【正文】 Bioanic amp。 隨后對(duì)此類(lèi)化合物進(jìn)行了構(gòu)效關(guān)系研究，得到了 TLR8 選擇性激動(dòng)劑，結(jié)構(gòu)如下圖所示： 以及其它的 TLR7/8 激動(dòng)劑，結(jié)構(gòu)如下圖所示： 32 20xx 年 3M 將絕大部分的 TLR激動(dòng)劑 產(chǎn)權(quán)打包出售給 Coley Pharmaceutical Group，此公司隨后被 Pfizer 收購(gòu)。 項(xiàng)目 活性報(bào)告 IFNα和 TNFα PBMCs 此專(zhuān)利公布約 400 化合物，代表性化合物結(jié)構(gòu)如下表所示： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 1 2 3 、 8氧 去氮嘌呤（ 8oxodeazapurines）類(lèi) /咪唑并吡啶酮類(lèi)（ Imidazopyridinones） Pfizer 披露了一組強(qiáng)效的 8氧 去氮嘌呤類(lèi) TLR7 激動(dòng)劑， 代表性化合物（ PF4171455） 結(jié)構(gòu)如下圖所示，被開(kāi)發(fā)作為 HCV 治療藥物。作為已披露的腺嘌呤衍生物的一個(gè)，在小鼠脾細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)以及小鼠體內(nèi)口服實(shí)驗(yàn)中都表現(xiàn)出強(qiáng)效的IFN 誘導(dǎo)作用。D 公司披露了以下結(jié)構(gòu)骨架： 46 此專(zhuān)利 披露了 10 個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，活性結(jié)果見(jiàn)下表（ 活性結(jié)果 pEC50為 TLR7激動(dòng)劑誘導(dǎo) SEAP（ secreted alkaline phosphatase） 產(chǎn)生達(dá)到此化合物最大水平一半時(shí)所需的濃度）。D 公司披露了以下結(jié)構(gòu)骨架： 此專(zhuān)利 披露了約 75 個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，部分活性結(jié)果見(jiàn)下表（ MEC， 活性結(jié)果為誘導(dǎo) INF 所需最低濃度）。 而在專(zhuān)利 US20xx098294A130中， Dennis A. Carson公司披露了以下骨架： 此類(lèi)化合物是 HCV 治療藥物的前藥，但在專(zhuān)利中并沒(méi)有提及機(jī)理是否是通過(guò) TLR途徑實(shí)現(xiàn)，然而鑒于其與上述 Anadys 化合物結(jié)構(gòu)的相似性，也將其進(jìn)展列出。隨后，對(duì) ANA975 配方 的進(jìn)一步研究也被終止，由此分析，每日給藥的劑量無(wú)法達(dá)到足夠的治療指數(shù)。 67 據(jù)此合成了以下幾個(gè)化合物（顯示部分）： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 3i 7 3g 8 9 選擇化合物 3i測(cè)試器 TLR7活性，結(jié)果如下： 項(xiàng)目 活性報(bào)告 TLR7 、 三氮唑類(lèi)（ Triazole） 在專(zhuān)利 WO20xx030996 A139中， Coley Pharmaceutical Group, 了以下兩個(gè)化合物，它們是 TLR7 和 TLR8 的強(qiáng)效激動(dòng)劑。發(fā)現(xiàn)也具有良好的耐受性，并且能夠有效的產(chǎn)生艾沙托立賓。 項(xiàng)目 TLR7 活性報(bào)告 HCVHEK293 Assay EC50 范圍為 IFNPMBC Assay ECmax范圍為 ； 部分化合物結(jié)構(gòu)見(jiàn)下表： 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 編號(hào) 結(jié)構(gòu) 1 2 3 4 5 6 7 8 56 9 10 11 12 13 14 15 16 Pfizer 公司 US20xx264448A129專(zhuān)利披露了 250 個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，骨架如下： 部分活性結(jié)果與結(jié)構(gòu)見(jiàn)下表（ 活性結(jié)果 ED50為 TLR7激動(dòng)劑增加干擾素 IFN釋放從而使 PBL/HCV 復(fù)制水平降低 50%時(shí)的濃度）。D 公司對(duì)右側(cè)邊鏈末端為酯基的情況進(jìn)行了研究，披露了以下骨架： 此類(lèi)化合物是 TLR7 的激動(dòng)劑，給出了近 70 個(gè)化合物結(jié)構(gòu)。