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病理組織工作站-免費(fèi)閱讀

  

【正文】 空白或替代對(duì)照:以緩沖液(如PBS)或與第一抗體同源的正常動(dòng)物血清取代第一抗體,結(jié)果應(yīng)為陰性??乖捍碳C(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答產(chǎn)生相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)。用其他浸透劑(火棉膠,碳蠟,明膠等)滲入組織內(nèi)部的過(guò)程稱為浸透或透入包埋:使用包埋劑將處理過(guò)的組織包于其中,使組織達(dá)到一定韌度和硬度,有利于切片。Ⅳ型膠原是基膜中的重要組成成分,完整的基膜更是良性上皮細(xì)胞的標(biāo)志,如果基膜斷裂或者消失的話則說(shuō)明腫瘤已經(jīng)發(fā)展成為了惡性腫瘤[5]。免疫組織化學(xué)染色主要包括固定、染色、切片、脫色等過(guò)程,整個(gè)過(guò)程的操作雖然比較簡(jiǎn)單,但是卻容易受到外界環(huán)境因素的影響,導(dǎo)致病理診斷中出現(xiàn)一定的誤診現(xiàn)象,所以這就要求操作人員在操作過(guò)程中應(yīng)該嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作[2]。50例腫瘤患者中,其中女性有20例,男性有30例,年齡(2461)歲,平均年齡(177。(5)常規(guī)石蠟切片和HE染色標(biāo)本的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(全國(guó)統(tǒng)一評(píng)定標(biāo)準(zhǔn))①切片完整,厚度4-6um,薄厚均勻,無(wú)褶無(wú)刀痕。蘇木精染色后,不宜在水中和鹽酸酒精停留過(guò)長(zhǎng),切片分化程度應(yīng)在鏡下觀察,分化過(guò)度,應(yīng)水洗后重新在蘇木精中染色,再水洗分化和使切片在自來(lái)水或稀氨水中充分變藍(lán)。兩液溶解后將其混合,加入碘酸鈉待蘇木精氧化成紫紅色,再加入冰醋酸。16.二甲苯II 2min。8.伊紅染色20s~1min。(四)冰凍切片蘇木精伊紅染色1.恒冷箱冰凍切片,粘貼在載玻片上,用95%酒精95ml和冰醋酸5ml的混合固定液固定1min。18.95%酒精1min。10.蘇木精染色1至5min。2.二甲苯II 10min。無(wú)水乙醇II 2min。自來(lái)水洗或蒸餾水洗1min。90%酒精1min。蘇木精在堿性染料中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。5.冰凍切片粘片法冰凍切片粘片法基本按石蠟切片的粘片處理,但烤片溫度不宜超過(guò)40℃。已固定的組織切片,收集于清水中。切出切片用載玻片貼附后,進(jìn)行吹干或固定。冰凍切片多用于新鮮組織,甲醛固定的組織和低溫冰箱冷藏的組織塊等。應(yīng)注意維護(hù)切片機(jī),防止因螺絲松動(dòng)產(chǎn)生震動(dòng),切片時(shí)會(huì)造成切片厚薄不均。總之,組織脫水、透明和浸蠟對(duì)于切片質(zhì)量都有一定影響,組織脫水、透明和浸蠟過(guò)度,組織塊變硬變脆,因此對(duì)于小塊組織或小動(dòng)物標(biāo)本應(yīng)注意時(shí)間。遇到此情況,可將組織浸在香柏油中軟化,用二甲苯洗去香柏油后,再重新浸蠟和包埋。陳舊、腐敗和干枯的組織不宜制作切片。撈起切片后,立即寫上編號(hào)。(2)切片多使用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī),使用時(shí)左手執(zhí)毛筆,右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪。1.切片前的準(zhǔn)備(1)固定后的標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、浸蠟和包埋后,制成蠟塊。常用的切片工具包括組織切片機(jī)、切片刀和自動(dòng)磨刀儀器等。根據(jù)需要,包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。五、透明透明的目的是將組織內(nèi)的酒精用礦物油或植物油置換出來(lái),并溶解石蠟,幫助石蠟浸透組織。脫水的目的在于將組織內(nèi)的水分用酒精或其他溶劑置換出來(lái),為石蠟等其他包埋劑浸入組織創(chuàng)造條件。最常用的固定液是10%的福爾馬林溶液:使用時(shí),用40%的甲醛飽和水溶液10毫升,加水90毫升配成。切取組織塊大小。因此應(yīng)細(xì)致、耐心、認(rèn)真負(fù)責(zé),并事先做好計(jì)劃安排。石蠟切片報(bào)告在實(shí)際收到標(biāo)本后五個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出,如遇特 殊情況(需做酶標(biāo)﹑特染﹑脫鈣等)應(yīng)及時(shí)發(fā)出臨時(shí)報(bào)告。手術(shù)中切下的標(biāo)本由巡回護(hù)士放入容 器內(nèi),按規(guī)定標(biāo)本完全浸入 10%中性福爾馬林溶液或 95%乙醇溶液 內(nèi),并貼好標(biāo)碼(姓名﹑住院號(hào)),送交手術(shù)室專職人員登記簽收。