hplc常見故障排除及維護-在線瀏覽
2024-09-26 02:14本頁面
【正文】 雙 峰 柱中有死體積 過濾片部分堵塞 只有一個雙峰 ——組分的共洗脫 可能原因： 樣品與溶劑不匹配 峰 型 所有的峰都展寬 柱效降低 ——柱死體積 大進樣量 / 質量 高粘度流動相 部分峰展寬 前次進樣后流出的組分 大分子量樣品 ——蛋白或聚合物 峰展寬 樣品與流動相不匹配 峰 型 拖尾峰 對稱性 Normal Tailing Normal Tailing 原因： 部分峰拖尾 二次保留效應 ——殘留硅醇基的反應 小峰緊跟在大峰的后面流出 柱頭有污染 金屬 所有峰拖尾 額外的柱效應 柱損壞 不適當的樣品量 /溶劑 峰 型 正常峰 伸舌峰 前伸峰 不對稱性 可能的原因 柱過載 在大峰前，有小峰流出 樣品溶劑不適當 柱死體積 過濾片部分堵塞 峰 型 原因 ? 樣品的吸收比流動相的吸收值低 ? 當樣品組分通過色譜柱時打破了原來的平衡 ? 用示差檢測器時是正常的 寬 峰 柱外體積增加 * 在進樣口到柱或柱到檢測器之間，使用細的短的連接管 * 保證所有的管路接頭都使用正確 * 用小體積檢測池 * 減少進樣量 柱外體積效應的影響 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 柱外體積 10 181。L Time, min. x 150 mm F = mL / min. (1ul 進樣 ) 1. 不進樣時柱壓連續(xù)升高 泵密封墊 流動相有顆粒 流動相溶解性 流動相的不穩(wěn)定性 (聚合 ) 形成柱死體積 (與使用條件有關 ) 2. 進樣時壓力升高 樣品有顆粒 樣品在流動相中不溶 樣品組分與固定相不兼容 壓 力 1. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、堿、中性化合物） 鍵合相流失 流動相不穩(wěn)定 (可能性較小 ) 溶劑輸送系統(tǒng) (流速變化 ) 2. 所有峰都向高保留值方向漂移 在水 /有機溶劑的混合體系中，有機溶劑含量減少 柱改變 (可能性較小 ) 溶劑輸送系統(tǒng) (流速變化 ) 3. 離子型化合物的色譜峰的保留值漂移 流動相中揮發(fā)性組分損失 (離子強度 , pH 漂移 ) 柱改變 (鍵合相或污染 ) 保留值漂移 1. 與流動相有關的問題 使用新鮮的流動相 pH 電導 色譜性能測試 2. 與色譜柱有關的問題 測試新柱 用標準的測試混合樣測試新柱 “清洗” 色譜柱后再測 考慮樣品基質與使用條件對柱 穩(wěn)定性的影響 保留值漂移 良好的柱使用規(guī)范 ? 使用新鮮的水溶液，并考慮使用生物穩(wěn)定劑（如疊氮化鈉） ? 儲存色譜柱時，應沖凈緩沖鹽，并用有機溶劑保護色譜柱（乙腈） ? 避免外力損傷色譜柱：彎曲、跌落或將接頭擰的過緊 ? 完全潤濕在運輸中變干的色譜柱 ? 對含有保留性較強的雜質組分的樣品要進行預處理 ? 定期用強極性的溶劑清洗色譜柱 ? 清除柱填料的局限性 ? 了解溶劑對樣品的溶解性及分離的影響 ? pH ? 溫度 ? 化學兼容性 ? 在使用前過濾溶劑 預柱與保護柱 從泵來的流動相 預柱 進樣器 保護柱 分析柱 到檢測器 預柱對流動相而言 保護柱對色譜柱而言 Stripping or Concentrating Column Authoring Division Name File Name Security Notice (if required) H 帶可重復使用接頭及完整保護柱的卡套柱 無保護柱 有保護柱 帶 Techtron保護柱的 Zorbax 卡套柱 帶整體過濾片的Techtron 保護柱 制備樣品 : 流動相 過濾樣品，以確保其不含有固體微粒 用流動相或比流動相極性較弱的溶劑溶解樣品 進樣的樣品體積應盡量小 樣品不溶于流動相 樣品溶于流動相
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