分子生物學(xué)試題(存儲(chǔ)版)
【正文】 KK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三級(jí)激活。 AC催化ATP生成cAMP? Ca2+CaM依賴(lài)的蛋白激酶使目標(biāo)蛋白磷酸化。 逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴(lài)于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱(chēng)互補(bǔ)DNA。（十）、藍(lán)白篩選的原理？答：某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點(diǎn)的DNA序列。在4組獨(dú)立酶反應(yīng)中分別采用4種不同的ddNTP，結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核苷酸，它們將分別終止于模板鏈的A、C、G或T位置。雜交液中的甲酰胺：甲酰胺能降低核酸雜交的TM值?；蚪M探針：從基因組文庫(kù)里篩選得到一個(gè)特定的基因或基因片段的克隆后，大量擴(kuò)增、純化，切取插入片段，分離純化為探針。PCR標(biāo)記法：在PCR反應(yīng)底物中，將一種dNTP換成標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP， 這樣標(biāo)記的dNTP就在PCR反應(yīng)的同時(shí)摻入到新合成的DNA鏈上。新合成的引物延伸鏈經(jīng)過(guò)變性后又可作為下一輪循環(huán)反應(yīng)的模板PCR，就是如此反復(fù)循環(huán)，使目的DNA得到高效快速擴(kuò)增。引物的連續(xù)互補(bǔ)序列，一般不超過(guò)3bp。 KCl 促進(jìn)引物的退火，濃度太高時(shí)會(huì)抑制Taq DNA聚合酶活性。Mg 2+濃度還會(huì)影響引物的退火、模板與PCR產(chǎn)物的解鏈溫度，從而影響擴(kuò)增片段的產(chǎn)率。退火溫度與引物Tm值有關(guān)，引物Tm值在5580 ℃ 范圍較為理想。基本原理：將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞再植入受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，人們可以通過(guò)分析轉(zhuǎn)基因和動(dòng)物表型的關(guān)系，揭示外源基因的功能；也可以通過(guò)轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動(dòng)物品種。 同源重組胚胎干細(xì)胞的篩選 ② ③ 突變的遺傳效應(yīng)：①遺傳密碼的改變：錯(cuò)義突變、無(wú)義突變、同義突變、移碼突變② 點(diǎn)突變：DNA大分子上一個(gè)堿基的變異。 胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng) （二十二）、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的概念、原理及應(yīng)用？答：概念：是指用人工方法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi)，并能穩(wěn)定傳代的一類(lèi)動(dòng)物。引物 。Mg 2+濃度過(guò)低，會(huì)顯著降低酶活性。引物的5’端可以修飾，如附加限制酶位點(diǎn)，引入突變位點(diǎn)，用生物素、熒光物質(zhì)、地高辛標(biāo)記，加入其它短序列包括起始密碼子、終止密碼子等（十八）、PCR的反應(yīng)條件？答：PCR反應(yīng)的緩沖液： ? G+C含量一般占45％ 55％。退火：引物＋單鏈DNA?雜交鏈，引物的Tm值。對(duì)于任何一個(gè)用作探針的DNA片段，隨機(jī)引物混合物中都會(huì)有一些六核苷酸片段可以與之結(jié)合，起到DNA合成引物的作用。提取質(zhì)粒后分離純化作為探針使用。離子強(qiáng)度：在低離子強(qiáng)度下，核酸雜交非常緩慢，隨著離子強(qiáng)度的增加，雜交反應(yīng)率增加。在DNA聚合酶作用下通過(guò)三磷酸基團(tuán)摻入到延伸的DNA鏈中，但由于沒(méi)有3’羥基，不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。 依賴(lài)DNA的RNA聚合酶：識(shí)別特異性啟動(dòng)子，RNA轉(zhuǎn)錄。 DNA聚合酶：催化單核苷酸鏈延伸。 IP3 使鈣通道打開(kāi)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高? 受體活化G蛋白? Raf是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)激活過(guò)程。 協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。 問(wèn)答題（一）、病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn)？答：病毒基因組的特點(diǎn)：① 核酸探針是指能識(shí)別特異堿基順序的帶有標(biāo)記的一段DNA或RNA分子。4 核酶：是一種可以催化RNA切割和RNA剪接反應(yīng)的由RNA組成的酶，可以作為基因表達(dá)和病毒復(fù)制的抑制劑。 RFLP：即限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，個(gè)體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱(chēng)為DNA多態(tài)性。 細(xì)胞癌基因：存在于正常的細(xì)胞基因組中，與病毒癌基因有同源序列，具有促進(jìn)正常細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和發(fā)育等生理功能。3 3 移碼突變：在編碼序列中，單個(gè)堿基、數(shù)個(gè)堿基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可以使突變位點(diǎn)之后的三聯(lián)體密碼閱讀框發(fā)生改變，不能編碼原來(lái)的蛋白質(zhì)的突變。由于常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物，所以稱(chēng)為DNA芯片。2 DNA變性：在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價(jià)鍵則不受影響。 轉(zhuǎn)化：指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程。 蛋白激酶：是指能夠?qū)⒘姿峒瘓F(tuán)從磷酸供體分子轉(zhuǎn)移到底物蛋白的氨基酸受體上的一大類(lèi)酶。 反式作用因子：是指真核細(xì)胞內(nèi)含有的大量可以通過(guò)直接或間接結(jié)合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子。 端粒：以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒。 名詞解釋 操縱子：是指數(shù)個(gè)功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動(dòng)子和操縱基因）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)所構(gòu)成的基因表達(dá)單位，所轉(zhuǎn)錄的RNA為多順?lè)醋印?1 1 1 2 定量PCR：基因表達(dá)涉及的轉(zhuǎn)錄水平的研究常需要對(duì)mRNA進(jìn)行定量測(cè)定，對(duì)此采用的PCR技術(shù)就叫定量PCR。 當(dāng)癌基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)發(fā)生異常時(shí)，其產(chǎn)物可使細(xì)胞無(wú)限制增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。3 反義RNA：堿基序列正好與有意義的mRNA互補(bǔ)的RNA稱(chēng)為反義RNA。 病毒癌基因：存在于病毒（大多是逆轉(zhuǎn)錄病毒）基因組中能使靶細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。 基因治療：一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞，以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法。4 SD序列：轉(zhuǎn)錄出的mRNA要進(jìn)
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