【正文】 1：2）1小時石蠟（1）1小時30分 石蠟（2）1小時30分上述過程可在56℃～58℃恒溫箱中進行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。常用的透明劑為二甲苯（Xylol），因其穿透力較強，因而組織在二甲苯中停留時間不宜過長，一般透明時間在30分鐘左右即可。故組織經(jīng)正丁醇脫水后，不須經(jīng)二甲苯透明。由于酒精可以任何比例與水結合，對組織穿透力強，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中，應從低濃度逐漸到高濃度。酒精固定的組織材料不需沖洗。一般均用流水（自來水）沖洗12到24小時左右。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時，固定液滲入組織液的深度只達2到3厘米。切取后，放入事先準備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標記。管狀，囊狀和皮膚組織應注意垂直切?。M切）。切取的工具要清潔。以石蠟切片法為代表，切片的基本制作過程是：組織取材→固定→沖洗→脫水→透明→浸蠟→組織包埋→組織切片→展片附貼→切片脫蠟→染色→脫水→染片透明→封固。六、病理標本檢查后至少保留一個月。病理報告簽發(fā)時限：冰凍報告一般在收到標本后半小時左右發(fā)出臨時冰凍報告。四、凡送檢冰凍病理標本，手術醫(yī)師必須按要求填寫冰凍病理申 請單，并由手術主刀或一助（特殊情況下可由手術室專職人員）將手 術標本給病人家屬或委托人確認。一、手術中取下的標本（不論組織大小）都必須送做病理檢查，不得隨意丟棄。骨組織及淋巴結組織建議做常規(guī)石蠟病理切片檢查。開展快速石蠟切片病理診斷技術，既能使患者得到盡早診斷，從而得到及時治療，減輕痛苦，同時又能使病人縮短就診時間及住院天數(shù)，減輕醫(yī)療費用，方便了病人，實為一種優(yōu)質(zhì)、簡便、安全、快速的好方法。超聲波快速石蠟制片機能提高組織內(nèi)分子和溶劑分子的運動速度，它能使組織的蛋白質(zhì)迅速發(fā)生凝固并保持細胞原結構，因而能快速固定組織并保持組織的外形和柔韌性，有利于切片。其程序基本是活檢當天下午取材，晚上組織脫水及浸蠟，第二天上午包埋切片及染色，當切片送達醫(yī)生手里時，已是第二天的上午，下午看閱切片，至復檢醫(yī)生手里時，已是第三天的時間了。這是一般的工作時間，可這對于急需獲得病理結果的患者來說，三天時間確實太長，尤其是門診病人，遠道求醫(yī)的患者，或者外地的患者，三天的時間就意味著等待，住宿及消費。超聲波快速石蠟制片具有操作簡便，時間短不易誤診，病理切片資料可長期保存等優(yōu)點，目前病理科經(jīng)過一段時間的前期準備及試驗工作，該項目質(zhì)量可靠，結果穩(wěn)定，制片質(zhì)量近似于常規(guī)石蠟切片技術，完全符合病理診斷的要求，大大地提高了工作效率。醫(yī)生申請快速石蠟切片病理檢查的注意事項：如需做快速石蠟病理檢查，請在申請單上注明快速石蠟病理檢查。周六、日不做快速石蠟切片檢查。二、凡需手術病員，由床位醫(yī)生術前填寫“病理申請單”，于手 術當天與病歷一起送人手術室。然后由手術室專職人員將冰凍標本 ﹑病理申請單一同送到病理科。如遇特殊情況應及時通知手術室，三天后發(fā)出正式冰凍報告。七、凡違反上述規(guī)定者，按性質(zhì)﹑后果，責任到人。以上基本過程是互相聯(lián)系的，任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都將使整個切片制作歸于失敗。采取病料越新鮮越好，一般不超過死后24小時。帶有薄膜的組織，要防止切時薄膜分離和脫落。二、固定固定的目的是迅速將組織細胞殺死，使細胞中的蛋白質(zhì)，糖，脂肪等凝固，從而保持與活組織相似的結構狀態(tài)。因此，可以放置冰箱內(nèi)固定，使組織內(nèi)酶失去作用，細菌也能停止滋生。及時沖洗尚有停止固定的作用，防止固定過度，有利于制片染色。