【正文】 2005, 44(3) : 21 24.[7] 譚秀華, 武玉永, 馬立新, 等. 耐堿性木聚糖酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá). 微生物學(xué)報(bào), 2004, 45( 4) : 543 546.[8] 周海英. 畢氏酵母代謝－細(xì)胞循環(huán)組合模型的建立及過程優(yōu)化. [學(xué)位論文], 上海, 華東理工大學(xué),2002.[9] 任海濤. 重組畢氏酵母發(fā)酵過程的建模及優(yōu)化. [學(xué)位論文], 上海, 上海交通大學(xué), 2004.[10] 灑榮波,石貴陽,王正祥. 基因工程菌Pichia pastoris密度培養(yǎng)條件的搖瓶研究. 食品研究與開發(fā), 2005, 26 (2) : 52～56[11] 李洪淼,王紅寧,許欽坤. , 2005, 16 (2) : 210～212.[12] Petty, ., 2002. Effects of βmannanase addition to cornsoybean meal diets on growth performance, carca traits, Journal of Animal Science 80:10121019.[13] 伊博文, . 生物技術(shù)通訊,2010, 38( 27): 14850 14851, 14857[14] 趙國方編：《化工工藝設(shè)計(jì)概論》，原子能出版社，1990年.[15] 華南工學(xué)院等編：《發(fā)酵工程與設(shè)備》，輕工業(yè)出版社，1981年.[16] 輕工業(yè)部：《輕工業(yè)建設(shè)項(xiàng)目初步設(shè)計(jì)編制內(nèi)容深度規(guī)定》QBJS691. 致 謝時光飛逝，歲月如梭。、構(gòu)筑物的布置位置主生產(chǎn)車間建筑物的布置位置是決定全廠區(qū)布置的關(guān)鍵 在確定其位置時，考慮到生產(chǎn)的工藝，建筑物的高低，對采光的要求等因素。規(guī)劃道路及硬化地面約占總面積的18%，綠地占25%，建筑48%，廠標(biāo)、雕塑等其他內(nèi)容5%。綠化設(shè)施和美化環(huán)境布置。如：建筑設(shè)計(jì)防火規(guī)范、廠礦道路設(shè)計(jì)規(guī)范、工業(yè)企業(yè)采暖通風(fēng)和空氣調(diào)節(jié)規(guī)范、工業(yè)鍋爐房設(shè)計(jì)規(guī)范、工業(yè)企業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、工業(yè)“三廢”排放試行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定、工業(yè)與民用通風(fēng)設(shè)備電子裝備設(shè)計(jì)規(guī)范等。總平面設(shè)計(jì)應(yīng)將面積大、主要的生產(chǎn)廠房布置在長驅(qū)的中心地帶，以便其他部門為其配套服務(wù)；輔助車間和動力車間應(yīng)盡量在靠近其所服務(wù)的負(fù)荷中心；工廠大門和生活區(qū)應(yīng)與生產(chǎn)主廠房相適應(yīng)，便于工人上下班。（1）廠址的位置要符合城市規(guī)劃（供汽、供熱、給排水、交通工程、職工文化生活、商業(yè)網(wǎng)點(diǎn)等）和微生物發(fā)酵工廠對環(huán)境的特殊要求。 ，畫出剖視圖，最后畫出正式的車間圖，按照設(shè)計(jì)階段的不同劃分為初步設(shè)計(jì)階段的車間布置圖和施工圖階段的車間布置圖，它們在表達(dá)內(nèi)容的深度上有所不同；從設(shè)計(jì)程序上，一般為：車間布置草圖→車間布置圖（初步設(shè)計(jì)階段）→車間布置圖（施工圖階段）。對于笨重的、固定的和專用的設(shè)備，應(yīng)盡量排布在車間四周；而對于輕的，可移動的設(shè)備，可排在車間的中間，這樣，在更換產(chǎn)品時調(diào)換設(shè)備比較方便。對空壓機(jī)房、空調(diào)機(jī)房和真空泵房等既要分隔，又要盡可能接近使用地點(diǎn)，以減少輸送管路的長度及在管路中的能量損失。，應(yīng)考慮到進(jìn)行多品種生產(chǎn)的可能，以便靈活調(diào)動設(shè)備，并留有相當(dāng)?shù)挠嗟?，以便更換設(shè)備，同時，還應(yīng)注意設(shè)備相互間的間距和設(shè)備與建筑物的安全維修距離，既要保證操作方便，又要保證維修裝拆和清潔衛(wèi)生的方便。平面布置圖，就是把屋蓋（或樓蓋）掀開往下看，徑直畫出設(shè)備的外形輪廓圖。 1000=支座承受的重量為：48+++=：Dg=500mm視鏡：Dg=150mm 人梯：材料1Cr8Ni9Ti 根據(jù)發(fā)酵液的接種量為1/10，可以設(shè)計(jì)二級種子罐的體積為8 m179。/s取風(fēng)速v=25m/s 則F=178。