transwell是檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè)方法-免費(fèi)閱讀
【正文】 建議在最后一步實(shí)驗(yàn)時(shí)需二人協(xié)做,一人辨別并取出樣本,一人小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來,置載玻片上中性樹脂封片并及時(shí)編號(hào)。2. 3 擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細(xì)胞先用干棉簽將上室內(nèi)液體吸去,再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat rigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細(xì)胞,如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細(xì)胞,在細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)就會(huì)將沒擦掉的細(xì)胞也計(jì)進(jìn)來。重復(fù)實(shí)驗(yàn)兩次。Transwell 培養(yǎng)板上室加入100μl 細(xì)胞懸液( 5 104 個(gè) 并加入無血清培養(yǎng)基200 ul 。1. 3transwell 培養(yǎng)板準(zhǔn)備所有操作均需無菌操作。很多研究人員在此方面花費(fèi)了很多時(shí)間和科研經(jīng)費(fèi),從刺激實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞到蘇木素染色,看似簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)步驟中有很多環(huán)節(jié)需要研究者注意.材料與方法1. 1Matrigel:Becton Dickinson Compary, 20 ℃保存。:冰醋酸(3:1固定10min后用10%giemsa染色。M CalceinAM10. Incubate for 45 min in a cell culture incubator at 37176。否則難以肯定是細(xì)胞量的改變還是侵襲能力改變侵襲小室其實(shí)不止是transwell的,其它像Boyden chamber、Thincert也挺好用的。需要注意的是:1。Transwell是檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè)方法我們所使用的是Chemicon公司的ECM554,基質(zhì)膠已經(jīng)包被好了,買來就可以用,很方便,而且我們算過,跟自己買膠來包被價(jià)格相差不大。上室內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目要適當(dāng),過多,穿過膜的細(xì)胞會(huì)過多過快,如果用計(jì)數(shù)法的話將難以計(jì)數(shù)。我用過Thincert,個(gè)人感覺不錯(cuò),而且價(jià)格便宜,是grelner的,孔徑8微米用于24孔板的一個(gè)才45塊人民幣,而且可以零買,不想transwell,總是一箱一箱的賣,實(shí)在是太貴了!侵襲實(shí)驗(yàn)要結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康?不一定非要包被的。C and 5 % CO211. Remove the culture medium from the cell culture inserts12. Transfer the cell culture inserts into a freshly prepared 24 well cell culture plate containing 500
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