【正文】 polymer system)，抗原—抗體反應(yīng)結(jié)合后，第二抗體上標記有多聚化合物(葡聚糖)酶復合物(EnVision復合物)，與第一抗體結(jié)合，進而由酶作用底物進行顯色定位。吸收對照：用相應(yīng)的純化抗原（過量）中和吸收特異性第一抗體，使其結(jié)合點全部被外源性抗原結(jié)合，不能再與組織內(nèi)的靶抗原反應(yīng)，用這種吸收后的第一抗體作免疫組化染色，結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性對照還有空白對照，替代對照，吸收對照，抑制實驗等自身對照：在同一標本切片上，靶抗原的陽性反應(yīng)與其他無關(guān)結(jié)構(gòu)或成分的陰性結(jié)果形成鮮明對照?？乖迯湍茏畲蟪潭鹊鼗謴驮谥破冗^程中損失的抗原性，使原來認為不能在石蠟切片上進行IHC的許多抗體獲得了良好的染色結(jié)果，成為一種有效的補救措 施，ARIHC已廣泛應(yīng)用于臨床的研究中。透明：組織經(jīng)酒精脫水后，還必須經(jīng)過一個媒劑透明過程浸蠟：經(jīng)過透明的組織塊，進一步移入熔化的石蠟內(nèi)浸漬，稱為浸蠟。而突變型P2P53的表達的蛋白如果在多種腫瘤過度表達則說明腫瘤細胞的生長速度非常快，并且發(fā)生了轉(zhuǎn)移，惡性程度較高。免疫組織化學顯色是一種酶促反應(yīng)，抗原抗體的復合物的堿性磷酸酶和過氧化物與底物反應(yīng)，就生產(chǎn)了一種由顏色的復合物，沉淀在組織或者細胞中的抗原位置。 選取2013年1月2015年1月我院收治的腫瘤患者50例，分別采用活檢穿刺和免疫組織化學技術(shù)進行檢驗，比較兩種方法的檢測陽性率。封片中不能對著切片呼氣。（2）染色石蠟切片經(jīng)水洗后放入Harris蘇木精染色，一般情況下在新配的蘇木精溶液中只需要染1min左右，應(yīng)根據(jù)染片的多少，逐步把染色時間延長。（3）Gill改良蘇木精染液的配制 蘇木精2g無水乙醇250ml 硫酸鋁鉀17g 蒸餾水750ml 冰醋酸20ml先將蘇木精溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中。15．二甲苯I 1min。7．自來水洗20s。25．中性樹膠或加拿大樹膠封片。17．90%酒精30s。9．自來水洗1min。（三）自動染色機蘇木精伊紅染色程序1．二甲苯I 10min。無水乙醇I 2min。稀氨水（1%）反藍30s。95%酒精1min。（一）HE染色的基本原理1．細胞核染色的原理細胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而染色。硬度一般在剛開始解凍時最適合，應(yīng)迅速切片。切片用毛筆展平后，立即用載玻片貼附，待切片剛要融化時，即刻入固定液內(nèi)固定1min。初步修出組織切面后，放下抗卷板，開始切片。另外，因冰凍切片制作時不經(jīng)各級酒精的脫水，二甲苯的透明等過程，因此對脂肪和類脂的保存較好，在進行脂肪染色和神經(jīng)組織髓鞘的染色常用。過小則切片皺起。浸蠟的溫度也不宜過高，時間長短也應(yīng)加以控制。但無水酒精中，組織塊放置時間不宜過長，否則組織過硬，切片困難。過小、過薄的組織，在固定和脫水的過程中易變硬或產(chǎn)生彎曲扭轉(zhuǎn)，同樣影響切片質(zhì)量。（4）撈片時注意位置，要留出貼標簽的空間，并注意整齊美觀。將蠟塊固定，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，并移動刀架或蠟塊固定裝置，使蠟塊與刀刃接觸。除此之外，石蠟包埋的組織便于長期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用，最普遍的一種方法。八、組織切片不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。七、包埋包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮減低，也不會過硬，故比酒精優(yōu)越。