【正文】 片。（2）乙醇性伊紅液的配制 伊紅Y ～1g90%酒精100ml先將伊紅溶于酒精中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1滴。（3）脫水切片經(jīng)過染色后，通過各級酒精脫水，首先從低濃度到高濃度，低濃度酒精對伊紅有分化作用，切片經(jīng)過低濃度時(shí)間要短，向高濃度時(shí)逐步延長脫水時(shí)間；脫水不徹底，使切片發(fā)霧，在顯微鏡下組織結(jié)構(gòu)模糊不清。第四篇：病理組織的免疫組織化學(xué)技術(shù)探討病理組織的免疫組織化學(xué)技術(shù)探討【摘要】目的：探討病理組織的免疫組織化學(xué)技術(shù)?；顧z穿刺：經(jīng)過CT掃面確認(rèn)病變位置，囑咐患者在活檢穿刺前5個(gè)小時(shí)之內(nèi)禁食，在CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺取得病理標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。在加抗體的時(shí)候，應(yīng)該選擇單克隆的抗體，因?yàn)樗薪M織標(biāo)本的來源基本不同，抗原的含量不一樣，細(xì)胞分化程度也是不一樣的，所以顯色反應(yīng)的時(shí)間也是不一樣的[3]。本研究結(jié)果顯示，50例患者，經(jīng)穿刺活檢，AFP、Glypican3陽性的有32例，%，經(jīng)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)，47例患者的細(xì)胞組織呈現(xiàn)變異性，%，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)的陽性率明顯高于穿刺活檢的陽性率，與穿刺活檢相比，免疫組織化學(xué)技術(shù)在腫瘤診斷中具有優(yōu)越性，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P綜上所述，在病理組織診斷中運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)具有良好的效果，準(zhǔn)確性高，在不同類型的腫瘤疾病中也可以比較準(zhǔn)確的判斷，從而為患者的疾病治療提供有效的依據(jù)，值得臨床推廣使用。石蠟切片：組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機(jī)制成切片的過程稱為石蠟切片法。EnVision復(fù)合物是利用一種多聚化合物將HRP或AKP和第二抗體(抗鼠或抗兔IgG)同時(shí)標(biāo)記在一個(gè)多聚化合物上，即形成酶—多聚化合物—第二抗體巨大復(fù)合物。抑制實(shí)驗(yàn)：待檢標(biāo)本因與未標(biāo)記的特異性抗體反應(yīng)而影響了與標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，使染色結(jié)果明顯減弱或轉(zhuǎn)陰。陰性對照 negative control 用確認(rèn)不含已知抗原的標(biāo)本作對照，免疫組化染色結(jié)果陰性者?？乖迯?fù)(Antigen retrieval，AR)技術(shù)：是指石蠟、冰凍、火棉膠、塑料切片免疫組織化學(xué)（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性劑、微波緩沖液和金屬鹽等，通過機(jī)械的方法斷開因福 爾馬林固定的導(dǎo)致的抗原表位和不相關(guān)蛋白間的交聯(lián)鍵，使被掩蓋的抗原決定簇或變性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢復(fù)，使抗體更好的滲透，與表位結(jié) 合。Carnoy液：固定胞漿和胞核,對染色體固定佳,穿透力強(qiáng),適用于外膜致密的組織脫水：某些溶劑置換組織內(nèi)水分的過程，能夠使組織脫水的化學(xué)物質(zhì)稱為脫水劑。例如，增生細(xì)胞核是否呈現(xiàn)陽性以及陽性細(xì)胞的多少都可以指示著腫瘤細(xì)胞的增長速度，為患者的預(yù)后提供依據(jù)。在免疫組織化學(xué)染色技術(shù)中，抗體是最基本也是最重要的材料，分為第一抗體和第二抗體，第一抗體是針對組織細(xì)胞中的靶細(xì)胞抗原或者目的抗原的抗體，與靶細(xì)胞中的抗原結(jié)合，而第二抗體是用來放大反應(yīng)的，當(dāng)?shù)谝豢贵w和抗原結(jié)合之后，再與第二抗體結(jié)合，第二抗體是可見的，方便檢驗(yàn)。我院以腫瘤患者50例為研究對象，采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)診斷，取得了滿意的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。標(biāo)簽要附貼牢固。組織切片脫蠟應(yīng)徹底，脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時(shí)間，所有的時(shí)間都是指新的二甲苯在室溫25℃以下時(shí)，如果二甲苯是用過一段時(shí)間，切片又比較厚，室溫低應(yīng)增加脫蠟時(shí)間，脫蠟不凈是影響染色不良的重要原因之一。