hplc常見故障排除及維護(hù)(文件)
【正文】 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥關(guān)閉 液流方向 泵的工作原理： ① 吸液過程 泵 頭 泵腔體 吸入閥關(guān)閉 活塞向前運(yùn)動 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導(dǎo)通 液流方向 泵的工作原理： ② 排液過程 HPLC 常見故障因素（泵頭） 柱塞桿 密封圈 HPLC 常見故障因素（泵頭） 出口單向閥 進(jìn)口單向閥 泵頭 泵 頭 吸入閥寶石球與球坐粘連，吸入閥不能導(dǎo)通 活塞向后運(yùn)動 泵 座 排出閥關(guān)閉 液流方向 泵吸液過程有故障情況： 吸入閥寶石球粘連 泵腔體內(nèi)沒有液體流入 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導(dǎo)通 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 吸入閥寶石球與球座之間有雜質(zhì)，液體反向泄漏 液流方向 泵排液過程有故障情況： 寶石球與球座之間有雜質(zhì) 反向泄漏液流方向 反向漏液方向 活塞向前運(yùn)動 HPLC 常見故障因素（單向閥） 出口閥 進(jìn)口閥 寶石球不能向上運(yùn)動 液流方向（正向） 無液流流出 ? 寶石球與球座粘連 不能向上運(yùn)動 ? 使正向流動的液流 ① 寶石球與球坐粘連 單向閥有故障情況： 不能通過 接觸面處有雜質(zhì) ? 寶石球與球座之間 ? 寶石球與球座不能 ? 形成了液體的反向 ② 寶石球與球座之間有雜質(zhì) 單向閥有故障情況： 液流方向（反向） 緊密接觸 有雜質(zhì) 泄漏 如何減少單向閥的故障 ? 流動相一定要用 m的濾膜過濾。 ? 定期對流動相過濾頭進(jìn)行清洗。 ? 色譜柱的壓力不要太高。 ? 避免在沒有流動相時運(yùn)行泵（建議：在泵進(jìn)行檢測工作時設(shè)定最小壓力）。 ?XDB, 有機(jī)聚合物等填料可使用高 pH 水溶液 /有機(jī)溶液，如： NaOH 50% 異丙醇 /水溶液，硅膠基質(zhì)應(yīng)盡量減少接觸時間 (1530 min)。 Hold 100% B for 30 min., Return to 100% A in 5 min. Repeat 3 times. 總 結(jié) 如果使用時加以注意，大部分的液相色譜柱的問題是可以預(yù)防的 流動相必須是互溶的，無顆粒 使用保護(hù)柱和在線過濾器，并定期更換 使用恰當(dāng)?shù)臉悠分苽浞椒? 使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序 不同類型的色譜柱，請選擇不同的操作條件 (如： SB: pH 16, XDB: pH 311) 保存柱反壓及重要的色譜參數(shù)的記錄 (如： R, N, As, k39。 ? 保留時間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時間的無規(guī)律波動。 ? 流動相污染也可能是原因之一。例：硅膠基質(zhì)在 pH4時水解穩(wěn)定性最好。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。通常通過實驗可判斷污染的來源。 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。 反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致。 謝謝觀看！ 第八版 第七版 第六版 第五版 第四版 第三版 第二版 第一版 版 本 改 編 者 日 期 備 注 。 保留時間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 色譜柱長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象。如流動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動相等。 DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。 ? 避免色譜柱污染最簡單的方法是防患于未然。這些根源通常是樣品基質(zhì)。 ? HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質(zhì)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相要比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。 應(yīng)注意：水是很容易污染的流動相成分。 保留時間不重現(xiàn)的因素 ? 保留時間漂移的幾種最常見的原因如下： ? 一 、色譜柱的平衡 ? 二 、固定相穩(wěn)定性 ? 三 、色譜柱污染 ? 四 、流動相的組成
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