D）的專(zhuān)利，以及相同時(shí)期 Gilead Sciences, ，最后還有少部分 GlaxoSmithKline ，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)為都具有相同的中心骨架。 17此類(lèi)化合物是 TLR7 的強(qiáng)效激動(dòng)劑，并在結(jié)構(gòu)上和39 艾沙托立賓（ isatoribine，后面會(huì)介紹）的堿性部分結(jié)構(gòu)相似。 目前，相關(guān)專(zhuān)利中對(duì)此類(lèi)化合物的涵蓋范圍如下： 在專(zhuān)利 US20xx245289A110中， 4SC ： 此系列化合物是 TLR7 選擇性激動(dòng)劑，用作腫瘤的治療。 瑞喹莫德是 TLR7/8 的激動(dòng)劑，作為 HCV 的治療藥物進(jìn)入臨床 Ⅱ a 階段。 Whitaker, T.。 medicinal chemistry letters 20xx, 22 (10), 34883491. 6. Zhang, H.。 Zhang, H.。 Michael, .。 Peter, T. N.。 Fridell, R.。 Qiu, Y.。 Fukang, Y.。 Van, N. N.。 Min, D.。 Min, G.。 Amy, S. R.。 (c) Omar, D. L.。 Michael, H. .。 Julie, A. L.。 Nicholas, A. M.。 Fukang, Y.。 Brodsky, O.。 (h) Sofia, M., Nucleotide prodrugs for HCV therapy. Antiviral Chem. Chemother 20xx。 (e) Qiuwei, P.。 (c) Manns, M.。但是比較 30 與化合物 1，發(fā)現(xiàn)其亞型選擇性不同。 然而，鹵素取代25 也使在淋巴細(xì)胞上的毒性提高。 首先，通過(guò)對(duì)烯烴電子生物等排體的考察，發(fā)現(xiàn)其 所連苯環(huán)傾向于反式共平面結(jié)構(gòu)，而 換成飽和烷基鏈 后活性降低 67 倍， 醚鏈活性 比烷基鏈進(jìn)一步 降低 16倍 ，對(duì)此 ， 進(jìn)行構(gòu) 象 分析，認(rèn)為兩邊的苯環(huán)傾向于共平面或平行排列，而不是處于正交平面 ： 然后，考察鏈的長(zhǎng)短對(duì)活性的影響，發(fā)現(xiàn)將乙烯基置換成亞甲基，羰基，氧，都 會(huì)使 活性極大降低。 HCV replicon (pM) EC90 20177。由 A 和 B圖分析可見(jiàn)，此二聚體在靠近氮端形成了一個(gè)相對(duì)平面的、堿性表面，并在兩個(gè) IB 區(qū)形成了大的溝。 NS5A 區(qū)域一中的 36198 殘基晶體結(jié)構(gòu)顯示其二聚為一個(gè) U 型結(jié)構(gòu)，并且內(nèi)表面排列一系列堿性氨基酸，此氨基酸被認(rèn)為是與病毒 RNA 結(jié)合部位。 二、 NS5A 靶點(diǎn)： NS5A 在 HCV 生命周期 中的復(fù)制 和組裝 階段發(fā)揮作用，如下圖一所示。 建議選取下列化合物做起點(diǎn)，進(jìn)行 HCV 創(chuàng)新藥物項(xiàng)目開(kāi)發(fā)： 核苷類(lèi) HCV 核苷聚合酶 NS5B抑制劑，此類(lèi)抑制劑活性好 、耐藥性好， 并 且比較 廣譜： Sofosbuvir (GS7977) Mericitabine (RG7128) 聯(lián)苯類(lèi)蛋白酶 NS5A 抑制劑，此類(lèi)抑制劑活性極高，并且和其它藥物連用效果較好，然而不耐病毒突變： Daclatasvir (BMS 790052) TLR7 激動(dòng)劑： 15 此類(lèi)化合物也是治療 HBV 潛在藥物 。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ JTK109 Discontinued NS5B Discovery NS5B ★★★★ ★★★☆ VX759 No Development Reported NS5B Clemizole Phase 1 Clinical NS4B ★★★★ ★★★☆ DEBIO025 Phase 3 Clinical Cyclophilin 抑制劑 與其它藥物聯(lián)用， GT1 ★★☆☆ ★★★☆ miravirsen 13 、 病毒組裝和釋放 。 、病毒進(jìn)入并脫殼 。非結(jié)構(gòu)蛋白部分則包括 NS2， NS3， NS4A， NS5A 和 NS5B， 非結(jié)構(gòu)蛋白對(duì)病毒的生活周期非常重要。 近來(lái)，全口服、無(wú)干擾素的直接靶向病毒的新一代抗丙肝藥物大量出現(xiàn)，為丙肝的徹底治愈帶來(lái)希望，其中尤其以吉立德 （ Gilead） 公司的 sofosbuvir 最具潛力 ?？赡艹霈F(xiàn)的急性癥狀包括發(fā)熱、全身乏力、食欲下降、惡心、嘔吐、腹痛、尿色深、大便顏色變淺、關(guān)節(jié)酸痛和黃疸（皮膚和眼白發(fā)黃）。