transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法(存儲版)
【正文】 181。(即染成紫紅色的點,未著色的多為細胞碎屑計數(shù)并拍照留念Transwell細胞體外侵襲實驗概述目的:總結并改進細胞體外侵襲實驗的操作經(jīng)驗。Tanswell plate:Costar ,USA , 3422 ,聚碳酯膜微孔直徑為8μm。20℃保存的Matrigel 在冰上保2℃~8℃過夜融化。Transwell 培養(yǎng)板下室加入500μl 趨化因子,37℃,5 %CO2 培養(yǎng)24 h。注意事項2. 1NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清趨化因子是能使細胞產(chǎn)生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。尤其是細胞為圓形的時候,就會分辨不出是穿過去的細胞還是沒穿過去的細胞,對于長梭形細胞來說,穿過去的細胞為長梭形,沒穿過去的細胞多為圓形。2. 6 細胞計數(shù)當實驗用的細胞為圓形時,實驗人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認為細胞進行計數(shù)。尤其是同時操作多個樣本時,時間過長就會造成部分聚碳酯膜從上室基底部自動脫落下來,上室間粘連在一起,造成樣本混淆,實驗失敗。如果細胞活力小,就會造成細胞穿透能力下降,影響實驗結果。附著于聚碳酯膜下表面的細胞在高倍鏡下( 400 隨機取6 個視野[1 ] 計數(shù),取平均數(shù)。胎盤蘭拒染實驗,細胞活力需大于95 %。分裝,在 20 ℃保存。細胞體外侵襲實驗主要應用于各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究,但在具體實驗中獲得真實、最佳實驗結果的圖像,并借以說明問題并非簡單。l serumfree culture medium with 8 181。對細胞的處理不可影響細胞生存。我們做的時候,%BSA的培養(yǎng)液,下室用5%血清的培養(yǎng)液,下室血清的濃度可根據(jù)細胞類型的不同進行調(diào)整,如果細胞侵襲能力強,可適當降低血清濃度,否則可適當提高血清濃度。這種膠4度下很軟,37度則變得比較堅硬,因此用前應先放在培養(yǎng)箱中10分鐘作用,使膠完全凝固。最少也要保證在收樣的時候,上室內(nèi)還要有細胞存在。下面奉上用Thincert做侵襲實驗的步驟(摘自《A quantitative cell migration assay using ThinCert? cell culture inserts》,大家如需要,可用google搜之:1. Prepare cell cultures according to standard cell cultur
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