【正文】 以最大限度的減少輸汽、水、電、冷的管線為原則，同時動力車間應安排在廠區(qū)的下風向，以減少煙塵污染廠區(qū)和引起火災。這樣則滿足了生產(chǎn)工藝流水線的要求，以利于鄰近各廠房建、構筑物之間保持協(xié)調(diào)、互相的關系。生產(chǎn)項目總建筑面積12230m2，其中發(fā)酵車間為4500m2，提煉車間2000m2，干燥車間500m2，包裝車間800m2，制冷劑車間、泵房500m2，空壓機車間400m2，綜合樓1000m2，其他配套工程鍋爐房、配電房、倉庫等3530m2，購置生產(chǎn)、實驗及配套設備汞191臺（套）。行管部門。工廠的大門至少應設置兩個以上。（6）廠址選擇要有利于“三廢”處理，保證環(huán)境衛(wèi)生。由于管路系統(tǒng)的設計對工藝的要求很高，譬如物料的性質、物料的流量、流送的位置，都與工藝的設計密不可分，所以管道布置是否合理，不僅直接關系到建設指標是否先進合理，而且也關系到生產(chǎn)操作能否正常進行以及廠房各車間布置的整齊美觀、通風采光良好等問題，也就是說，工藝設計師必須進行管路計算。①工藝流程的合理性，人流、物流的暢通，與總平面的協(xié)調(diào)（包括廢棄物及包裝物的流向）；②建筑結構的造價、建筑形式的實用和美感；③管道安裝（包括工藝、上下水、冷、電、汽等方面）的便捷、隱蔽、規(guī)范和美觀，與公用設施的距離及施工的便利；④車間內(nèi)外運輸?shù)牧鲿常òㄔ线M廠及產(chǎn)品出廠的流向）；⑤生產(chǎn)衛(wèi)生條件的合理、規(guī)范；⑥操作條件的可靠性、消防安全措施的完整；⑦通風采光等。依據(jù)前面的計算，按比例繪制發(fā)酵車間平面立面布置圖。如衛(wèi)生消毒、防蠅防蟲、車間排水、電器防潮及安全防火等措施。在進行車間工藝布置時，應根據(jù)下列原則進行：。車間布置一經(jīng)施工就不易更改，所以，在設計過程中必須全面考慮。178。(1+)/]/(560)=179。Nρ)/ μ=[178。3600s/h) =102m179。=8080%D==3033mm 取整D=3100mm則H0=6200mm H==7750mm 取H=8000mm封頭橢圓短半軸長度ha=(1/4)D=775mm封頭橢圓直邊高度hb=(HH0)/2ha=(80006200)/2775=125mm則橢圓封頭的體積為V1=(π/4)D178。平均溫度差： △tm=[(3017)(3017)]/{ln[(3017)/(309)]}=℃換熱面積：F=Q/（K種子罐：采用立式蛇管換熱器，換熱系數(shù)為K＝400KJ/(m3C。 由于所生產(chǎn)的酶為熱敏性物質，應經(jīng)量降低發(fā)酵液的溫度，采用并流式使得最熱的熱風與濕含量最大的霧滴接觸，因而濕份迅速蒸發(fā)，霧滴表面溫度接近空氣的濕球溫度，同時熱空氣濕度也顯著降低，因此從霧滴到干燥成品的整個歷程中，物料的溫度不高，這對于熱敏性的酶的干燥特別有利。/h。甲醇傳感器在線檢測控制甲醇的流加： 通過在線檢測甲醇濃度控制甲醇的流加, 由于傳感器靈敏度高, 響應時間短, 因此能有效地控制甲醇的流加速率, 使甲醇的濃度維持恒定, 同時有效地解決甲醇抑制時實現(xiàn)恒化培養(yǎng)問題, 是目前為止最好的一種檢測甲醇濃度的方法。底物流加方法：在誘導初始階段, 細胞處于由甘油代謝向甲醇代謝的過渡適應期, 甲醇比消耗速率不斷增加。發(fā)酵罐操作：(1)溫度：30177。發(fā)酵全程通過調(diào)節(jié)攪拌速率使溶氧濃度維持在30%左右，溶氧電極為INPRO6100/120/T/N（MettlerToledo, Switzerland）；通過流加氨水控制pH≈，pH電極為405DPASSCK8S/120（MettlerToledo, Switzerland）。甘油期流加發(fā)酵培養(yǎng)基:50% (V/V)的甘油配以一定量的FM21和TM l 。(NH4)S04 1。5H2O 。微量元素溶液(PTM1):ZnC12 2。