用蒸餾水補(bǔ)足600ml，加入400mg碘酸鈉充分混勻，蘇木精染液呈紫紅色。14．無水乙醇II 2min。6．稀氨水30s。24．二甲苯III 2min。16．85%酒精20s。8．80%酒精1min。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色。95%II酒精1min。自來水洗1min。無水乙醇洗去二甲苯1min2次。因此病理學(xué)工作者必需學(xué)習(xí)和掌握這種染色方法。組織冷凍過硬易碎，若冷凍不夠，組織塊硬度不足，切片呈粥糜狀，無法成片，應(yīng)用間歇冷卻法繼續(xù)冷卻。冰凍組織周圍的水不宜過多，用手檢查組織塊的硬度，當(dāng)可切成厚薄一致的切片時(shí)，即可切片。組織凍結(jié)后，將組織固著器裝到切片機(jī)上，調(diào)整組織的切面與刀刃平行并貼近刀刃，將厚度調(diào)至適當(dāng)位置后，關(guān)閉觀察窗。（二）冰凍切片法冰凍切片在組織學(xué)技術(shù)中應(yīng)用廣泛，對臨床快速病理診斷尤其具有重要意義。傾角過大切片上卷，不能連在一起。時(shí)間不足，則石蠟不易浸透。（2）組織脫水、透明和浸蠟組織脫水用的各級酒精，應(yīng)保證相應(yīng)濃度，以便組織脫水徹底。3．注意事項(xiàng)（1）組織的取材和固定 取材時(shí)，組織塊的大小厚薄應(yīng)適當(dāng)，過大、過厚的組織，固定液不易滲透，易引起固定不良。而胃腸等組織，應(yīng)將漿膜面朝上）。將切片刀裝在刀架上，刀刃與蠟塊表面呈5℃夾角。要觀察病變的連續(xù)性，可制作連續(xù)切片。對于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（狗和兔等）組織，一般的脫水透明和浸蠟時(shí)間如下： 處理步驟處理時(shí)間（min）處理步驟處理時(shí)間（min）① 75%酒精長短不定二甲苯Ⅰ、Ⅱ⑥ 30 ② 85%酒精 120－300 二甲苯Ⅲ⑦ 60③ 95%酒精Ⅰ和Ⅱ 120－300 56－58℃石蠟⑧ 30 ④無水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 30 56－58℃石蠟⑨ 60－120 ⑤無水酒精Ⅲ 60－120 56－58℃石蠟⑩ 120－180注：摘自病理學(xué)技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，王伯，李玉松，黃高，張遠(yuǎn)強(qiáng)主編。浸蠟的過程是：二甲苯石蠟混合液（1：1）1小時(shí) 二甲苯石蠟混合液（1：2）1小時(shí)石蠟（1）1小時(shí)30分 石蠟（2）1小時(shí)30分上述過程可在56℃～58℃恒溫箱中進(jìn)行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。故組織經(jīng)正丁醇脫水后，不須經(jīng)二甲苯透明。酒精固定的組織材料不需沖洗。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時(shí)，固定液滲入組織液的深度只達(dá)2到3厘米。管狀，囊狀和皮膚組織應(yīng)注意垂直切取（橫切）。以石蠟切片法為代表，切片的基本制作過程是：組織取材→固定→沖洗→脫水→透明→浸蠟→組織包埋→組織切片→展片附貼→切片脫蠟→染色→脫水→染片透明→封固。病理報(bào)告簽發(fā)時(shí)限：冰凍報(bào)告一般在收到標(biāo)本后半小時(shí)左右發(fā)出臨時(shí)冰凍報(bào)告。一、手術(shù)中取下的標(biāo)本（不論組織大小）都必須送做病理檢查，不得隨意丟棄。開展快速石蠟切片病理診斷技術(shù)，既能使患者得到盡早診斷，從而得到及時(shí)治療，減輕痛苦，同時(shí)又能使病人縮短就診時(shí)間及住院天數(shù)，減輕醫(yī)療費(fèi)用，方便了病人，實(shí)為一種優(yōu)質(zhì)、簡便、安全、快速的好方法。其程序基本是活檢當(dāng)天下午取材，晚上組織脫水及浸蠟，第二天上午包埋切片及染色，當(dāng)切片送達(dá)醫(yī)生手里時(shí)，已是第二天的上午，下午看閱切片，至復(fù)檢醫(yī)生手里時(shí)，已是第三天的時(shí)間了。超聲波快速石蠟制片具有操作簡便，時(shí)間短不易誤診，病理切片資料可長期保存等優(yōu)點(diǎn)，目前病理科經(jīng)過一段時(shí)間的前期準(zhǔn)備及試驗(yàn)工作，該項(xiàng)目質(zhì)量可靠，結(jié)果穩(wěn)定，制片質(zhì)量近似于常規(guī)石蠟切片技術(shù)，完全符合病理診斷的要求，大大地提高了工作效率。周六、日不做快速石蠟切片檢查。然后由手術(shù)室專職人員將冰凍標(biāo)本 ﹑病理申請單一同送到病理科。七、凡違反上述規(guī)定者，按性質(zhì)﹑后果，責(zé)任到人。采取病料越新鮮越好，一般不超過死后24小時(shí)。二、固定固定的目的是迅速將組織細(xì)胞殺死，使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，糖，脂肪等凝固，從而保持與活