/)103 =[1001013/(106)]103= (3)攪拌軸計(jì)算材料：1Cr18Ni9Ti 按扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度計(jì)算d≥[(10179。攪拌槳直徑Di=(1/3)D=(1/3) =,取Di=尺寸設(shè)計(jì)：葉寬B0=== 下攪拌槳離封底的間距C=（1/3）D，取C= 葉距S=3Di=3= 箭葉厚度δ=12mm（2）攪拌軸功率 轉(zhuǎn)速取 100r/min n=100r/min P= μ=103N179。）發(fā)酵罐為通風(fēng)式發(fā)酵罐，結(jié)構(gòu)為圓筒體橢圓形封頭焊接而成，材料為不銹鋼，罐內(nèi)必須焊接平整、磨光，以利于清洗和防治結(jié)垢。平均溫度差：△tm=[(3017)(3017)]/{ln[(3017)/(309)]}=℃一級種子罐換熱面積：F=Q/（K單罐批料量為： 8072%＝61t根據(jù)發(fā)酵液的接種量為1/10，所以投料量為:發(fā)酵罐61t，種子罐的個數(shù)為：每個發(fā)酵周期種子罐可生產(chǎn)次數(shù)為54247。而一般液體產(chǎn)品保存是在40℃% 。對于一般的發(fā)酵車間采用的是直接干燥的方式，本設(shè)計(jì)采用的是噴霧干燥器發(fā)酵液干燥為固體顆粒。本設(shè)計(jì)采用噴嘴排渣的碟片式離心機(jī)，具有堅(jiān)硬的外殼，底部突出，與外殼鑄在一起，殼上由圓錐形蓋，由螺母緊固在外殼上，殼由高速旋轉(zhuǎn)的倒錐形轉(zhuǎn)鼓帶動，其內(nèi)設(shè)有數(shù)十片錐角為60~120176。大量的研究表明, 流加甘油和甲醇混合物更有利于外源蛋白的高效表達(dá)。(3)罐壓：(表壓)。自然界的空氣是帶塵和細(xì)菌的空氣，且通過壓縮機(jī)壓縮和管道輸送，增加了水、油污、金屬屑等雜物，因此進(jìn)入發(fā)酵罐的空氣，必須是通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ幚砗蟮母蓛?、無菌空氣。其它試劑均為國產(chǎn)或進(jìn)口分析純試劑。FeS04種子培養(yǎng)基:甘油10。 H3B03 。 KOH 。(5)培養(yǎng)時間：36h。 第三章 木聚糖酶發(fā)酵的工藝流程運(yùn)用RT－PCR 從黑曲霉AN070902 中克隆木聚糖酶cDNA 片段，與載體pPIC9K 相連，構(gòu)建重組載體VMAN－pPIC9K，電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115，篩選產(chǎn)酶最高菌株進(jìn)行液體發(fā)酵。降低菌體死亡率,減少蛋白酶分泌,降低蛋白酶活性。　　pH對菌體生長和誘導(dǎo)表達(dá)都會產(chǎn)生影響,尤其是誘導(dǎo)時的pH,不僅會影響蛋白表達(dá)量和活性,而且會通過影響蛋白酶活性,來改變蛋白的降解程度。Zhao等將基礎(chǔ)鹽濃度降為1 /4時,誘導(dǎo)前后菌體死亡率分別降低83. 3%和48. 6% ～59. 2% ,菌體密度增加25% , HAS2IFN2α2b表達(dá)量提高92. 0% ,并保持恒定。濃度過高,雖可減少蛋白降解,卻會抑制菌體生長和蛋白表達(dá)。葡萄糖也可作為碳源,雖效果不如甘油,但性價(jià)比卻優(yōu)于甘油, 以葡萄糖代替甘油將有利于工業(yè)化生產(chǎn)。由于碳源主要是在合成代謝途徑中消耗的，大量的能量應(yīng)來自于合成代謝。圖 是簡化的甲醇期甲醇的代謝途徑，甲醇首先被醇氧化酶（AOX）氧化成甲醛和過氧化氫。伴隨著甘油的代謝途徑，也有呼吸鏈的作用。 細(xì)胞外的甘油進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，首先被甘油激酶磷酸化為三磷酸甘油 G3P（Glycerol3phosphate）。 第二章 木聚糖酶發(fā)酵機(jī)理 相對而言，對畢氏酵母的報(bào)道比較少且多為非結(jié)構(gòu)模型。由于木聚糖酶具有重要的應(yīng)用價(jià)值以及在生物工程技術(shù)的重要地位，現(xiàn)在己經(jīng)有越來越多的科研人員致力于木聚糖酶的開發(fā)研究，如高產(chǎn)菌株的選育、工程菌的構(gòu)建、優(yōu)化培養(yǎng)條件、無纖維素酶污染的木聚糖酶等。易于在中、小企業(yè)推廣應(yīng)用，目前國內(nèi)木聚糖酶生產(chǎn)主要采用固體發(fā)酵方式。其他應(yīng)用：據(jù)報(bào)道，木聚糖酶可與其它酶共同參與使植物降解為戊糖、己糖，再用其它菌株發(fā)酵生產(chǎn)乙醇。在造紙行業(yè)中的應(yīng)用：木聚糖酶在造紙工業(yè)中的重要作用體現(xiàn)在其取代了有毒化學(xué)物質(zhì)，通過酶法預(yù)處理可以回收造紙行業(yè)中有用的副產(chǎn)物等方面。且操作設(shè)備簡單，整個生產(chǎn)過程中無廢物產(chǎn)生，不存在環(huán)境污染問題，產(chǎn)率較高。