transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法-免費閱讀
【正文】 建議在最后一步實驗時需二人協(xié)做,一人辨別并取出樣本,一人小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來,置載玻片上中性樹脂封片并及時編號。2. 3 擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞先用干棉簽將上室內(nèi)液體吸去,再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat rigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞,如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細胞,在細胞計數(shù)時就會將沒擦掉的細胞也計進來。重復實驗兩次。Transwell 培養(yǎng)板上室加入100μl 細胞懸液( 5 104 個 并加入無血清培養(yǎng)基200 ul 。1. 3transwell 培養(yǎng)板準備所有操作均需無菌操作。很多研究人員在此方面花費了很多時間和科研經(jīng)費,從刺激實驗用的細胞到蘇木素染色,看似簡單的實驗步驟中有很多環(huán)節(jié)需要研究者注意.材料與方法1. 1Matrigel:Becton Dickinson Compary, 20 ℃保存。:冰醋酸(3:1固定10min后用10%giemsa染色。M CalceinAM10. Incubate for 45 min in a cell culture incubator at 37176。否則難以肯定是細胞量的改變還是侵襲能力改變侵襲小室其實不止是transwell的,其它像Boyden chamber、Thincert也挺好用的。需要注意的是:1。Transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法我們所使用的是Chemicon公司的ECM554,基質(zhì)膠已經(jīng)包被好了,買來就可以用,很方便,而且我們算過,跟自己買膠來包被價格相差不大。上室內(nèi)的細胞數(shù)目要適當,過多,穿過膜的細胞會過多過快,如果用計數(shù)法的話將難以計數(shù)。我用過Thincert,個人感覺不錯,而且價格便宜,是grelner的,孔徑8微米用于24孔板的一個才45塊人民幣,而且可以零買,不想transwell,總是一箱一箱的賣,實在是太貴了!侵襲實驗要結(jié)合實驗?zāi)康?不一定非要包被的。C and 5 % CO211. Remove the culture medium from the cell culture inserts12. Transfer the cell culture inserts into a freshly prepared 24 well cell culture plate containing 500
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