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正文內(nèi)容

病理組織工作站-wenkub

2024-11-05 01 本頁面
 

【正文】 1:2)1小時石蠟(1)1小時30分 石蠟(2)1小時30分上述過程可在56℃~58℃恒溫箱中進(jìn)行,含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。常用的透明劑為二甲苯(Xylol),因其穿透力較強(qiáng),因而組織在二甲苯中停留時間不宜過長,一般透明時間在30分鐘左右即可。故組織經(jīng)正丁醇脫水后,不須經(jīng)二甲苯透明。由于酒精可以任何比例與水結(jié)合,對組織穿透力強(qiáng),又能使組織硬化,因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中,應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。酒精固定的組織材料不需沖洗。一般均用流水(自來水)沖洗12到24小時左右。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時,固定液滲入組織液的深度只達(dá)2到3厘米。切取后,放入事先準(zhǔn)備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中,并做好標(biāo)記。管狀,囊狀和皮膚組織應(yīng)注意垂直切取(橫切)。切取的工具要清潔。以石蠟切片法為代表,切片的基本制作過程是:組織取材→固定→沖洗→脫水→透明→浸蠟→組織包埋→組織切片→展片附貼→切片脫蠟→染色→脫水→染片透明→封固。六、病理標(biāo)本檢查后至少保留一個月。病理報告簽發(fā)時限:冰凍報告一般在收到標(biāo)本后半小時左右發(fā)出臨時冰凍報告。四、凡送檢冰凍病理標(biāo)本,手術(shù)醫(yī)師必須按要求填寫冰凍病理申 請單,并由手術(shù)主刀或一助(特殊情況下可由手術(shù)室專職人員)將手 術(shù)標(biāo)本給病人家屬或委托人確認(rèn)。一、手術(shù)中取下的標(biāo)本(不論組織大?。┒急仨毸妥霾±頇z查,不得隨意丟棄。骨組織及淋巴結(jié)組織建議做常規(guī)石蠟病理切片檢查。開展快速石蠟切片病理診斷技術(shù),既能使患者得到盡早診斷,從而得到及時治療,減輕痛苦,同時又能使病人縮短就診時間及住院天數(shù),減輕醫(yī)療費(fèi)用,方便了病人,實為一種優(yōu)質(zhì)、簡便、安全、快速的好方法。超聲波快速石蠟制片機(jī)能提高組織內(nèi)分子和溶劑分子的運(yùn)動速度,它能使組織的蛋白質(zhì)迅速發(fā)生凝固并保持細(xì)胞原結(jié)構(gòu),因而能快速固定組織并保持組織的外形和柔韌性,有利于切片。其程序基本是活檢當(dāng)天下午取材,晚上組織脫水及浸蠟,第二天上午包埋切片及染色,當(dāng)切片送達(dá)醫(yī)生手里時,已是第二天的上午,下午看閱切片,至復(fù)檢醫(yī)生手里時,已是第三天的時間了。這是一般的工作時間,可這對于急需獲得病理結(jié)果的患者來說,三天時間確實太長,尤其是門診病人,遠(yuǎn)道求醫(yī)的患者,或者外地的患者,三天的時間就意味著等待,住宿及消費(fèi)。超聲波快速石蠟制片具有操作簡便,時間短不易誤診,病理切片資料可長期保存等優(yōu)點,目前病理科經(jīng)過一段時間的前期準(zhǔn)備及試驗工作,該項目質(zhì)量可靠,結(jié)果穩(wěn)定,制片質(zhì)量近似于常規(guī)石蠟切片技術(shù),完全符合病理診斷的要求,大大地提高了工作效率。醫(yī)生申請快速石蠟切片病理檢查的注意事項:如需做快速石蠟病理檢查,請在申請單上注明快速石蠟病理檢查。周六、日不做快速石蠟切片檢查。二、凡需手術(shù)病員,由床位醫(yī)生術(shù)前填寫“病理申請單”,于手 術(shù)當(dāng)天與病歷一起送人手術(shù)室。然后由手術(shù)室專職人員將冰凍標(biāo)本 ﹑病理申請單一同送到病理科。如遇特殊情況應(yīng)及時通知手術(shù)室,三天后發(fā)出正式冰凍報告。七、凡違反上述規(guī)定者,按性質(zhì)﹑后果,責(zé)任到人。以上基本過程是互相聯(lián)系的,任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題,都將使整個切片制作歸于失敗。采取病料越新鮮越好,一般不超過死后24小時。帶有薄膜的組織,要防止切時薄膜分離和脫落。