【正文】 區(qū)下游緊接一開放的閱讀框（ ORF），其中基因組排列順序為 539。 NS2 和 NS3 具有蛋白酶活性，參與病毒多聚蛋白前體的切割。 5 圖二、 HCV 的基因結構 二、 HCV 生命周期： HCV 在體內(nèi)的生命周期可分為 以下過程： 病毒進入并脫殼，可能涉及 LDL受體和粘多糖； 轉譯以及加工多聚蛋白 NS3/NS4A； HCV RNA 復制，涉及到宿主內(nèi)質網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B， BS5B 和NS5A； 病毒組裝和釋放。 途徑 /新穎性 藥物 進展 備注（靶點等） 評價 風險 潛力 病毒進入 ★★★☆ ITX5061 phase 2 靶點： SRBI 避免 耐藥 問題 ★★★☆ ★★★☆ 7 、 轉譯以及加工多聚蛋白 。 ★☆☆☆ ★★★☆ Ledipasvir (GS5885) Phase 3, NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ GSK2336805 Phase 2 Clinical， NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ ABT267 Phase 3 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ ACH3102 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ IDX719 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ MK8742 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ PPI668 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆ ☆ ★★★☆ GS5816 Phase 2 Clinical NS5A ★☆☆☆ ★★★☆ A972338 Discovery NS5A ★★★☆ ★★☆☆ ?? No Development Reported NS5A ★★★☆ ★★☆☆ 9 、 HCV RNA 復制，涉及到宿主內(nèi)質網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B和 NS5A。 途徑 /新穎性 藥物 進展 備注（靶點等） 評價 風險 潛力 釋放 ★★★☆ celgosivir Phase 2 Glucosidase inhibitors ★★★☆ ★★★☆ 、 其它方式 。 其次，丙肝廣泛的基因類型（ 6 種基因型 100 多亞型）也是一大挑戰(zhàn)，尤其對非核苷類抑制劑以及第一代核苷類 NS3NS4A 蛋白酶抑制劑以及 NS5A 抑制劑。 16 第二章 基于 NS5A 抑制劑的創(chuàng)新藥物設計 一、 前言： 世界范圍內(nèi)約 億人感染 HCV，并且目前針對 HCV 最理想的治療手段是每周注射 INFα 并結合 每天兩次口服利巴韋林（ RBV）。并且此靶點對小分子調(diào)節(jié)劑及其敏感， BMS790052及其一系列類似物的 IC50值（ genotype 1b/bovine viral diarrhea virus replicon）達到皮摩爾級別 。此非結構蛋白質也參與若干細胞過程，比如干擾素抵抗以及凋亡調(diào)節(jié)。區(qū) 域二（ 250342 殘基）起著調(diào)節(jié)的功能，比如和蛋白激酶 PKR、 PI3K 以及 NS5B 相作用，并且，此區(qū)域也包含 IFN 敏感性決定區(qū)。而抗NS5A 抑制劑的突變位點也在 NS5A 的氨基端附近，位于蛋白和膜之間，表明抑制劑可能就結合在二聚體結合 面。 19 圖三、 NS5A 區(qū)域一的二聚體 結構 。 C） NS5A 結構相對內(nèi)質網(wǎng)膜的位置。 目前 研發(fā)較深入的 NS5A 抑制劑 總結 見表一，大部分化合物的結構沒有披露，但根據(jù)其專利信息，可以發(fā)現(xiàn)都是 BMS790052 的結構類似物。 t1/2 (min)(HLM) Elimination rate constant (k) Cytotoxicity, CC50 (μM) PBM 19 Cytotoxicity, CC50 (μM) Vero 21 Cytotoxicity, CC50 (μM) CEM CLint(μL/min/mg protein) CYP1A2 (μM) IC50 100 CYP1A2 (μM) IC90 100 CYP3A4 (μM) IC50 177。 BMS411 與 NS5A 蛋白二聚體結合模式預測圖，黃色棒球 部分代表高耐藥突變殘基。而延長飽和烷基鏈的鏈長，活性降低程度中等。 結果顯示，縮短此結構長度 使活性極大降低，而增加長度至三個苯環(huán)活性基本保持，而毒性下降。在片段 III 上的取代也表現(xiàn)出類似趨勢，小體積的疊氮取代活性 基本 保持，并且 （ 4R） 疊氮取代 在 PBM、 CEm和 Vero 細胞中沒有表現(xiàn)出任何毒性（ 100μM） ，（ 4S） 疊氮取代表現(xiàn)出毒性（略） 。 片段 IV 的構效關系 3d, e： 在此處的改造主要為提高在 GT1a 上的抑制活性，對此部分的考察 是通過下面化合物 3 進行的： 首先發(fā)現(xiàn)， 去除乙基， 在 GT1a 上的活性降低，但兩個化合物 苯甲酰胺和苯胺 環(huán)的二面角 大小 基本 相同 ，說明原化合物的 GT1a 上活性的提高不是鄰位取代引起的空間 效應 所致 。而比較 30 與化合物 3 苯甲酰胺和苯胺環(huán)的構想， 發(fā)現(xiàn)相差很大，推測，可能化合物 3 的構象與 NS5A GT1b的生物構象較符合，而 30 則與 NS5A GT1a 的較符合。 據(jù)此， 我們初步設計以 了第一階段工作計劃，先合成以 下幾種 Linker/Core 的化合物，之后再選擇活性較好的結構進行進一步環(huán)以及氨基酸部分改造 ： 并 三 環(huán)類 : 四元環(huán)類： 28 其它類： 29 參考文獻： 1. (a) Pawlotsky, ., Therapy of hepatitis C: from empiricis m to eradication. Hepatology (Baltimore, Md.) 20xx, 43 (2 Suppl 1), 20。 