【正文】 aCl和 Vm 。阪崎腸桿菌檢驗程序阪崎腸桿菌檢驗阪崎腸桿菌檢驗程序報 告生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃ 177。1℃n 4～ 5h分離 mCCDAn 基礎(chǔ)培養(yǎng)基n 營養(yǎng)成分；n 中和代謝產(chǎn)物，維持生長環(huán)境的成分；n 木炭n 抗生素n 頭孢哌酮鈉 32mg 3代頭孢，廣泛抗菌n 兩性霉素 B 10mg 抑制霉菌、酵母菌n 利福平 10mg 廣譜抗菌藥 主要用于抗結(jié)核分離 Skirrown 基礎(chǔ)培養(yǎng)基n FBP溶液n 丙酮酸鈉n 焦亞硫酸鈉n 硫酸鈉鐵n 抗生素溶液n 頭孢哌酮n 兩性霉素Ｂn 利福平n 無菌脫纖維綿羊血分離培養(yǎng)基 CFA瓊脂n 為法國梅里埃產(chǎn)品n 僅有成品平板出售n 購買周期太長（下訂單現(xiàn)做，然后發(fā)貨，一般要 2個月）n 保質(zhì)期短，一般收到平板就快過期了。1 ℃ 、 24 h100 r/min微需氧振蕩， 36 ℃ 177。 1 ℃生長試驗有氧 42 ℃ 177。n H２ S（－）、 VP（－）、動力（ ＋ ）n 甘露醇（＋）、賴氨酸（＋）、ONPG （－）報告n 當檢出的可疑菌落生化學(xué)性狀符合表 1要 求時，可以報告檢出副溶血性弧菌。n 嗜鹽性試驗：挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水， 36℃ 177。TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌TCBS瓊脂上面的副溶血性弧菌可以直接計數(shù)的副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基n 純培養(yǎng)n 挑取 3個或 以上的可疑 菌落，劃線 3％氯化鈉 胰蛋白胨大 豆瓊脂平板， 36 ℃ 177。1 ℃ 恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 8 h～ 18 h。n 以無菌操作取檢樣 25 g（ mL），加入 3％氯化鈉堿性蛋白胨水 225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8 000 r/min均質(zhì) 1 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊 2 min，制備成 1:10的均勻稀釋液。對酸敏感，在 2%醋酸中或 50%的食醋中 1分鐘即可死亡。n 菌落識別、初步生化試驗 、鑒定 同常規(guī)法。 吸取上清液至磁珠聚集物處時，應(yīng)放慢速度。如吸取的上清液內(nèi)含有磁珠，則應(yīng)將其放回到 Eppendorff管中，并重復(fù) 2. 4步驟。 注意室內(nèi)溫度 ，保證結(jié)合時間。每個。n 進行生化試驗時應(yīng)是用新鮮培養(yǎng)物（ 24h）。 在 TSI瓊脂中，典型菌株為斜面與底層均呈陽性反應(yīng)呈黃色，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生 H2S。 n 增菌后的肉湯在取樣前，應(yīng)輕微搖晃混勻。于36177。n 沙門氏菌抗原的研究已有近一百年的歷史，實驗者應(yīng)當熟悉抗原的相關(guān)理論。n 一般先按照 O抗原分群，然后。該儀器對細菌作出的分類鑒定應(yīng)該是按照權(quán)威的細菌生化特性表作出的。沙門氏菌屬和有關(guān)細菌的鑒別沙門氏菌屬和有關(guān)細菌的鑒別 2n 不過，沙門氏菌和大腸埃希氏菌的鑒別有一點例外，因為在沙門氏菌屬內(nèi)有硫化氫陰性的菌株，偶爾也有靛基質(zhì)陽性的菌株；在大腸埃希氏菌種內(nèi)，也有少數(shù)靛基質(zhì)陰性的菌株，偶爾也有硫化氫陽性的菌株。n 自從 PCR試驗技術(shù)推廣應(yīng)用以后，認為此項技術(shù)能夠在 沙門氏菌檢驗沙門氏菌腸道傳染病沙門氏菌腸道傳染病 人類沙門氏菌病分為兩大類 : 1 、 傷寒與副傷寒 :在世界范圍內(nèi)顯著下降 ,我 國仍有散在發(fā)生 , 時有局部暴發(fā)流行 . 2 、 沙門氏菌急性胃腸炎 :在世界 ,在我國呈 上升趨勢 ,通過動物廣泛分布 ,家禽和豬是 主要的儲存宿主 ,在食品和許多動物制品 中發(fā)現(xiàn) ,是傳播的主要原因 . 沙門氏菌食物中毒 引起食物中毒最常見的沙門氏菌：鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌 易引起沙門氏菌中毒的食品：肉、蛋、乳類食品 中毒原因： 食用病畜禽的肉制品食品 病畜禽、帶菌人和動物使食品受污染 用不潔凈水外理食品沙門氏菌檢驗流程沙門氏菌檢驗流程n 前增菌：用無選擇性的培養(yǎng)基使處于瀕死狀態(tài)的細菌恢復(fù)活力 。 1?C培養(yǎng) 24h?2h。培養(yǎng)結(jié)束后計數(shù)紅點周圍有氣泡的菌落為大腸菌群數(shù)。報告n 當檢出的可疑菌落生化性狀符合表 1要求時，報告 25 g（ mL）樣品中檢出創(chuàng)傷弧菌。