如送檢標(biāo)本為少見疑難病例,需要進(jìn)一步做免疫組化檢查,在6小時(shí)內(nèi)發(fā)出初檢報(bào)告,免疫組化報(bào)告3工作日內(nèi)發(fā)出。為了解決上述的問(wèn)題,減少患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),為患者蠃來(lái)保貴的治療時(shí)間,超聲波快速石蠟制片法可勝任此項(xiàng)工作。最新超聲波快速石蠟制片機(jī),開展了快速石蠟切片病理檢查。為保證工作順利進(jìn)行,請(qǐng)需做快速石蠟病理切片的標(biāo)本,離體后立即用福爾馬林固定,并由專人快速送到病理科檢查。三、送檢的病理標(biāo)本連同病理申請(qǐng)單由手術(shù)室專職人員送到病理 科,負(fù)責(zé)送檢標(biāo)本人員必須帶上“病理標(biāo)本簽收簿”,由病理科工作 人員核對(duì)無(wú)誤簽收后,方能留下標(biāo)本。細(xì)胞學(xué)檢查:穿刺涂片一般在穿刺后一小時(shí)發(fā)出報(bào)告,如有 特殊情況需和病人約定發(fā)出報(bào)告日期,脫落細(xì)胞檢查在收到標(biāo)本后二 個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出報(bào)告。一、取材采取病料,要刀剪銳利,剪切時(shí)不可擠壓,扯拉病料,以防人為損傷。組織塊病變一面應(yīng)平整光滑,另一面可不平整,以便包埋時(shí)辨認(rèn)。三、沖洗固定后的組織塊,應(yīng)將固定液洗去。常用的脫水劑為酒精。由于經(jīng)過(guò)透明劑處理的組織塊用肉眼觀察呈透明狀,故稱這一過(guò)程為透明。石蠟包埋法:(1)先將熔化的石蠟倒入包埋框,用加熱的鑷子將欲包埋的組織塊在蠟液內(nèi)放置好。以下分別加以敘述。高質(zhì)量的蠟塊和鋒利的切片刀是保證切片質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。先修出標(biāo)本,直到組織全部暴露于切面為止,但小標(biāo)本注意不要修得太多,以免無(wú)法切出滿意的用于診斷的切片,標(biāo)本應(yīng)注意切全。(5)切片撈起后,在空氣中略微干燥后即可烤片。用陳腐組織制成的切片,往往核漿共染,染色模糊,組織結(jié)構(gòu)不清,無(wú)法進(jìn)行觀察。脫水酒精,尤其是無(wú)水酒精中混有水分,則組織脫水不干凈。但若時(shí)間不夠,組織塊硬化不夠,也不利于切片和染色,因此,應(yīng)注意各具體環(huán)節(jié)的操作,并注意保證各種試劑的質(zhì)量。遇硬化過(guò)度的肝、腦、脾等組織時(shí),應(yīng)輕輕切削,防止由于震動(dòng)產(chǎn)生空洞現(xiàn)象。組織不經(jīng)任何包埋劑而直接放在制冷臺(tái)上冷卻后進(jìn)行切片。這種切片用于科研和教學(xué)的連續(xù)切片,效果較好。根據(jù)目的進(jìn)行染色??靖珊罅⒓慈〕?,溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),則切片易碎。2.細(xì)胞漿染色的原理細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽(yáng)離子),就可被帶負(fù)電荷(陰離子)的染料染色。85%酒精1min。伊紅染色20s至5min。二甲苯I 2min。3.無(wú)水乙醇1min。11.自來(lái)水洗1min。19.95%酒精1min。自來(lái)水洗。9.自來(lái)水洗10s。17.二甲苯III 2min。3.伊紅溶液的配制(1)水溶性伊紅 -1g 蒸餾水100ml先將水溶性伊紅加入蒸餾水中,用玻璃棒將伊紅攪起泡沫后過(guò)濾,每100ml加冰醋酸1滴。新配的伊紅染色快,切片染色不宜過(guò)長(zhǎng),應(yīng)根據(jù)染切片的多少逐步延長(zhǎng)染色時(shí)間,切片經(jīng)伊紅染后,水洗時(shí)間要短。②染色核漿分明,紅藍(lán)適度,透明潔凈,封裱美觀。)歲;其中轉(zhuǎn)移性腫瘤26例,肝細(xì)胞肝癌19例,血管瘤8例,子宮癌13例。值得注意的是,在整個(gè)染色過(guò)程中,切片應(yīng)該一直保持濕潤(rùn),在孵育的過(guò)程中,孵育盒中的蒸餾水量要合理的放置,孵育盒要放平,保證抗體液體在組織上的均勻性,避免抗體流到組織的一旁造成假陰性的結(jié)果。免疫組織化學(xué)技術(shù)通過(guò)觀察抗體對(duì)特異性抗原的顏色反應(yīng)來(lái)對(duì)組織的抗原進(jìn)行診斷,與傳統(tǒng)的病理診斷相比具有優(yōu)越性。組織芯片:又稱組織微列陣,是將數(shù)十個(gè)、數(shù)百個(gè)、乃至上千個(gè)小的組織片整齊的排列在某一載體上(通常是載波片)而成的微縮組織切片。抗體:受抗原刺激后B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的與相應(yīng)抗原反應(yīng)的球蛋白Envision法:EnVision法又稱為ELPS法(enhance labeled
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