von Hahn, T., Novel therapies for hepatitis C one pill fits all? Nature reviews. Drug discovery 20xx。 Abrignani, S.。 Luc, J. W. v. d. L., New targets for treatment against HCV infection. Best Practice amp。 Bartenschlager, R., New targets for antiviral therapy of chronic hepatitis C. Liver international : official journal of the International Association for the Study of the Liver 20xx, 32 Suppl 1, 916。 (i) Lange, C.。 Marcotrigiano, J.。 Hickey, M.。 John, E. L.。 Min, G.。 Peter, T. N.。 Lawrence, B. S., Inhibitors of HCV NS5A: From Iminothiazolidinones to Symmetrical Stilbenes. ACS Medicinal Chemistry Letters 20xx, 2。 Jason, G.。 Mengping, L.。 Donald, O. B.。 JinHua, S.。 Nicholas, A. M.。 Van, N. N.。 Jason, T. G.。 Peter, T. N.。 JinHua, S.。 Andrew, C. G.。 (d) Denis, R. S. L.。 Hua, F.。 Julie, A. L.。 Peter, T. N.。 Lourdes, V.。 Xuejie, Y.。 Nguyen, V.。 Good, A.。Boyle, D.。 Lemm, J.。 Snyder, L., HCV NS5A replication plex inhibitors. Part 5: Discovery of potent and pangenotypic glycinamide cap derivatives. Bioanic amp。 Julie, A. L.。 Makonen, B.。 Lawrence, B. S.。 Zhou, L.。 Liu, P.。 Whitaker, T.。 Zhou, L.。 Tao, S.。 Coats, S.。 、 咪唑喹啉胺（ imidazoquinoline amine）類 咪喹莫德（ Imiquimod）在 1980 年代由 3M Pharmaceuticals 公司前身 Riker Laboratories 作為抗菌劑開發(fā)， 1997 年被批準用作治療局部 乳頭狀瘤病毒感染 。以，每周兩次，連續(xù)四周，在此計量水平下化合物能被很好的耐受，但是沒有表現(xiàn)出有意義的病毒載量和顯著的系統(tǒng)性細胞因子和生物標記物水平的改變。在 Pfizer收購后，重新作為 治療 HCV 藥物進行研發(fā)，并進入Ⅰ期健康人體上的原理驗證階段（ proofofmechanism）。一般化合物結構見下圖： 33 、 1取代 吡唑啉酮 （ 1Substituted Pyrazolo(3,4C) Ring） 類 在專利 US20xx163533A111中， Coley Pharmaceutical Group, 以下骨架： 骨架進一步細化，又分為以下幾種： 編號 結構 編號 結構 1 2 3 4 5 6 34 7 8 9 此類化合物進行了如下生物活性測試，但并無結果公布。 37 專利 US20xx197478A114披露了 119 個化合物結構，部分活性結果見下表（ 活性結果 EC50 為 TLR7 激動劑增加干擾素 IFN 釋放從而使 PBL/HCV 復制 水平降低 50%時的濃度）。其中， SM276001在 20xx 年作為 HBV 和 HCV 的治療藥物處在臨床前研究。 之后， Dainippon Sumitomo 公司又覆蓋了此類化合物的脂類前藥如 SM324405，用于吸入法治療過敏引起的呼吸道炎癥，并且不會引起任何系統(tǒng)性 IFNs（見下文分析）。 在專利 US20xx087443A120， Aamp。 編號 結構 編號 結構 1 pEC50= 2 pEC50= 3 pEC50= 4 pEC50= 48 5 6 7 而在專利 US20xx099870A122中， Aamp?，F(xiàn)將部分化合物活性列出 （ TLR7 HEK293） ： 編號 結構 編號 結構 1 EC50= 3 EC50= 50 15 EC50= 16 EC50= 17 EC50= 18 EC50= 在專利 US20xx306610A124中， Aamp。 化合物結構見下表： 編號 結構 編號 結構 A C D F J N R W 53 Y AI AJ AQ AS AU AY AW AZ BE BG BH BM 并且，上表中化合物 W 的活性在專利 US20xx150836A126中被深入報道。 編號 結構 編號 結構 57 1 ED50=30 nM 2 ED50=5 nM 4 ED50=72 nM 5 ED50=42 nM 6 ED50=17 nM 注：化合物 1228 在 10μM 濃度下對 HCV 的復制都表現(xiàn)出大于 50%的抑制。在原理驗證階段艾沙托立賓表現(xiàn)出良好的耐受性，以 800mg最大劑量給藥， 8/12 個病人顯示出統(tǒng)計性的病毒載量降低，幅度 ，并且在此過程中伴隨著劑 量依賴的 IFN 刺激的 2,5OAS 和 ISG15產(chǎn)生的系統(tǒng)性增加。但隨后，由于在動物毒性研究中發(fā)現(xiàn)其會劑量依賴導致強烈的免疫刺激， Anadys 終止了針對 HCV 病人的一個 28 天的Ⅰ b 期臨床項目。 在專利 US20xx054590A135中， Anadys 公司披露了以下骨架： 編號 結構 編號 結構 1 2 65 3 4 5 6 7 8 活性結果未見。 68 其活性結果如下表所示： 項目 活性報