【正文】 coli DNA聚合酶I是多功能酶，具有：①DNA聚合酶活性，能按模板要求，以5’→ 3’方向合成DNA，在DNA復(fù)制中，常用以填補引物切除后留下的空隙；②539。OH與前一個岡崎片段的5’磷酸接近時，復(fù)制停止，由DNA聚合酶I切除引物，填補空隙，連接酶連接相鄰的DNA片段。提示：①獲取外源目的基因；②尋找基因載體(通常為質(zhì)粒、噬菌體等)使用限制性內(nèi)切酶，使目的基因與載體產(chǎn)生相同粘性末端，兩個末端互補連接，形成重組DNA；③通過轉(zhuǎn)化(或感染)將重組DNA引入寄主細胞；④從大量的寄主細胞中篩選出帶有重組體的細胞進行克隆。在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控中，一種方式就是不同σ因子的表達和大量使用。3．在E．coli中，使DNA鏈延長的主要聚合酶是_DNA聚合酶Ⅲ______，它由___7____亞基組成。9．DNA生物合成的起始，需要一段___ RNA ____為引物，引物由__引物_____酶催化完成，該酶需與—些特殊___蛋白質(zhì)____結(jié)合形成___引物體____復(fù)合物才有活性。17．RNA聚合酶沿DNA模板__ 3’→5’_____方向移動，RNA合成方向___ 5’→3’____。24．在細菌細胞中，獨立于染色體之外的遺傳因子叫__質(zhì)粒_____。 ②在合成過程中，RNA聚合酶需要一個引物。 ①與單鏈DNA結(jié)合防止堿基重新配對 ②保護復(fù)制中單鏈DNA不被核酸酶降解 ③與單鏈DNA結(jié)合，降低雙鏈DNA Tm值 ④以上都不對 9．紫外線對DNA的損傷主要是( ② )。 ①新合成的DNA鏈與模板鏈形成了雙螺旋結(jié)構(gòu)，而RNA鏈不能 ②DNA聚合酶有339。①終止子 ②ρ 因子 ③ δ 因子 ④dnaβ蛋白 ⑤ α亞基23．RNA與DNA生物合成相同的是( ②④⑤ )。②密碼的簡并性 ( )7．目前發(fā)現(xiàn)的逆轉(zhuǎn)錄酶大部分來自于病毒粒子。( √ )15．以單鏈DNA為遺傳載體的病毒，DNA合成時一般要經(jīng)過雙鏈的中間階段。( )( √ )線形DAN復(fù)制后，先導(dǎo)鏈引物切除后，無法延伸，故DNA鏈的一股鏈縮短13．轉(zhuǎn)錄時，RNA聚合酶的核心酶沿模板DNA向其5’端移動。( )5．在DNA生物合成中，半保留復(fù)制與半不連續(xù)復(fù)制指相同概念。①引物酶 ②解旋酶 ③解鏈酶 ④DNA連接酶 ⑤DNA聚合酶21．RNA聚合酶的核心酶由以下哪些亞基組成( ①③④ )。 ①DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶合成RNA引物 ②解旋蛋白打開DNA雙鏈 ③DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶合成的DNA互補鏈 ④DNA連接酶連接DNA片段 ⑤核酸內(nèi)切酶切除RNA引物 15．下列關(guān)于核不均一RNA(hnRNA)的論述哪些是正確的( ①③⑤ )。 ①不敏感 ②敏感 ③高度敏感 ④低度敏感 7．DNA復(fù)制中RNA引物的主要作用是( ① )。①其中一半沒有放射性 ②都有放射性③半數(shù)分子的兩條鏈都有放射性 ④都不含放射性2．關(guān)于DNA指導(dǎo)下的RNA合成的下列論述除了哪一項都是正確的( ② )。22．一條單鏈DNA(+)的堿基組成A2l％、G29％，復(fù)制后，RNA聚合酶催化轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物的堿基組成是__ A21％、G29％、U21％、C29％_____。15．大腸桿菌RNA聚合酶為多亞基酶，亞基組成__α2ββ’δ___，稱為__全__酶，其中_α2ββ’__亞基組成稱為核心酶，功能__合成RNA鏈__；σ亞基的功能__σ保證RNA聚合酶對啟動子的特異識別__。7．SSB的中文名稱___單鏈DNA結(jié)合蛋白____，功能特點是___使單鏈保持伸長狀態(tài)____。分離不同DNA用__超速離心_____方法，測定DNA含量用___紫外分光光度____方法，2．DNA聚合酶I(E．coli)的生物功能有_聚合作用______、__5’→3’外切酶作用_____和___3’→5’外切酶____作用。造成嘧啶堿基形成聚合體，發(fā)生堿基錯配、缺失和插入?！?39。提示：①將E．coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代，使所有DNA分子標記上15N；②將15N標記的E．coli再放入普通的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在細胞生長一代、二代 、… 、n代的時間間隔內(nèi)采樣；③采用氯化銫密度梯度離心分離DNA，并用紫外照相技術(shù)檢測DNA所在位置；④結(jié)果如下：其結(jié)果確切地證明DNA以半保留方式復(fù)制。32．轉(zhuǎn)錄單位(transcription unit)：RNA的轉(zhuǎn)錄只在DNA的一個片段上進行，這段DNA序列叫轉(zhuǎn)錄單位。但卻帶來高的變異率。19．誘變劑(mutagen)：使基因組發(fā)生突變的物理、化學(xué)、生物因素叫誘變劑。15．逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transeriptase)：催化以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程的酶。 9．復(fù)制叉(replication fork)：復(fù)制中的DNA分子，末復(fù)制的部分是親代雙螺旋，而復(fù)制好的部分是分開的，由兩個子代雙螺旋組成，復(fù)制正在進行的部分呈丫狀叫做復(fù)制叉。5．拓撲異構(gòu)酶(topoisomerase)：是一類引起DNA拓撲異構(gòu)反應(yīng)的酶，分為兩類：類型I的酶能使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應(yīng)無需供給能量，類型Ⅱ的酶能使DNA的兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當(dāng)它引入超螺旋時，需要由ATP供給能量。( √ )15．核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。( )7．大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與mRNA結(jié)合。端富含嘧啶的互補順序 ④啟動基因的順序特征 ⑤以上都正確19. ①肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵 ②氨酰一tRNA與核糖體的“A，’位點結(jié)合 ③核糖體沿mRNA移動 ④fMet—tRNAf與mRNA的起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合10．在真核細胞中肽鏈合成的終止原因是( ④ )。 ①從C→N端 ②定點雙向進行 ③從N端、C端同時進行 ④從N→C端2．不能合成蛋白質(zhì)的細胞器是( ③ )。9．原核細胞核糖體的____小___亞基上的 ___16SrRNA_______協(xié)助辨認起始密碼子。氨酰tRNA __為原料直接供體，以__核糖體_____為合成楊所。