【正文】 織切片常用的制作方法有三種。因此應(yīng)細(xì)致、耐心、認(rèn)真負(fù)責(zé)，并事先做好計(jì)劃安排。應(yīng)選擇病變部與可疑病變部切取，切取時(shí)要由表及里，有淺入深并包括周圍正常組織一部分。切取組織塊大小。材料取下后，應(yīng)迅速固定。最常用的固定液是10%的福爾馬林溶液：使用時(shí)，用40%的甲醛飽和水溶液10毫升，加水90毫升配成。沖洗時(shí)如不方便用流水沖洗，也可用較大容器盛裝水浸洗，每隔相當(dāng)時(shí)間換水一次。脫水的目的在于將組織內(nèi)的水分用酒精或其他溶劑置換出來(lái)，為石蠟等其他包埋劑浸入組織創(chuàng)造條件。除用酒精作脫水劑外，還可以用正丁醇（N—Butyla alcohol）。五、透明透明的目的是將組織內(nèi)的酒精用礦物油或植物油置換出來(lái)，并溶解石蠟，幫助石蠟浸透組織。通常選擇熔點(diǎn)在52～56℃之間的石蠟，并視切片時(shí)環(huán)境的氣溫而選擇。根據(jù)需要，包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。待蠟液出現(xiàn)凝固層后，即輕輕放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。常用的切片工具包括組織切片機(jī)、切片刀和自動(dòng)磨刀儀器等。在切片前應(yīng)先切去標(biāo)本周圍過(guò)多的石蠟（此過(guò)程稱為修塊）但也不能留得太少，否則易造成組織破壞，連續(xù)切片時(shí)分片困難。1．切片前的準(zhǔn)備（1）固定后的標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、浸蠟和包埋后，制成蠟塊。（2）準(zhǔn)備充足的經(jīng)過(guò)處理的清潔載玻片和恒溫烤片裝置，大中號(hào)優(yōu)質(zhì)狼毫毛筆和鉛筆（用于在載玻片的粗糙端寫號(hào)），如用普通載玻片，可用碳素墨水和蛋白甘油按3：1體積混合后書寫。（2）切片多使用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，使用時(shí)左手執(zhí)毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪。為減少切片刀與組織塊在切片過(guò)程中產(chǎn)生的熱量，使石蠟保持合適的硬度，切片時(shí)可經(jīng)常用冰塊冷卻切片刀和組織塊，尤其在夏季高溫季節(jié)更為必要。撈起切片后，立即寫上編號(hào)。但對(duì)腦組織待完全晾干后，才能進(jìn)行烤片。陳舊、腐敗和干枯的組織不宜制作切片。至于組織固定的時(shí)間，根據(jù)具體情況加以掌握。遇到此情況，可將組織浸在香柏油中軟化，用二甲苯洗去香柏油后，再重新浸蠟和包埋。二甲苯透明也應(yīng)充分，否則不利于石蠟的浸透?？傊?，組織脫水、透明和浸蠟對(duì)于切片質(zhì)量都有一定影響，組織脫水、透明和浸蠟過(guò)度，組織塊變硬變脆，因此對(duì)于小塊組織或小動(dòng)物標(biāo)本應(yīng)注意時(shí)間。全鋼刀或單面鎢刀也適合石蠟或火棉膠包埋的骨組織。應(yīng)注意維護(hù)切片機(jī)，防止因螺絲松動(dòng)產(chǎn)生震動(dòng)，切片時(shí)會(huì)造成切片厚薄不均。此法可保存組織內(nèi)的可溶性物質(zhì)，防止蛋白質(zhì)變性和酶的失活，減少抗原的丟失。冰凍切片多用于新鮮組織，甲醛固定的組織和低溫冰箱冷藏的組織塊等。一般調(diào)節(jié)溫度為－25℃左右。切出切片用載玻片貼附后，進(jìn)行吹干或固定。接通循環(huán)流水后，再接通電源，而且在使用的全過(guò)程中流水不能中斷，關(guān)閉電路后，才能停水。已固定的組織切片，收集于清水中。4．二氧化碳冰凍法 將組織塊用蒸餾水洗后，放在冰凍切片機(jī)的冷凍臺(tái)上，加蒸餾水少許。5．冰凍切片粘片法冰凍切片粘片法基本按石蠟切片的粘片處理，但烤片溫度不宜超過(guò)40℃。在病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室中稱為常規(guī)染色方法。蘇木精在堿性染料中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。隨著科學(xué)技術(shù)快速發(fā)展和電子計(jì)算機(jī)的廣泛應(yīng)用，染色自動(dòng)儀器的出現(xiàn)，許多實(shí)驗(yàn)室已用全自動(dòng)染色機(jī)代替人工染色。90%酒精1min。自來(lái)水洗1min。自來(lái)水洗或蒸餾水洗1min。90%酒精30s。無(wú)水乙醇II 2min。中性樹膠或加拿大樹膠封片。2．二甲苯II 10min。6．95%酒精I(xiàn)I 1min。10．蘇木精染色1至5min。14．伊紅染色30s至5min。18．95%酒精1min。22．二甲苯I 2min。（四）冰凍切片蘇木精伊紅染色1．恒冷箱冰凍切片，粘貼在載玻片上，用95%酒精95ml和冰醋酸5ml的混合固定液固定1min。4．1%鹽酸酒精分化20s。8．伊紅染色20s～1min。12．