離子、小分子與木聚糖的結(jié)合：除了陽離子與一些木聚糖中帶負(fù)電基團(tuán)結(jié)合外，木聚糖的立體結(jié)構(gòu)也使它與離子發(fā)生螯合作用事實(shí)上，陽離子能在木聚糖分子間形成離子橋，這將大大影響其粘度和凝膠的形成特性。其它一些特異性酶，如αL呋喃型阿拉伯糖苷酶多以單體形式存在，也有二聚體、四聚體、六聚體和八聚體等形式，分子量為53～495kDa，～ ；α葡萄糖醛酸苷酶的分子量一般都大于100kDa。 不同來源的木聚糖酶在組成和催化性質(zhì)上各不相同，但它們的理化性質(zhì)有相似的地方。1，4木聚糖酶[]是以單個木糖為切割單位，它作用于木聚糖的非還原性末端，使反應(yīng)體系的還原性不斷增加。 High density fermentation。年產(chǎn)6000噸木聚糖酶發(fā)酵車間的設(shè)計(jì) 作 者 姓 名 李斌 專 業(yè) 生物技術(shù)及應(yīng)用 指導(dǎo)教師姓名 張大偉 目 錄摘 要 …………………………………………………………………1ABSTRACT ……………………………………………………………2 第一章 緒論 ……………………………………………………3 ………………………………………………………3 ……………………………………………3 ……………………………………………4 ……………………………………………………4 …………………………………………5 ………………………………………………6 ………………………………………6 ………………………………………6 …………………………………………………………7 第二章 木聚糖酶發(fā)酵機(jī)理……………………………………7 ………………7 ……………………………………………………7 ……………………………………………………9 ………11………………………………………………………11………………………………………………………11…………………………………… 11,降低蛋白酶降解…………………………………12…………………………………………………………12　………………………………………………………12(DO )的影響………………………………………… 13( CWPT I )與比生長速率(μPT I )的影響……13 第三章 木聚糖酶發(fā)酵的工藝流程 …………………………13……………………13 …………………………………………………………… 13 的獲得 ………………………………… 13－pPIC9K 的構(gòu)建……………………………… 13－pPIC9K－GS115 的獲得和高酶活菌株的篩選…13……………………………………… 13………………… 14 …………………………………………………………… 14…………………………………………… 15………………………………………………………… 15……………………………………… 16……………………………………………………………… 16……………………………………………………………… 17…………………………………………………………… 17 ……………………………………………………18 …………………………………………18 ………………………………………………18 ………………………………………18 第四章 工藝計(jì)算 ……………………………………………19 ………………………………………………………19………………………………………………19…………………………………………………………20………………………………………………………20 第五章 設(shè)備的設(shè)計(jì)與選型…………………………………21 ……………………………………………21……………………………………………23………………………………………………23……………………………………………………26 ………………………………26 第六章 發(fā)酵車間的布置設(shè)計(jì) ……………………………29 ………………………………………………………………29……………………………………………29………………………………………………29…………………………………………30……………………………………………………31…………………………………………………………32 第七章 總平面布置與建筑說明……………………………33……………………………………………………33…………………………………………………………33……………………………………………………………………33………………………………………………………33………………………………………………………33…………………………………………………………33………………………………………………………34………………………………………34………………………………………………35…………………………………………………………35…………………………………………………………35……………………………………………………35…………………………………………………36參考文獻(xiàn)…………………………………………………………………37致謝……………………………………………………………………3838 / 43摘 要木聚糖酶(β1,4DXylanase, )是一類能夠水解β1,4糖苷鍵的半纖維素