hplc常見故障排除及維護(hù)-資料下載頁(yè)
2025-08-16 02:14本頁(yè)面
【正文】 N, As, k39。) 色譜柱需保存在有機(jī)溶劑中 (乙腈 ) 關(guān)于保留時(shí)間漂移的專題討論 保留時(shí)間不重現(xiàn) ? 保留時(shí)間不重現(xiàn)有兩種不同的情況： ? 保留時(shí)間漂移：保留時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化。 ? 保留時(shí)間波動(dòng)：保留時(shí)間無固定規(guī)律的波動(dòng)。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的原因分析 ? 將上述兩種情況區(qū)分開來對(duì)找到問題的原因往往很有幫助。 ? 保留時(shí)間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時(shí)間的無規(guī)律波動(dòng)。 ? 事實(shí)上，保留時(shí)間漂移的多半原因是不同機(jī)理的色譜柱老化 ，如固定相流失（例如通過水解），色譜柱污染（由樣品或流動(dòng)相所致）等。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素 ? 保留時(shí)間漂移的幾種最常見的原因如下： ? 一 、色譜柱的平衡 ? 二 、固定相穩(wěn)定性 ? 三 、色譜柱污染 ? 四 、流動(dòng)相的組成 ? 五 、疏水坍塌 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 一、色譜柱的平衡 ? 如果我們觀察到保留時(shí)間漂移，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相完全平衡。通常平衡需要 1020個(gè)柱體積的流動(dòng)相，但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑（如離子對(duì)試劑）則需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間來平衡色譜柱。 ? 流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時(shí)間的漂移。 應(yīng)注意：水是很容易污染的流動(dòng)相成分。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 二 、固定相穩(wěn)定性 ? 固定相的穩(wěn)定性都是有限的，即使在推薦的 pH范圍內(nèi)使用，固定相也會(huì)慢慢水解。例：硅膠基質(zhì)在 pH4時(shí)水解穩(wěn)定性最好。 ? 水解速度與流動(dòng)相類型和配體有關(guān)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長(zhǎng)鏈鍵合相要比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。 ? 如經(jīng)常清洗色譜柱會(huì)加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 三 、色譜柱污染 ? 保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見原因是色譜柱污染。 ? HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器、儀器密封墊以及樣品等。通常通過實(shí)驗(yàn)可判斷污染的來源。 ? 樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分，就可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類脂類化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì)有反壓的增加。可以通過使用固相提?。?SPE）等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響。 ? 避免色譜柱污染最簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 相比之下，找到問題的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。如 THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在 THF中就不能溶解。 DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。 ? 使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。 反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 四 、流動(dòng)相的組成 ? 流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 五 、疏水坍塌 ? 當(dāng)小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近 100%的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或完全不保留的現(xiàn)象，這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由流動(dòng)相不浸潤(rùn)固定相表面而致。挽救的辦法實(shí)現(xiàn)用含大量有機(jī)組分的流動(dòng)相浸潤(rùn)固定相，再用高水含量的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 色譜柱長(zhǎng)期儲(chǔ)存也會(huì)發(fā)生此現(xiàn)象。 ? 使用內(nèi)嵌極性基團(tuán)的反相色譜柱，如 Waters SymmetryShield RP色譜柱或非端基封口的色譜柱，如 Waters Resolve色譜柱也可避免發(fā)生坍塌。 謝謝觀看！ 第八版 第七版 第六版 第五版 第四版 第三版 第二版 第一版 版 本 改 編 者 日 期 備 注
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