【正文】 溶解石蠟，幫助石蠟浸透組織。由于經(jīng)過透明劑處理的組織塊用肉眼觀察呈透明狀，故稱這一過程為透明。常用的透明劑為二甲苯（Xylol），因其穿透力較強(qiáng)，因而組織在二甲苯中停留時(shí)間不宜過長，一般透明時(shí)間在30分鐘左右即可。六、浸蠟 浸蠟是指組織經(jīng)過透明作用以后，放入溶化的石蠟中浸滲，使石蠟浸入組織塊中，冷卻后，才能進(jìn)行切片。通常選擇熔點(diǎn)在52～56℃之間的石蠟，并視切片時(shí)環(huán)境的氣溫而選擇。室溫高則選用熔點(diǎn)稍高的石蠟，反之，則選用熔點(diǎn)較低的石蠟，這樣可防止切片時(shí)石蠟太軟或易碎裂。浸蠟的過程是：二甲苯石蠟混合液（1：1）1小時(shí) 二甲苯石蠟混合液（1：2）1小時(shí)石蠟（1）1小時(shí)30分 石蠟（2）1小時(shí)30分上述過程可在56℃～58℃恒溫箱中進(jìn)行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。七、包埋包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。根據(jù)需要，包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。石蠟包埋法：（1）先將熔化的石蠟倒入包埋框，用加熱的鑷子將欲包埋的組織塊在蠟液內(nèi)放置好。注意各組織塊之間的距離和每個(gè)組織塊的位置和方向。（2）迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液，淹沒組織塊。待蠟液出現(xiàn)凝固層后，即輕輕放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。石蠟完全凝固后，倒出冷縮的蠟塊片，用加熱的外科刀，按組織塊位置修整蠟片待用。對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（狗和兔等）組織，一般的脫水透明和浸蠟時(shí)間如下： 處理步驟處理時(shí)間（min）處理步驟處理時(shí)間（min）① 75%酒精長短不定二甲苯Ⅰ、Ⅱ⑥ 30 ② 85%酒精 120－300 二甲苯Ⅲ⑦ 60③ 95%酒精Ⅰ和Ⅱ 120－300 56－58℃石蠟⑧ 30 ④無水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 30 56－58℃石蠟⑨ 60－120 ⑤無水酒精Ⅲ 60－120 56－58℃石蠟⑩ 120－180注：摘自病理學(xué)技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，王伯，李玉松，黃高，張遠(yuǎn)強(qiáng)主編。八、組織切片不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。常用的切片工具包括組織切片機(jī)、切片刀和自動(dòng)磨刀儀器等。以下分別加以敘述。（一）石蠟切片法組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機(jī)制成切片的過程稱為石蠟切片法。為現(xiàn)在病理診斷常用的制作切片的方法。在切片前應(yīng)先切去標(biāo)本周圍過多的石蠟（此過程稱為修塊）但也不能留得太少，否則易造成組織破壞，連續(xù)切片時(shí)分片困難。一般切4－6μm的切片，特殊情況可切1－2μm。要觀察病變的連續(xù)性，可制作連續(xù)切片。除此之外，石蠟包埋的組織便于長期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用，最普遍的一種方法。1．切片前的準(zhǔn)備（1）固定后的標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、浸蠟和包埋后，制成蠟塊。高質(zhì)量的蠟塊和鋒利的切片刀是保證切片質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。檢查切片刀是否鋒利，簡便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下，如一碰即斷，說明刀鋒鋒利。用顯微鏡觀察可確定刀口是否平整，有無缺口。（2）準(zhǔn)備充足的經(jīng)過處理的清潔載玻片和恒溫烤片裝置，大中號(hào)優(yōu)質(zhì)狼毫毛筆和鉛筆（用于在載玻片的粗糙端寫號(hào)），如用普通載玻片，可用碳素墨水和蛋白甘油按3：1體積混合后書寫。2．切片制作過程（1）將預(yù)先修好的組織塊先在冰箱中冷卻，而后裝在切片機(jī)固定裝置上。將切片刀裝在刀架上，刀刃與蠟塊表面呈5℃夾角。將蠟塊固定，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，并移動(dòng)刀架或蠟塊固定裝置，使蠟塊與刀刃接觸。（2）切片多使用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，使用時(shí)左手執(zhí)毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪。先修出標(biāo)本，直到組織全部暴露于切面為止，但小標(biāo)本注意不要修得太多，以免無法切出滿意的用于診斷的切片，標(biāo)本應(yīng)注意切全。切出蠟片后，用毛筆輕輕地托起，爾后用眼科鑷夾起，正面向上放入展片箱（展片溫度根據(jù)作用的石蠟熔點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整，一般低于蠟熔點(diǎn)10～12℃），待切片展平后，即可進(jìn)行分片和撈片。切片經(jīng)30%的酒精初展后，再用載玻片撈起放入展片箱更易展平。為減少切片刀與組織塊在切片過程中產(chǎn)生的熱量，使石蠟保持合適的硬度，切片時(shí)可經(jīng)常用冰塊冷卻切片刀和組織塊，尤其在夏季高溫季節(jié)更為必要。（3）輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切取組織，是由下向上切，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端（如皮膚組織，應(yīng)將表皮部分向上。而胃腸等組織，應(yīng)將漿膜面朝上）。（4）撈片時(shí)注意位置，要留出貼標(biāo)簽的空間，并注意整齊美觀。撈起切片后，立即寫上編號(hào)。（5）切片撈起后，在空氣中略微干燥后即可烤片。一般在60℃左右烤箱內(nèi)烤30min即可，也可用烤片器烤片。血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時(shí)烤片。但對(duì)腦組織待完全晾干后，才能進(jìn)行烤片。否則，可能產(chǎn)生氣泡影響染色。3．注意事項(xiàng)（1）組織的取材和固定 取材時(shí)，組織塊的大小厚薄應(yīng)適當(dāng)，過大、過厚的組織，固定液不易滲透，易引起固定不良。過小、過薄的組織，在固定和脫水的過程中易變硬或產(chǎn)生彎曲扭轉(zhuǎn)，同樣影響切片質(zhì)量。陳舊、腐敗和干枯的組織不宜制作切片。用陳腐組織制成的切片，往往核漿共染，染色模糊，組織結(jié)構(gòu)不清，無法進(jìn)行觀察。固定不及時(shí)和固定不當(dāng)?shù)慕M織，染色時(shí)常出現(xiàn)核質(zhì)著色較淺，輪廓不清，出現(xiàn)不同程度的片狀發(fā)白區(qū)。組織固定時(shí)，固定液的量應(yīng)充足，至少要在4倍以上，同時(shí)注意組織塊不要與容器粘連。至于組織固定的時(shí)間，根據(jù)具體情況加以掌握。有關(guān)固定時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)，可參見有關(guān)章節(jié)。（2）組織脫水、透明和浸蠟組織脫水用的各級(jí)酒精，應(yīng)保證相應(yīng)濃度，以便組織脫水徹底。但無水酒精中，組織塊放置時(shí)間不宜過長，否則組織過硬，切片困難。遇到此情況，可將組織浸在香柏油中軟化，用二甲苯洗去香柏油后，再重新浸蠟和包埋。脫水酒精，尤其是無水酒精中混有水分，則組織脫水不干凈。經(jīng)二甲苯時(shí)，組織也無法透明，呈現(xiàn)渾濁。此時(shí)應(yīng)將組織在新的酒精中重新脫水。二甲苯透明也應(yīng)充分，否則不利于石蠟的浸透。但組織在二甲苯內(nèi)的時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格掌握，時(shí)間過長組織易碎，也無法切出好的切片。時(shí)間不足，則石蠟不易浸透。浸蠟的溫度也不宜過高，時(shí)間長短也應(yīng)加以控制?？傊?，組織脫水、透明和浸蠟對(duì)于切片質(zhì)量都有一定影響，組織脫水、透明和浸蠟過度，組織塊變硬變脆，因此對(duì)于小塊組織或小動(dòng)物標(biāo)本應(yīng)注意時(shí)間。但若時(shí)間不夠，組織塊硬化不夠，也不利于切片和染色，因此，應(yīng)注意各具體環(huán)節(jié)的操作，并注意保證各種試劑的質(zhì)量。（3）切片切片刀要求鋒利且無缺口，切片自行卷起多由切片刀不鋒利所致，切片刀有缺口時(shí)，易造成切片斷裂破碎和不完整。骨組織切片時(shí)，用重型刀較好。全鋼刀或單面鎢刀也適合石蠟或火棉膠包埋的骨組織。（4）切片刀和切片機(jī)切片刀放置的傾角以20－30℃為好。傾角過大切片上卷，不能連在一起。過小則切片皺起。應(yīng)注意維護(hù)切片機(jī)，防止因螺絲松動(dòng)產(chǎn)生震動(dòng)，切片時(shí)會(huì)造成切片厚薄不均。遇硬化過度的肝、腦、脾等組織時(shí)，應(yīng)輕輕切削，防止由于震動(dòng)產(chǎn)生空洞現(xiàn)象。（5）特殊要求切片的制作 石蠟切片雖然有很多優(yōu)點(diǎn)，但制片過程中要經(jīng)過酒精和二甲苯等有機(jī)溶劑處理，因此很易造成組織內(nèi)抗原性的喪失，在用于免疫組織化學(xué)染色時(shí)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因而有人采用冷凍干燥包埋法，即將新鮮組織低溫速凍，利用冷凍干燥機(jī)在真空和低溫條件下除去組織內(nèi)的水分，然后用甲醛蒸汽固定干燥后的組織，而后在進(jìn)行