四、脫水經(jīng)過固定的組織，沖洗后要進行脫水。脫水必須充分，否則給浸蠟造成困難。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮減低，也不會過硬，故比酒精優(yōu)越。六、浸蠟 浸蠟是指組織經(jīng)過透明作用以后，放入溶化的石蠟中浸滲，使石蠟浸入組織塊中，冷卻后，才能進行切片。七、包埋包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。（2）迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液，淹沒組織塊。八、組織切片不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。為現(xiàn)在病理診斷常用的制作切片的方法。除此之外，石蠟包埋的組織便于長期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用，最普遍的一種方法。用顯微鏡觀察可確定刀口是否平整，有無缺口。將蠟塊固定，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，并移動刀架或蠟塊固定裝置，使蠟塊與刀刃接觸。切片經(jīng)30%的酒精初展后，再用載玻片撈起放入展片箱更易展平。（4）撈片時注意位置，要留出貼標簽的空間，并注意整齊美觀。血凝塊和皮膚組織應及時烤片。過小、過薄的組織，在固定和脫水的過程中易變硬或產(chǎn)生彎曲扭轉(zhuǎn)，同樣影響切片質(zhì)量。組織固定時，固定液的量應充足，至少要在4倍以上，同時注意組織塊不要與容器粘連。但無水酒精中，組織塊放置時間不宜過長，否則組織過硬，切片困難。此時應將組織在新的酒精中重新脫水。浸蠟的溫度也不宜過高，時間長短也應加以控制。骨組織切片時，用重型刀較好。過小則切片皺起。因而有人采用冷凍干燥包埋法，即將新鮮組織低溫速凍，利用冷凍干燥機在真空和低溫條件下除去組織內(nèi)的水分，然后用甲醛蒸汽固定干燥后的組織，而后在進行浸蠟、包埋和切片。另外，因冰凍切片制作時不經(jīng)各級酒精的脫水，二甲苯的透明等過程，因此對脂肪和類脂的保存較好，在進行脂肪染色和神經(jīng)組織髓鞘的染色常用。恒冷箱切片機的種類較多，可根據(jù)實際情況加以選用。初步修出組織切面后，放下抗卷板，開始切片。2．半導體制冷冰凍切片法 組織塊放置在半導體制冷臺上，加少許蒸餾水，調(diào)好切片的厚度。切片用毛筆展平后，立即用載玻片貼附，待切片剛要融化時，即刻入固定液內(nèi)固定1min。3．甲醇制冷器 制冷箱為附有帶導管的制冷臺和制冷刀的甲醇循環(huán)裝置，其冷卻速度較快，屬開放式，做一般常規(guī)冰凍切片用。硬度一般在剛開始解凍時最適合，應迅速切片。九、蘇木精－伊紅染色方法蘇木精伊紅染色方法，簡稱HE染色方法，是生物學和醫(yī)學的細胞與組織學最廣泛應用的染色方法。（一）HE染色的基本原理1．細胞核染色的原理細胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結構中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結合而染色。伊紅是細胞漿的良好染料。95%酒精1min。蘇木精染色1min至5min。稀氨水（1%）反藍30s。85%酒精脫水20s。無水乙醇I 2min。二甲苯III 2min。（三）自動染色機蘇木精伊紅染色程序1．二甲苯I 10min。5．95%酒精I 1min。9．自來水洗1min。13．自來水洗5min。17．90%酒精30s。21．無水乙醇II 2min。25．中性樹膠或加拿大樹膠封片。3．自來水洗30s。7．自來水洗20s。11．90%酒精30s。15．二甲苯I 1min。（五）染色液的配制1．蘇木精（素）蘇木精是一種純天然染料，是從蘇木素樹提煉出來的，蘇木樹主產(chǎn)墨西哥的坎偑切，蘇木精的染色性能差，經(jīng)過一百多年精心加工配制，現(xiàn)用