transwell是檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè)方法(存儲(chǔ)版)
【正文】 181。(即染成紫紅色的點(diǎn),未著色的多為細(xì)胞碎屑計(jì)數(shù)并拍照留念Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)概述目的:總結(jié)并改進(jìn)細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)的操作經(jīng)驗(yàn)。Tanswell plate:Costar ,USA , 3422 ,聚碳酯膜微孔直徑為8μm。20℃保存的Matrigel 在冰上保2℃~8℃過夜融化。Transwell 培養(yǎng)板下室加入500μl 趨化因子,37℃,5 %CO2 培養(yǎng)24 h。注意事項(xiàng)2. 1NIH3T3 細(xì)胞制備的趨化因子與胎牛血清趨化因子是能使細(xì)胞產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)的一類細(xì)胞因子[2 ] 。尤其是細(xì)胞為圓形的時(shí)候,就會(huì)分辨不出是穿過去的細(xì)胞還是沒穿過去的細(xì)胞,對(duì)于長梭形細(xì)胞來說,穿過去的細(xì)胞為長梭形,沒穿過去的細(xì)胞多為圓形。2. 6 細(xì)胞計(jì)數(shù)當(dāng)實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞為圓形時(shí),實(shí)驗(yàn)人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認(rèn)為細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。尤其是同時(shí)操作多個(gè)樣本時(shí),時(shí)間過長就會(huì)造成部分聚碳酯膜從上室基底部自動(dòng)脫落下來,上室間粘連在一起,造成樣本混淆,實(shí)驗(yàn)失敗。如果細(xì)胞活力小,就會(huì)造成細(xì)胞穿透能力下降,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。附著于聚碳酯膜下表面的細(xì)胞在高倍鏡下( 400 隨機(jī)取6 個(gè)視野[1 ] 計(jì)數(shù),取平均數(shù)。胎盤蘭拒染實(shí)驗(yàn),細(xì)胞活力需大于95 %。分裝,在 20 ℃保存。細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用于各種細(xì)胞因子對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究,但在具體實(shí)驗(yàn)中獲得真實(shí)、最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖像,并借以說明問題并非簡(jiǎn)單。l serumfree culture medium with 8 181。對(duì)細(xì)胞的處理不可影響細(xì)胞生存。我們做的時(shí)候,%BSA的培養(yǎng)液,下室用5%血清的培養(yǎng)液,下室血清的濃度可根據(jù)細(xì)胞類型的不同進(jìn)行調(diào)整,如果細(xì)胞侵襲能力強(qiáng),可適當(dāng)降低血清濃度,否則可適當(dāng)提高血清濃度。這種膠4度下很軟,37度則變得比較堅(jiān)硬,因此用前應(yīng)先放在培養(yǎng)箱中10分鐘作用,使膠完全凝固。最少也要保證在收樣的時(shí)候,上室內(nèi)還要有細(xì)胞存在。下面奉上用Thincert做侵襲實(shí)驗(yàn)的步驟(摘自《A quantitative cell migration assay using ThinCert? cell culture inserts》,大家如需要,可用google搜之:1. Prepare cell cultures according to standard cell cultur
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