最初被感染后，大約 80%的人并不會(huì)出現(xiàn)任何癥狀。結(jié)果，雖然一般認(rèn)為丙肝是可以治愈的，但很多人卻未能痊愈。 能編碼一長(zhǎng)度大約為 3014個(gè)氨基酸的多聚蛋白前體，后者可經(jīng)宿主細(xì)胞和病毒 自身蛋白酶作用后 ， 裂解成10 種病毒蛋白 ， 包括三種結(jié)構(gòu)蛋白，即分子量 19KD 的核衣殼蛋白（或稱(chēng)核心蛋白， Core）和兩種糖蛋白（分子量為 33KD 的 E1 蛋白，分子量 72Kd 的 E2 蛋4 白） ， p7 編碼一種膜內(nèi)在蛋白，其功能可能是一種離子通道。 最后綜合評(píng)價(jià)其風(fēng)險(xiǎn)與潛力，對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行挑選。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點(diǎn)等） 評(píng)價(jià) 風(fēng)險(xiǎn) 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ IDX375 No Development Reported NS5B ★★★☆ ★★★☆ Nesbuvir Discontinued NS5B MK0608 No Development Reported NS5B PSI6130 Discontinued NS5B PSI938 Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ deleobuvir Phase 3 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ 11 Tegobuvir Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ 12 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B和 NS5A。但考慮到成本優(yōu)勢(shì)，小分子的 TLR7 激動(dòng)劑也有其價(jià)值。 BMS0790052等抑制劑的活性雖然達(dá)到較理想水平，然而還存在易被病毒突變逃逸、潛在細(xì)胞毒性、藥代特性等方面問(wèn)題有待改進(jìn)。 并且，此組裝作用就是通過(guò)區(qū)域里的磷酸化作用調(diào)節(jié)的。 B） 二聚體表面電勢(shì)分布。D IRELAND 5 NT 四、 BMS790052(daclatasvir)研究 ： 、 BMS790052 部分活性數(shù)據(jù)： 表三、代表性 NS5A 抑制劑 BMS790052 活性數(shù)據(jù) 項(xiàng)目 數(shù)值 項(xiàng)目 數(shù)值 HCV replicon (pM) EC50 177。 片段 I 的構(gòu)效關(guān)系 3c： 片段 I 被相當(dāng)密集的考察過(guò)， 在通向 BMS790052 的道路中，對(duì)此部分的考察 是通過(guò)下面化合物 1 進(jìn)行的： 24 通過(guò)此部分考察發(fā)現(xiàn)此核心結(jié)構(gòu)的平面性、指向、極性、長(zhǎng)度都活性影響很大。 片段 II 和片段 III 的構(gòu)效關(guān)系 6： 在片段 II 的咪唑 4位引入噻吩、呋喃或苯基導(dǎo)致活性下降，但引入小基團(tuán)如氟、氯、溴等后 ， EC50基本不變， 而 EC90 有中等程度提高 ?；诖?，對(duì)一系列含氮雜環(huán)進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)異喹啉甲酰胺表現(xiàn)出與原來(lái)預(yù)測(cè)相一致的活性，即：其結(jié)構(gòu)是有 GT1b 高活性的苯乙酸和有 GT1a 高活性的苯甲酸的融合，而確實(shí)兼具了兩者的優(yōu)勢(shì)，如下圖所示， 鑒于此，對(duì)此類(lèi)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了詳細(xì)考察，主要考察取代基的影響，發(fā)現(xiàn) 取代基效應(yīng)非常明顯，兵器最終得到了雙取代化合物 30（結(jié)構(gòu)略），不僅在 GT1 兩個(gè)亞型上表現(xiàn)強(qiáng)的抑制活性，在 G2a JFH（ EC50 = nM）、 G2a NIH（ EC50 = 14nM）、G3a（ EC50 = nM）和 G5a hybrid（ EC50 = nM）也表現(xiàn)出強(qiáng)的抑制活性。 Rice, C., Understanding the hepatitis C virus life cycle paves the way for highly effective therapies. 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