n 嗜鹽性試驗：挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水， 36 ℃ 177。n 涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。分離n 對所有顯示生長的增菌液，用接種環(huán)在距離液面以下 1 cm內(nèi)沾取一環(huán) ，于mCPC或 CC平板上劃線分離。如無均質(zhì)器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在 500 mL的滅菌容器內(nèi)，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。大陸沿海地區(qū)也時有創(chuàng)傷弧菌散發(fā)感染的報告創(chuàng)傷弧菌（ Vibrio vulnificus）n 1976年首次發(fā)現(xiàn)n 引起 傷口感染n 致死性的原發(fā)性敗血癥n 胃腸道感染n 曾稱為乳糖陽性弧菌n 革蘭氏陰性嗜鹽菌n 兼性厭氧n 3個生物型36 ℃177。 1 ℃ ， 12 h～ 16 h樣品 25 g（ mL） +225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水3％氯化鈉堿性蛋白胨水 3管 3個合適的稀釋度如果進行定性檢測，則不需要進行此步驟挑取可疑菌落，接種于 3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂生化試驗或選用 API 20E生化鑒定試劑盒結(jié)果報告改良纖維二糖 多粘菌素 B多粘菌素 E瓊脂 或 纖維二糖 多粘菌素 E瓊脂 劃線分離篩選試驗氧化酶試驗，革蘭氏染色，3％氯化鈉三糖鐵瓊脂，嗜鹽性試驗樣品制備n 非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置 7℃ ～ 10℃ 冰箱保存，盡可能及早檢驗；冷凍樣品應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過 15 min或在 2℃ ～ 5℃ 不超過18 h解凍；如果樣品需要冷凍貯存，應(yīng)在樣品中加等量緩沖甘油氯化鈉溶液（液體樣品應(yīng)加雙料），推薦貯存溫度為 70 ℃ 以下。n 定量檢測n 用滅菌吸管吸取 1:10稀釋液 1 mL，注入含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，充分混勻，制備 1:100的稀釋液。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h觀察結(jié)果。確定鑒定n 生化試驗：取純培養(yǎng)物分別接種含 3％氯化鈉的賴氨酸培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。衛(wèi)生學(xué)概念，包括埃希氏菌屬，克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬等的細菌檢驗比較簡單，所以被廣泛用做水源的衛(wèi)生指標和食品加工衛(wèi)生狀況的通用指標大腸菌群計數(shù)n 第一法 MPN法n 第二法 平板計數(shù)法n 第三法 Petrifilm測試片法第一法 MPN法與原 操作步驟不同原方法：初發(fā)酵 → EMB分離培養(yǎng) → 染色，復(fù)發(fā)酵 → 報告現(xiàn)方法： LST初發(fā)酵 → BGLB驗證 → 報告初發(fā)酵培養(yǎng)基不同n 原方法： 乳糖膽鹽肉湯n 現(xiàn)方法： 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（ LST）肉湯LST肉湯 是國際上通用的培養(yǎng)基。即樣品勻液的 pH值應(yīng)在 ～， pH值過低或過高時分別用 1M NaOH或 1M HCl予以調(diào)節(jié)。培養(yǎng) 圓形面積邊緣上及邊緣以外的菌落不作計數(shù) 。沙門氏菌的分類學(xué)地位n 歸于腸桿菌科沙門氏菌屬n 下設(shè) 6個亞屬： I、 II、 IV、 V、 VI及 III（原亞利桑那菌屬）n 常見的種：雞沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌n 形態(tài)與染色：革蘭氏染色陰性，無莢膜，無芽胞，多數(shù)有鞭毛，有動力，短小桿菌。增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)n 國際上常用的沙門氏菌增菌培養(yǎng)基有 3種，即： (1)亞硒酸鹽增菌液或亞硒酸鹽胱氨酸增菌液， (2)四硫磺酸鹽增菌液或四硫磺酸鹽孔雀綠增菌液， (3)氯化鎂孔雀綠增菌液。腸桿菌科常見細菌簡化診斷表腸桿菌科常見細菌簡化診斷表序號 硫化氫 靛基質(zhì) 賴氨酸 氰化鉀 尿素酶 判 定 結(jié) 果 () A1 + + 沙門氏菌屬 A2 + + + 沙門氏菌屬，緩慢愛德華氏菌A3 + + +97 94 弗氏檸檬酸菌群，奇異變形菌A4 + + + + 普通變形菌B1 +/ 大腸埃希氏菌，沙門氏菌屬， 志賀氏菌屬B2 +