hplc常見故障排除及維護(存儲版)
【正文】 ） 無液流流出 ? 寶石球與球座粘連 不能向上運動 ? 使正向流動的液流 ① 寶石球與球坐粘連 單向閥有故障情況： 不能通過 接觸面處有雜質(zhì) ? 寶石球與球座之間 ? 寶石球與球座不能 ? 形成了液體的反向 ② 寶石球與球座之間有雜質(zhì) 單向閥有故障情況： 液流方向（反向） 緊密接觸 有雜質(zhì) 泄漏 如何減少單向閥的故障 ? 流動相一定要用 m的濾膜過濾。 色譜故障排除經(jīng)驗規(guī)則 引起 HPLC發(fā)生問題的潛在因素 HPLC 常見故障因素 環(huán) 境 電源 接地線 溫度 濕度 清潔程度 化學(xué)品 色譜柱 保護柱 溶劑 樣品 儀 器 泵 進樣器 檢測器 數(shù)據(jù)處理單元 HPLC 常見故障因素（工作環(huán)境） ? 電源 容量、穩(wěn)定性 ? 地線 系統(tǒng)統(tǒng)一電源 ,統(tǒng)一接地 ? 濕度 對光學(xué)部件的影響尤為嚴重 ? 溫度 空調(diào)機的影響 ? 清潔 不要輕視灰塵的影響 工作環(huán)境的影響 HPLC 常見故障因素（化學(xué)品） ? 已損壞的保護柱、色譜柱 ? 所用溶劑、試劑的品質(zhì) ? 化學(xué)品使用不當帶來的影響 ? 樣品前處理方法不當帶來的影響 ? 實驗前的準備和結(jié)束后的收尾工作 化學(xué)品的影響 友情提示：保持良好的色譜柱使用習(xí)慣 ? 使用新鮮的水溶液，并考慮使用生物穩(wěn)定劑（如疊氮化鈉） ? 儲存色譜柱時，應(yīng)沖凈緩沖鹽，并用有機溶劑保護色譜柱（乙腈） ? 避免外力損傷色譜柱：彎曲、跌落或?qū)⒔宇^擰的過緊 ? 完全潤濕在運輸中變干的色譜柱 ? 對含有保留性較強的雜質(zhì)組分的樣品要進行預(yù)處理 ? 定期用強極性的溶劑清洗色譜柱 ? 清除柱填料的局限性 ? 了解溶劑對樣品的溶解性及分離的影響 ? pH ? 溫度 ? 化學(xué)兼容性 ? 在使用前過濾溶劑 友情警示： 使用緩沖液的注意事項 緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動相保持一定的離子強度和 pH值，減少拖尾。將來利用記錄可以幫助發(fā)現(xiàn)問題，強化預(yù)防 保養(yǎng)工作。 恢復(fù)原狀。 實驗后不可用有機溶劑直接過度，有機溶劑會處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用 95： 5的水甲醇沖洗。 ? 使用帶緩沖鹽的流動相后，一定要充分清洗。 ? 避免使用高粘度的流動相。 0100% B over 30 min.。通常平衡需要 1020個柱體積的流動相，但如果在流動相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長的時間來平衡色譜柱。 ? 如經(jīng)常清洗色譜柱會加速色譜柱固定相的水解。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類脂類化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。 ? 使用保護柱是個非常有效的方法。 ? 使用內(nèi)嵌極性基團的反相色譜柱，如 Waters SymmetryShield RP色譜柱或非端基封口的色譜柱，如 Waters Resolve色譜柱也可避免發(fā)生坍塌。 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 五 、疏水坍塌 ? 當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近 100%的水為流動相時，有時會發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或完全不保留的現(xiàn)象，這就是疏水坍塌。 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 相比之下，找到問題的所在并設(shè)計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。污染源可以是：流動相本身，流動相容器，連接管、泵、進樣器、儀器密封墊以及樣品等。 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 二 、固定相穩(wěn)定性 ? 固定相的穩(wěn)定性都是有限的，即使在推薦的 pH范圍內(nèi)使用，固定相也會慢慢水解。 保留時間不重現(xiàn)的原因分析 ? 將上述兩種情況區(qū)分開來對找到問題的原因往往很有幫助。L Time, min. x 150 mm F = mL / min. (1ul 進樣 ) 1. 不進樣時柱壓連續(xù)升高 泵密封墊 流動相有顆粒 流動相溶解性 流動相的不穩(wěn)定性 (聚合 ) 形成柱死體積 (與使用條件有關(guān) ) 2. 進樣時壓力升高 樣品有顆粒 樣品在流動相中不溶 樣品組分與固定相不兼容 壓 力 1. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、堿、中性化合物） 鍵合相流失
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