hplc常見故障排除及維護-免費閱讀
【正文】 挽救的辦法實現(xiàn)用含大量有機組分的流動相浸潤固定相，再用高水含量的流動相進行平衡。如 THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在 THF中就不能溶解。 ? 樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分，就可能是使保留時間漂移的潛在根源。 ? 水解速度與流動相類型和配體有關。 ? 事實上，保留時間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化 ，如固定相流失（例如通過水解），色譜柱污染（由樣品或流動相所致）等。 色譜柱的修復和再生 － 化學變化 2 Example: mm ID x 15 cm Zorbax 300SBC18 Flow rate: 1 mL / min。即不要使用受污染、老化的色譜柱。 ? 避免使泵長期不工作，使流動相干枯。但是使用緩沖液要注意幾點： 避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質有腐蝕作用。 嘗試預測將來可能發(fā)生的問題。利用成功的故障排除經(jīng)驗。 緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長時間實驗時會有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。 ? 避免使用高粘度的流動相。 ? 使用帶緩沖鹽的流動相后一定要用純水充分清洗。 Temp: ~80℃ A: % TFA in water B: % TFA in acetonitrile 100% A for 30 min.。 保留時間不重現(xiàn)的因素 ? 保留時間漂移的幾種最常見的原因如下： ? 一 、色譜柱的平衡 ? 二 、固定相穩(wěn)定性 ? 三 、色譜柱污染 ? 四 、流動相的組成 ? 五 、疏水坍塌 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 一、色譜柱的平衡 ? 如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相要比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。這些根源通常是樣品基質。 DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 色譜柱長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。通常通過實驗可判斷污染的來源。例：硅膠基質在 pH4時水解穩(wěn)定性最好。 ? 保留時間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時間的無規(guī)律波動。 ?XDB, 有機聚合物等填料可使用高 pH 水溶液 /有機溶液，如： NaOH 50% 異丙醇 /水溶液，硅膠基質應盡量減少接觸時間 (1530 min)。 ? 色譜柱的壓力不要太高。 HPLC 常見故障因素（泵） LCP100 高壓恒流泵 HPLC 常見故障因素（泵） 正確使用您的色譜泵： ? 使用高品質的溶劑 ? 溶劑過濾（注意濾膜的選擇） ? 脫氣溶劑 ? 柱塞桿清洗 ? 注意調節(jié)流量時的變化速度 HPLC 常見故障因素（泵） ?注意流動相組分 的互溶性！ ?使用正確的密封 圈清洗溶劑！ 泵 頭 泵腔體 吸入閥導通 活塞向后運動 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥關閉 液流方向 泵的工作原理： ① 吸液過程 泵 頭 泵腔體 吸入閥關閉 活塞向前運動 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導通 液流方向 泵的工作原理： ② 排液過程 HPLC 常見故障因素（泵頭） 柱塞桿 密封圈 HPLC 常見故障因素（泵頭） 出口單向閥 進口單向閥 泵頭 泵 頭 吸入閥寶石球與球坐粘連，吸入閥不能導通 活塞向后運動 泵 座 排出閥關閉 液流方向 泵吸液過程有故障情況： 吸入閥寶石球粘連 泵腔體內沒有液體流入 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導通 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 吸入閥寶石球與球座之間有雜質，液體反向泄漏 液流方向 泵排液過程有故障情況： 寶石球與球座之間有雜質 反向泄漏液流方向 反向漏液方向 活塞向前運動 HPLC 常見故障因素（單向閥） 出口閥 進口閥 寶石球不能向上運動 液流方向（正向
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