95%酒精1min。16．二甲苯II 2min。（1）Harris蘇木精的配制 蘇木精1g 硫酸鋁鉀15g 無(wú)水乙醇10ml 蒸餾水200ml先用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀，用無(wú)水乙醇溶解蘇木精再倒入已溶解的硫酸鋁鉀蒸餾水中，煮沸1min后，稍冷卻，繼續(xù)加熱至染液變?yōu)樽霞t色，用紗布蓋瓶口，用前濾紙過(guò)濾后每100ml加冰醋酸5ml。兩液溶解后將其混合，加入碘酸鈉待蘇木精氧化成紫紅色，再加入冰醋酸。4．鹽酸酒精分化液的配制 ～1ml75%酒精99ml此液用一段時(shí)間后需要延長(zhǎng)或更換液體，新液分化時(shí)間要短。蘇木精染色后，不宜在水中和鹽酸酒精停留過(guò)長(zhǎng)，切片分化程度應(yīng)在鏡下觀察，分化過(guò)度，應(yīng)水洗后重新在蘇木精中染色，再水洗分化和使切片在自來(lái)水或稀氨水中充分變藍(lán)。常用切片封片膠有國(guó)產(chǎn)的中性樹膠，光學(xué)樹膠，加拿大樹膠和合成樹脂（DPX）。（5）常規(guī)石蠟切片和HE染色標(biāo)本的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（全國(guó)統(tǒng)一評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)）①切片完整，厚度4－6um，薄厚均勻，無(wú)褶無(wú)刀痕。結(jié)果：經(jīng)穿刺活檢，50例患者中AFP、Glypican3陽(yáng)性的有32例，%，經(jīng)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)，47例患者的細(xì)胞組織呈現(xiàn)變異性，%，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)的陽(yáng)性率明顯高于穿刺活檢的陽(yáng)性率，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P免疫組織化學(xué)染色技術(shù)是通過(guò)抗原和抗體的結(jié)合的反應(yīng)來(lái)確定被檢測(cè)的細(xì)胞中是否存在特異性的抗體，從而對(duì)疾病進(jìn)行診斷。50例腫瘤患者中，其中女性有20例，男性有30例，年齡（2461）歲，平均年齡（177。將固定好的切片脫蠟，脫蠟后在室溫下用3%的雙氧水孵育10min，然后用蒸餾水洗滌3次，每次保持3min，之后用高壓鍋在110度環(huán)境下修復(fù)2min,用PBS洗液洗滌3次，每次5min，加入一滴一抗，在室溫下孵育2個(gè)小時(shí)，接著用PBS洗液洗滌3次，每次5min，加入U(xiǎn)ltarsensitiveTM試劑之后在室溫下孵育20分鐘，再用PBS液洗滌，洗滌之后用DAB顯色，采用蒸餾水沖洗，采用蘇木素復(fù)染1個(gè)小時(shí)，采用梯度乙醇脫水，使用二甲苯透明，用中性樹膠封固，再采用PBS作為陰性對(duì)照，染色呈現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性。免疫組織化學(xué)染色主要包括固定、染色、切片、脫色等過(guò)程，整個(gè)過(guò)程的操作雖然比較簡(jiǎn)單，但是卻容易受到外界環(huán)境因素的影響，導(dǎo)致病理診斷中出現(xiàn)一定的誤診現(xiàn)象，所以這就要求操作人員在操作過(guò)程中應(yīng)該嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作[2]。但是不可否認(rèn)的是，這并不影響免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展。Ⅳ型膠原是基膜中的重要組成成分，完整的基膜更是良性上皮細(xì)胞的標(biāo)志，如果基膜斷裂或者消失的話則說(shuō)明腫瘤已經(jīng)發(fā)展成為了惡性腫瘤[5]。取材：組織標(biāo)本的選擇即取材，取材的目的是正確的獲取所需要的標(biāo)本或標(biāo)本的某一部位。用其他浸透劑（火棉膠，碳蠟，明膠等）滲入組織內(nèi)部的過(guò)程稱為浸透或透入包埋：使用包埋劑將處理過(guò)的組織包于其中，使組織達(dá)到一定韌度和硬度，有利于切片。封固劑：使染色后的組織封固于載玻片與蓋玻片 之間而不與空氣直接接觸，避免氧化褪色；折光率與玻片的折光率相似?？乖捍碳C(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答產(chǎn)生相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)。襯染（復(fù)染）：免疫組化染色后加用其他染料復(fù)染，襯托組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，使形態(tài)與功能密切相關(guān)，利于結(jié)果分析?？瞻谆蛱娲鷮?duì)照：以緩沖液（如PBS）或與第一抗體同源的正常動(dòng)物血清取代第一抗體，結(jié)果應(yīng)為陰性。