20xx年醫(yī)學(xué)專題—免疫細(xì)胞的分離與檢測(cè)(存儲(chǔ)版)
【正文】 或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。 標(biāo)記的靶細(xì)胞：活淋巴細(xì)胞（96%以上）加入H3Tdr孵育2小時(shí)/每30min振搖洗3次配成2106/ml懸液。,直接溶血空斑試驗(yàn)(sh236。)空斑試驗(yàn),第四十七頁(yè)，共七十五頁(yè)。)百分率 =,吞有顆粒(kēl236。,NBT還原(hu225。bāo)凋亡測(cè)定,一、細(xì)胞(x236。,第五十六頁(yè)，共七十五頁(yè)。,第五十七頁(yè)，共七十五頁(yè)。,細(xì)胞(x236。r)胞核裂解；胞漿發(fā)生芽突。,形態(tài)(x237。,甲基綠派諾寧染色：光學(xué)顯微鏡下凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞均表現(xiàn)為細(xì)胞固縮：其中凋亡細(xì)胞細(xì)胞核呈綠色(lǜ s232。鏡下可見凋亡細(xì)胞體積變小、細(xì)胞質(zhì)濃縮、細(xì)胞核變小、染色質(zhì)濃縮并凝結(jié)(n237。)方法,第六十八頁(yè)，共七十五頁(yè)。 (2) 不能提供細(xì)胞發(fā)生凋亡所處的組織位置和細(xì)胞分化狀態(tài)。 方法：裂解細(xì)胞 13000g超速離心 分別提取DNA 使DNA顯色，測(cè)定,第七十三頁(yè)，共七十五頁(yè)。主要組成成分為MACS微珠、MACS分選柱和MACS分選器。上清液OD值。 ɡ249。ir243。,（3）二苯胺(běn 224。,凝膠電泳特點(diǎn) (1) 本方法不能檢測(cè)(jiǎn c232。)檢測(cè)法,（1）凝膠電泳法： （2）原位末端標(biāo)記法 （3）二苯胺(běn 224。,第六十六頁(yè)，共七十五頁(yè)。,二、細(xì)胞凋亡(diāo w225。 ⑤Ⅱ型谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶和鈣蛋白酶（Calpain）活性升高。nɡ)的檢測(cè)方法,形態(tài)觀察法：凋亡的細(xì)胞皺縮，質(zhì)膜完整，胞漿致密，細(xì)胞器密集，不同程度退變；核染色質(zhì)致密，形成形狀不一，大小不等的團(tuán)塊邊集于核膜處，進(jìn)而(j236。,細(xì)胞凋亡(diāo w225。 凋亡是細(xì)胞對(duì)環(huán)境的生理性病理性刺激信號(hào)，環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的應(yīng)答有序變化的死亡過(guò)程。bāo)凋亡（apoptosis）,細(xì)胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下發(fā)生的主動(dòng)(zhǔd242。,正常值：,NBT陽(yáng)性細(xì)胞 7.515%,第五十三頁(yè)，共七十五頁(yè)。n)試驗(yàn),原理(yu225。,第五十頁(yè)，共七十五頁(yè)。,間接溶血(r243。 待濾膜干燥后用γ液閃計(jì)數(shù)儀測(cè)定cpm值。,（1）試劑 小鼠脾細(xì)胞懸液:分離單個(gè)脾臟細(xì)胞裂解(li232。bāo)活性測(cè)定,NK細(xì)胞是具有天然殺傷靶細(xì)胞活性的淋巴樣細(xì)胞，其殺傷作用(zu242。ng)各管均置37℃5～20h后，2500g離心10min ，分別取各管上清夜1.0ml置于5支試管中，用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)各管上清和沉淀中的cpm值。n)K細(xì)胞活性的高低。)免疫也有直接的關(guān)系。ng),細(xì)胞毒試驗(yàn)(sh236。)試驗(yàn)原理示意,小淋巴細(xì)胞在轉(zhuǎn)化為原始母細(xì)胞過(guò)程中，合成DNA增加，能夠吸收胸腺嘧啶核苷（3H）,第三十五頁(yè)，共七十五頁(yè)。,一、轉(zhuǎn)化(zhuǎnhu224。,第三十一頁(yè)，共七十五頁(yè)。n)：利用T細(xì)胞膜上的異種動(dòng)物紅細(xì)胞受體,T細(xì)胞(x236。)細(xì)胞膜分子的主要檢測(cè)方法,免疫標(biāo)記檢測(cè)(jiǎn c232。,細(xì)胞(x236。向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。 作為臨床診斷工具，定量檢測(cè)外周血及組織中抗原特異性CTLs的比率，并進(jìn)行表型及功能分析。,第十五頁(yè)，共七十五頁(yè)。用緩沖液沖洗分選柱，所有未標(biāo)記的細(xì)胞被沖洗掉。x236。 親和板法：利用親和層析法分離淋巴細(xì)胞亞群，其原理是各種淋巴細(xì)胞亞群具有不同的抗原性，將相應(yīng)抗體結(jié)合于塑料平板上，繼加細(xì)胞懸液，凡抗原陽(yáng)性的細(xì)胞則與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原陰性的細(xì)胞可從未吸附的細(xì)胞懸液中獲取。因B細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象，用本法分離的淋巴細(xì)胞群中B細(xì)胞有所損失。,離心(l237。ngguāng)激活分離法 磁性分離法 其他分離法,第五頁(yè)，共七十五頁(yè)。x236。,NK cells,吞噬(tūnsh236。ng)大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重(bǐzh242。)抗凝血,淋巴細(xì)胞分離液,血漿,單個(gè)核細(xì)胞,粒細(xì)胞,紅細(xì)胞,第七頁(yè)，共七十五頁(yè)。nf249。,第九頁(yè)，共七十五頁(yè)。主要組成成分為MACS微珠、MACS分選柱和MACS分選器。,MACS (陽(yáng)性(y225。tā)分離法,花環(huán)沉降法：本法是將淋巴細(xì)胞與一定比例的綿羊紅細(xì)胞混合，待淋巴細(xì)
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