乙醇250ml 硫酸鋁鉀17g 蒸餾水750ml 冰醋酸20ml先將蘇木精溶于無(wú)水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中。15．二甲苯I 1min。7．自來(lái)水洗20s。25．中性樹膠或加拿大樹膠封片。17．90%酒精30s。9．自來(lái)水洗1min。（三）自動(dòng)染色機(jī)蘇木精伊紅染色程序1．二甲苯I 10min。無(wú)水乙醇I 2min。稀氨水（1%）反藍(lán)30s。95%酒精1min。（一）HE染色的基本原理1．細(xì)胞核染色的原理細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而染色。硬度一般在剛開始解凍時(shí)最適合，應(yīng)迅速切片。切片用毛筆展平后，立即用載玻片貼附，待切片剛要融化時(shí)，即刻入固定液內(nèi)固定1min。初步修出組織切面后，放下抗卷板，開始切片。另外，因冰凍切片制作時(shí)不經(jīng)各級(jí)酒精的脫水，二甲苯的透明等過(guò)程，因此對(duì)脂肪和類脂的保存較好，在進(jìn)行脂肪染色和神經(jīng)組織髓鞘的染色常用。過(guò)小則切片皺起。浸蠟的溫度也不宜過(guò)高，時(shí)間長(zhǎng)短也應(yīng)加以控制。但無(wú)水酒精中，組織塊放置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則組織過(guò)硬，切片困難。過(guò)小、過(guò)薄的組織，在固定和脫水的過(guò)程中易變硬或產(chǎn)生彎曲扭轉(zhuǎn)，同樣影響切片質(zhì)量。（4）撈片時(shí)注意位置，要留出貼標(biāo)簽的空間，并注意整齊美觀。將蠟塊固定，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，并移動(dòng)刀架或蠟塊固定裝置，使蠟塊與刀刃接觸。除此之外，石蠟包埋的組織便于長(zhǎng)期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用，最普遍的一種方法。八、組織切片不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。七、包埋包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮減低，也不會(huì)過(guò)硬，故比酒精優(yōu)越。四、脫水經(jīng)過(guò)固定的組織，沖洗后要進(jìn)行脫水。因此，可以放置冰箱內(nèi)固定，使組織內(nèi)酶失去作用，細(xì)菌也能停止滋生。帶有薄膜的組織，要防止切時(shí)薄膜分離和脫落。以上基本過(guò)程是互相聯(lián)系的，任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，都將使整個(gè)切片制作歸于失敗。如遇特殊情況應(yīng)及時(shí)通知手術(shù)室，三天后發(fā)出正式冰凍報(bào)告。二、凡需手術(shù)病員，由床位醫(yī)生術(shù)前填寫“病理申請(qǐng)單”，于手 術(shù)當(dāng)天與病歷一起送人手術(shù)室。醫(yī)生申請(qǐng)快速石蠟切片病理檢查的注意事項(xiàng)：如需做快速石蠟病理檢查，請(qǐng)?jiān)谏暾?qǐng)單上注明快速石蠟病理檢查。這是一般的工作時(shí)間，可這對(duì)于急需獲得病理結(jié)果的患者來(lái)說(shuō)，三天時(shí)間確實(shí)太長(zhǎng)，尤其是門診病人，遠(yuǎn)道求醫(yī)的患者，或者外地的患者，三天的時(shí)間就意味著等待，住宿及消費(fèi)。超聲波快速石蠟制片機(jī)能提高組織內(nèi)分子和溶劑分子的運(yùn)動(dòng)速度，它能使組織的蛋白質(zhì)迅速發(fā)生凝固并保持細(xì)胞原結(jié)構(gòu)，因而能快速固定組織并保持組織的外形和柔韌性，有利于切片。骨組織及淋巴結(jié)組織建議做常規(guī)石蠟病理切片檢查。四、凡送檢冰凍病理標(biāo)本，手術(shù)醫(yī)師必須按要求填寫冰凍病理申 請(qǐng)單，并由手術(shù)主刀或一助（特殊情況下可由手術(shù)室專職人員）將手 術(shù)標(biāo)本給病人家屬或委托人確認(rèn)。六、病理標(biāo)本檢查后至少保留一個(gè)月。切取的工具要清潔。切取后，放入事先準(zhǔn)備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標(biāo)記。一般均用流水（自來(lái)水）沖洗12到24小時(shí)左右。由于酒精可以任何比例與水結(jié)合，對(duì)組織穿透力強(qiáng)，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中，應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。常用的透明劑為二甲苯（Xylol），因其穿透力較強(qiáng)，因而組織在二甲苯中停留時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般透明時(shí)間在30分鐘左右即可。注意各組織塊之間的距離和每個(gè)組織塊的位置和方向。（一）石蠟切片法組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機(jī)制成切片的過(guò)程稱為石蠟切片法。檢查切片刀是否鋒利，簡(jiǎn)便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下，如一碰即斷，說(shuō)明刀鋒鋒利。切出蠟片后，用毛筆輕輕地托起，爾后用眼科鑷夾起，正面向上放入展片箱（展片溫度根據(jù)作用的石蠟熔點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整，一般低于蠟熔點(diǎn)10～12℃），待切片展平后，即可進(jìn)行分片和撈片。一般在60℃左右烤箱內(nèi)烤30min即可，也可用烤片器烤片。固定不及時(shí)和固定不當(dāng)?shù)慕M織，染色時(shí)常出現(xiàn)核質(zhì)著色較淺，輪廓不清，出現(xiàn)不同程度的片狀發(fā)白區(qū)。經(jīng)二甲苯時(shí)，組織也無(wú)法透明，呈現(xiàn)渾濁。（3）切片切片刀要求鋒利且無(wú)缺口，切片自行卷起多由切片刀不鋒利所致，切片刀有缺口時(shí)，易造成切片斷裂破碎和不完整。（5）特殊要求切片的制作 石蠟切片雖然有很多優(yōu)點(diǎn)，但制片過(guò)程中要經(jīng)過(guò)酒精和二甲苯等有機(jī)溶劑處理，因此很易造成組織內(nèi)抗原性的喪失，在用于免疫組織化學(xué)染色時(shí)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。1．恒冷箱切片 將組織塊在恒冷箱的切片機(jī)上切片。在切片前，應(yīng)預(yù)先啟動(dòng)進(jìn)行預(yù)冷，同時(shí)準(zhǔn)備多個(gè)冷卻臺(tái)，用于多塊組織切片。暫時(shí)不染色的切片，用載玻片吸附?？靖珊笥?0%酒精和自來(lái)水略洗后即可染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽(yáng)離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比。自來(lái)水洗2min。自來(lái)水洗30s。二甲苯II 2min。4．無(wú)水乙醇1min。12．1%鹽酸酒精分化30s。20．無(wú)水乙醇I 2min。2．蘇木精染色1～2min。10．85%酒精20s。18．中性樹膠或加拿大樹膠封