超螺旋正常肽段的核苷酸序列為：AUG GUA UGC GU… CG…；突變體肽段的核苷酸序列為：AUG GCU AUG CGU 。 Val: GUU GUC GUA GUG Arg: CGU CGC CGA CG AGA AGG利用放射性同位素標記法，通過核糖體的分離證明之。8．蛋白質(zhì)合成中如何保證其翻譯的正確性?提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對mRNA的識別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識別，保證了遺傳信息準確無誤地轉(zhuǎn)譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰tRNA能進入核糖體P位與起始密碼子結(jié)合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進入肽鏈內(nèi)部；(4)核糖體三位點模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰tRNA進入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對占據(jù)核糖體A位的氨酰tRNA的校對；變異校對即基因內(nèi)校對與基因間校對等多種校正作用可以保證翻譯的正確。6．氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰tRNA合成酶，形成氨酰tRNA，反應(yīng)分兩步進行： (1)活化 需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸AMP酶復(fù)合物。 (6)起始密碼子AUG，同時也代表Met，終止密碼子UAA、UAG、UGA使用頻率不同。(二)問答題1．參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?①mRNA：蛋白質(zhì)合成的模板；②tRNA：蛋白質(zhì)合成的氨基酸運載工具；③核糖體：蛋白質(zhì)合成的場所；④輔助因子：(a)起始因子—參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成；(b)延長因子—肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2．密碼子(codon)：mRNA中堿基順序與蛋白質(zhì)中氨基酸順序的對應(yīng)關(guān)系是通過密碼實現(xiàn)的， mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。 如pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。 b、將這個重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞并在受體細胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。 激活蛋白（CAP）對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。骨骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途 徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。 粘端 ）、（在對稱軸339。18．隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體 ）。③對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。10．蛋白質(zhì)折疊機制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核 ）、（結(jié)構(gòu)充實）、（最后重排）。2． RNA酶的剪切分為（自體催化 ）、（異體催化 ）兩種類型。16．藍白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。10．魔斑：當(dāng)細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產(chǎn)生一個應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達。分子生物學(xué)試題及答案一、名詞解釋1．cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。9．弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。15．考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。二、填 空1． DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解 ）片段的排列順序。9．蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對DNA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法 ）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉 ）。②將這個重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞并在受體細胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。17．雜交瘤細胞系的產(chǎn)生是由（脾B）細胞與（骨髓瘤 ）細胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細胞）可以利用次黃嘌呤，（ 骨細胞 ）提供細胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。 側(cè)切割產(chǎn)生539。三、簡 答1． 分別說出5種以上RNA的功能？轉(zhuǎn)運RNA tRNA 轉(zhuǎn)運氨基酸 ；核蛋白體RNA rRNA 核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNA 蛋白質(zhì)合成模板 ；不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體 ；小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接；小胞漿RNA scRNA/7SLRNA 蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA 對基因的表達起調(diào)節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA TATAAT起始位點 35 10真核生物增強子GC CAATTATAA—5mGpp—起始位點 110 70 253．對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。 細胞融合物中包含：脾脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。 方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。典型的DNA重組