四、脫水經(jīng)過固定的組織，沖洗后要進行脫水。因此，可以放置冰箱內(nèi)固定，使組織內(nèi)酶失去作用，細菌也能停止滋生。帶有薄膜的組織，要防止切時薄膜分離和脫落。以上基本過程是互相聯(lián)系的，任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都將使整個切片制作歸于失敗。如遇特殊情況應(yīng)及時通知手術(shù)室，三天后發(fā)出正式冰凍報告。二、凡需手術(shù)病員，由床位醫(yī)生術(shù)前填寫“病理申請單”，于手 術(shù)當天與病歷一起送人手術(shù)室。醫(yī)生申請快速石蠟切片病理檢查的注意事項：如需做快速石蠟病理檢查，請在申請單上注明快速石蠟病理檢查。這是一般的工作時間，可這對于急需獲得病理結(jié)果的患者來說，三天時間確實太長，尤其是門診病人，遠道求醫(yī)的患者，或者外地的患者，三天的時間就意味著等待，住宿及消費。超聲波快速石蠟制片機能提高組織內(nèi)分子和溶劑分子的運動速度，它能使組織的蛋白質(zhì)迅速發(fā)生凝固并保持細胞原結(jié)構(gòu)，因而能快速固定組織并保持組織的外形和柔韌性，有利于切片。骨組織及淋巴結(jié)組織建議做常規(guī)石蠟病理切片檢查。四、凡送檢冰凍病理標本，手術(shù)醫(yī)師必須按要求填寫冰凍病理申 請單，并由手術(shù)主刀或一助（特殊情況下可由手術(shù)室專職人員）將手 術(shù)標本給病人家屬或委托人確認。六、病理標本檢查后至少保留一個月。切取的工具要清潔。切取后，放入事先準備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標記。一般均用流水（自來水）沖洗12到24小時左右。由于酒精可以任何比例與水結(jié)合，對組織穿透力強，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中，應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。常用的透明劑為二甲苯（Xylol），因其穿透力較強，因而組織在二甲苯中停留時間不宜過長，一般透明時間在30分鐘左右即可。注意各組織塊之間的距離和每個組織塊的位置和方向。（一）石蠟切片法組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機制成切片的過程稱為石蠟切片法。檢查切片刀是否鋒利，簡便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下，如一碰即斷，說明刀鋒鋒利。切出蠟片后，用毛筆輕輕地托起，爾后用眼科鑷夾起，正面向上放入展片箱（展片溫度根據(jù)作用的石蠟熔點進行調(diào)整，一般低于蠟熔點10～12℃），待切片展平后，即可進行分片和撈片。一般在60℃左右烤箱內(nèi)烤30min即可，也可用烤片器烤片。固定不及時和固定不當?shù)慕M織，染色時常出現(xiàn)核質(zhì)著色較淺，輪廓不清，出現(xiàn)不同程度的片狀發(fā)白區(qū)。經(jīng)二甲苯時，組織也無法透明，呈現(xiàn)渾濁。（3）切片切片刀要求鋒利且無缺口，切片自行卷起多由切片刀不鋒利所致，切片刀有缺口時，易造成切片斷裂破碎和不完整。（5）特殊要求切片的制作 石蠟切片雖然有很多優(yōu)點，但制片過程中要經(jīng)過酒精和二甲苯等有機溶劑處理，因此很易造成組織內(nèi)抗原性的喪失，在用于免疫組織化學染色時影響結(jié)果的準確性。1．恒冷箱切片 將組織塊在恒冷箱的切片機上切片。在切片前，應(yīng)預先啟動進行預冷，同時準備多個冷卻臺，用于多塊組織切片。暫時不染色的切片，用載玻片吸附?？靖珊笥?0%酒精和自來水略洗后即可染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。自來水洗2min。自來水洗30s。二甲苯II 2min。4．無水乙醇1min。12．1%鹽酸酒精分化30s。20．無水乙醇I 2min。2．蘇木精染色1～2min。10．85%酒精20s。18．中性樹膠或加拿大樹膠封