二、固定固定的目的是迅速將組織細(xì)胞殺死,使細(xì)胞中的蛋白質(zhì),糖,脂肪等凝固,從而保持與活組織相似的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。因此,可以放置冰箱內(nèi)固定,使組織內(nèi)酶失去作用,細(xì)菌也能停止滋生。及時沖洗尚有停止固定的作用,防止固定過度,有利于制片染色。四、脫水經(jīng)過固定的組織,沖洗后要進(jìn)行脫水。脫水必須充分,否則給浸蠟造成困難。用正丁醇作脫水劑,組織塊收縮減低,也不會過硬,故比酒精優(yōu)越。六、浸蠟 浸蠟是指組織經(jīng)過透明作用以后,放入溶化的石蠟中浸滲,使石蠟浸入組織塊中,冷卻后,才能進(jìn)行切片。七、包埋包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。(2)迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液,淹沒組織塊。八、組織切片不同的切片制備方法,其切片方法也有較大差別,組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。為現(xiàn)在病理診斷常用的制作切片的方法。除此之外,石蠟包埋的組織便于長期保存,因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用,最普遍的一種方法。用顯微鏡觀察可確定刀口是否平整,有無缺口。將蠟塊固定,調(diào)整蠟塊與刀至合適位置,并移動刀架或蠟塊固定裝置,使蠟塊與刀刃接觸。切片經(jīng)30%的酒精初展后,再用載玻片撈起放入展片箱更易展平。(4)撈片時注意位置,要留出貼標(biāo)簽的空間,并注意整齊美觀。血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時烤片。過小、過薄的組織,在固定和脫水的過程中易變硬或產(chǎn)生彎曲扭轉(zhuǎn),同樣影響切片質(zhì)量。組織固定時,固定液的量應(yīng)充足,至少要在4倍以上,同時注意組織塊不要與容器粘連。但無水酒精中,組織塊放置時間不宜過長,否則組織過硬,切片困難。此時應(yīng)將組織在新的酒精中重新脫水。浸蠟的溫度也不宜過高,時間長短也應(yīng)加以控制。骨組織切片時,用重型刀較好。過小則切片皺起。因而有人采用冷凍干燥包埋法,即將新鮮組織低溫速凍,利用冷凍干燥機(jī)在真空和低溫條件下除去組織內(nèi)的水分,然后用甲醛蒸汽固定干燥后的組織,而后在進(jìn)行浸蠟、包埋和切片。另外,因冰凍切片制作時不經(jīng)各級酒精的脫水,二甲苯的透明等過程,因此對脂肪和類脂的保存較好,在進(jìn)行脂肪染色和神經(jīng)組織髓鞘的染色常用。恒冷箱切片機(jī)的種類較多,可根據(jù)實際情況加以選用。初步修出組織切面后,放下抗卷板,開始切片。2.半導(dǎo)體制冷冰凍切片法 組織塊放置在半導(dǎo)體制冷臺上,加少許蒸餾水,調(diào)好切片的厚度。切片用毛筆展平后,立即用載玻片貼附,待切片剛要融化時,即刻入固定液內(nèi)固定1min。3.甲醇制冷器 制冷箱為附有帶導(dǎo)管的制冷臺和制冷刀的甲醇循環(huán)裝置,其冷卻速度較快,屬開放式,做一般常規(guī)冰凍切片用。硬度一般在剛開始解凍時最適合,應(yīng)迅速切片。九、蘇木精-伊紅染色方法蘇木精伊紅染色方法,簡稱HE染色方法,是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的細(xì)胞與組織學(xué)最廣泛應(yīng)用的染色方法。(一)HE染色的基本原理1.細(xì)胞核染色的原理細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而染色。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。95%酒精1min。蘇木精染色1min至5min。稀氨水(1%)反藍(lán)30s。85%酒精脫水20s。無水乙醇I 2min。二甲苯III 2min。(三)自動染色機(jī)蘇木精伊紅染色程序1.二甲苯I 10min。5.95%酒精I(xiàn) 1min。9.自來水洗1min。13.自來水洗5min。17.90%酒精30s。21.無水乙醇II 2min。25.中性樹膠或加拿大樹膠封片。3.自來水洗30s。7.自來水洗20s。11.90%酒精30s。15.二甲苯I 1min。(五)染色液的配制1.蘇木精(素)蘇木精是一種純天然染料,是從蘇木素樹提煉出來的,蘇木樹主產(chǎn)墨西哥的坎偑切,蘇木精的染色性能差,經(jīng)過一百多年精心加工配制,現(xiàn)用
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