【正文】 中性緩沖甲醛固定液固定兩小時，固定完成后用脫水也脫水1個小時，分別在透明液和浸蠟液中各放置一個小時，然后用石蠟包埋，采用常規(guī)的切片方法切片，切片的厚度為2um。（4）透明與封片石蠟組織切片染色經(jīng)過脫水后必須經(jīng)二甲苯處理，使切片透明，才能用樹膠封片。（五）染色液的配制1．蘇木精（素）蘇木精是一種純天然染料，是從蘇木素樹提煉出來的，蘇木樹主產(chǎn)墨西哥的坎偑切，蘇木精的染色性能差，經(jīng)過一百多年精心加工配制，現(xiàn)用的蘇木精配方，染色性能好，保持時間長，是世界上唯一的常規(guī)細(xì)胞核染料，2．蘇木精的配制蘇木精的配方很多，可根據(jù)不同需要選用，Harris配方最常用。3．自來水洗30s。13．自來水洗5min。二甲苯III 2min。蘇木精染色1min至5min。九、蘇木精－伊紅染色方法蘇木精伊紅染色方法，簡稱HE染色方法，是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的細(xì)胞與組織學(xué)最廣泛應(yīng)用的染色方法。2．半導(dǎo)體制冷冰凍切片法 組織塊放置在半導(dǎo)體制冷臺上，加少許蒸餾水，調(diào)好切片的厚度。因而有人采用冷凍干燥包埋法，即將新鮮組織低溫速凍，利用冷凍干燥機在真空和低溫條件下除去組織內(nèi)的水分，然后用甲醛蒸汽固定干燥后的組織，而后在進(jìn)行浸蠟、包埋和切片。此時應(yīng)將組織在新的酒精中重新脫水。血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時烤片。用顯微鏡觀察可確定刀口是否平整，有無缺口。（2）迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液，淹沒組織塊。脫水必須充分，否則給浸蠟造成困難。二、固定固定的目的是迅速將組織細(xì)胞殺死，使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，糖，脂肪等凝固，從而保持與活組織相似的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。七、凡違反上述規(guī)定者，按性質(zhì)﹑后果，責(zé)任到人。周六、日不做快速石蠟切片檢查。其程序基本是活檢當(dāng)天下午取材，晚上組織脫水及浸蠟，第二天上午包埋切片及染色，當(dāng)切片送達(dá)醫(yī)生手里時，已是第二天的上午，下午看閱切片，至復(fù)檢醫(yī)生手里時，已是第三天的時間了。一、手術(shù)中取下的標(biāo)本（不論組織大?。┒急仨毸妥霾±頇z查，不得隨意丟棄。以石蠟切片法為代表，切片的基本制作過程是：組織取材→固定→沖洗→脫水→透明→浸蠟→組織包埋→組織切片→展片附貼→切片脫蠟→染色→脫水→染片透明→封固。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時，固定液滲入組織液的深度只達(dá)2到3厘米。故組織經(jīng)正丁醇脫水后，不須經(jīng)二甲苯透明。對于實驗動物（狗和兔等）組織，一般的脫水透明和浸蠟時間如下： 處理步驟處理時間（min）處理步驟處理時間（min）① 75%酒精長短不定二甲苯Ⅰ、Ⅱ⑥ 30 ② 85%酒精 120－300 二甲苯Ⅲ⑦ 60③ 95%酒精Ⅰ和Ⅱ 120－300 56－58℃石蠟⑧ 30 ④無水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 30 56－58℃石蠟⑨ 60－120 ⑤無水酒精Ⅲ 60－120 56－58℃石蠟⑩ 120－180注：摘自病理學(xué)技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，王伯，李玉松，黃高，張遠(yuǎn)強主編。將切片刀裝在刀架上，刀刃與蠟塊表面呈5℃夾角。3．注意事項（1）組織的取材和固定 取材時，組織塊的大小厚薄應(yīng)適當(dāng)，過大、過厚的組織，固定液不易滲透，易引起固定不良。時間不足，則石蠟不易浸透。（二）冰凍切片法冰凍切片在組織學(xué)技術(shù)中應(yīng)用廣泛，對臨床快速病理診斷尤其具有重要意義。冰凍組織周圍的水不宜過多，用手檢查組織塊的硬度，當(dāng)可切成厚薄一致的切片時，即可切片。因此病理學(xué)工作者必需學(xué)習(xí)和掌握這種染色方法。自來水洗1min。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色。16．85%酒精20s。6．稀氨水30s。用蒸餾水補足600ml，加入400mg碘酸鈉充分混勻，蘇木精染液呈紫紅色。標(biāo)簽要附貼牢固。在免疫組織化學(xué)染色技術(shù)中，抗體是最基本也是最重要的材料，分為第一抗體和第二抗體，第一抗體是針對組織細(xì)胞中的靶細(xì)胞抗原或者目的抗原的抗體，與靶細(xì)胞中的抗原結(jié)合，而第二抗體是用來放大反應(yīng)的，當(dāng)?shù)谝豢贵w和抗原結(jié)合之后，再與第二抗體結(jié)合，第二抗體是可見的，方便檢驗。Carnoy液：固定胞漿和胞核,對染色體固定佳,穿透力強,適用于外膜致密的組織脫水：某些溶劑置換組織內(nèi)水分的過程，能夠使組織脫水的化學(xué)物質(zhì)稱為脫水劑。陰性對照 negative control 用確認(rèn)不含已知抗原的標(biāo)本作對照，免疫組化染色結(jié)果陰性者。EnVision復(fù)合物是利用一種多聚化合物將HRP或AKP和第二抗體(抗鼠或抗兔IgG)同時標(biāo)記在一個多聚化合物上，即形成酶—多聚化合物—第二抗體巨大復(fù)合物。本研究結(jié)果顯示，50例患者，經(jīng)穿刺活檢，AFP、Glypican3陽性的有32例，%，經(jīng)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢驗，47例患者的細(xì)胞組織呈現(xiàn)變異性，%，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢驗的陽性率明顯高于穿刺活檢的陽性率，與穿刺活檢相比，免疫組織化學(xué)技術(shù)在腫瘤診斷中具有優(yōu)越性，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P綜上所述，在病理組織診斷中運用免疫組織化學(xué)技術(shù)具有良好的效果，準(zhǔn)確性高，在不同類型的腫瘤疾病中也可以比較準(zhǔn)確的判斷，從而為患者的疾病治療提供有效的依據(jù)，值得臨床推廣使用。活檢穿刺：經(jīng)過CT掃面確認(rèn)病變位置，囑咐患者在活檢穿刺前5個小時之內(nèi)禁食，在CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺取得病理標(biāo)本進(jìn)行檢驗。（3）脫水切片經(jīng)過染色后，通過各級酒精脫水，首先從低濃度到高濃度，低濃度酒精對伊紅有分化作用，切片經(jīng)過低濃度時間要短，向高濃度時逐步延長脫水時間；脫水不徹底，使切片發(fā)霧，在顯微鏡下組織結(jié)構(gòu)模糊不清。18．中性樹膠或加拿大樹膠封片。2．蘇木精染色1～2min。12．1%鹽酸酒精分化30s。二甲苯II 2min。自來水洗2min。烤干后用70%酒精和自來水略洗后即可染色。在切片前，應(yīng)預(yù)先啟動進(jìn)行預(yù)冷，同時準(zhǔn)備多個冷卻臺，用于多塊組織切片。（5）特殊要求切片的制作 石蠟切片雖然有很多優(yōu)點，但制片過程中要經(jīng)過酒精和二甲苯等有機溶劑處理，因此很易造成組織內(nèi)抗原性的喪失，在用于免疫組織化學(xué)染色時影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。經(jīng)二甲苯時，組織也無法透明，呈現(xiàn)渾濁。一般在60℃左右烤箱內(nèi)烤30min即可，也可用烤片器烤片。檢查切片刀是否鋒利，簡便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下，如一碰即斷，說明刀鋒鋒利。注意各組織塊之間的距離和每個組織塊的位置和方向。由于酒精可以任何比例與水結(jié)合，對組織穿透力強，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中，應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。切取后，放入事先準(zhǔn)備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標(biāo)記。六、病理標(biāo)本檢查后至少保留一個月。骨組織及淋巴結(jié)組織建議做常規(guī)石蠟病理切片檢查。這是一般的工作時間，可這對于急需獲得病理結(jié)果的患者來說，三天時間確實太長，尤其是門診病人，遠(yuǎn)道求醫(yī)的患者，或者外地的患者，三天的時間就意味著等待，住宿及消費。二、凡需手術(shù)病員，由床位醫(yī)生術(shù)前填寫“病理申請單”，于手 術(shù)當(dāng)天與病歷一起送人手術(shù)室。以上基本過程是互相聯(lián)系的，任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都將使整個切片制作歸于失敗。因此，可以放置冰箱內(nèi)固定，使組織內(nèi)酶失去作用，細(xì)菌也能停止滋生。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮減低，也不會過硬，故比酒精優(yōu)越。八、組織切片不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