BMGY:1og/L酵母膏、Zog/L蛋白陳、20g/L葡萄糖、Zog/L瓊脂、 ，pH=， ，4xl04g/L生物素、20g/L甘油、L一eys。(2)(NH4)2S04：添加量：5Kg/m3。( CWPT I )與比生長速率(μPT I )的影響CWPTI和μPTI分別反映菌體生物量和生理狀態(tài),提高CWPTI和μPTI均能有效提高蛋白表達量。因此,必須選擇合適的溫度,而且在不同階段,應選擇不同的溫度,采用變溫發(fā)酵。Xiao等[添加VitC并維持在4～10mmol /L后,菌體死亡率降低65. 4% ,水蛭素降解程度降低30. 2% ,完整蛋白的表達量提高56. 8%。基礎鹽。CMeOH通過補料調(diào)節(jié)并保持恒定,其檢測控制方法有溶氧反饋控制、甲醇離線控制和在線控制,而甲醇在線控制最優(yōu)。擊要指出的是，生成1摩爾的GAP擊要消耗3摩爾的甲醛(Lin Cereghino and Cregg, 2000: Lueers et al., 1998)。消耗的甲醇進入分解代謝的比例為 φ。 其中甘油轉化為三磷酸甘油： （21）G3P 的糖酵解方程（22）以及G3P 合成細胞物質的方程（23）如下： （22） （23）視發(fā)酵罐內(nèi)溶氧水平或者丙酮酸脫羧反應速率是否受到限制，丙酮酸可能直接進入三羧酸循環(huán)或者進入乙醇發(fā)酵支鏈。在代謝過程中，如果溶氧或者丙酮酸脫羧反應速率受到限制，代謝將會進入乙醇發(fā)酵途徑。在甲醇期，甲醇首先被氧化為甲醛，甲醛隨后進入分解代謝與合成代謝兩個途徑。近幾十年來, 巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)發(fā)展成為一個較為理想的蛋白表達系統(tǒng)。但隨著生物技術的發(fā)展和木聚糖酶廣泛應用，采用液體發(fā)酵生產(chǎn)木聚糖酶將成為今后發(fā)展方向。根據(jù)發(fā)酵工藝的不同，可分為固體發(fā)酵和液體發(fā)酵兩種。在面包的生產(chǎn)中，1/3的水分是面團中的戊聚糖吸收的，戊聚糖的高吸水性對面團和面包的質量有明顯的影響。液態(tài)發(fā)酵工藝的缺點主要是對設備有一定要求及生產(chǎn)成本較高，技術要求也較為嚴格。當前，木聚糖酶主要通過真菌、細菌等微生物發(fā)酵生產(chǎn)獲得。在飼料消化時，多糖可以與腸道中的飼料顆粒表面、脂類微團表面及多糖蛋白質復合物表面相結合。1，4木聚糖酶分子量則多在30kDa以下。223。1，4木聚糖酶和223。關鍵詞：木聚糖酶 高密度發(fā)酵 補料培養(yǎng) 發(fā)酵罐 ABSTRACTxylanase (β1 ,4Dxylanase , ) are a class can hydrolyze β1 ,4glycosidic bond hemicellulase, its role in xylan substrate grapes , xylan, galactoxylan and galactoxylan such as grape xylan more widely distributed in nature, most are renewable resources. hemicellulose resources as the major products of deep processing, βxylanase has been widely applied In food, medicine, feed, paper, oil and many other fields.In this study, using RTPCR, selection was highly expressed xylanase secreted Pichia pastoris strain MAN22, and the liquid fermentation. Temperature control during fermentation 30 176。發(fā)酵工藝采用連續(xù)補料培養(yǎng)工藝， m3二級種子罐，采用2個80m3發(fā)酵罐，發(fā)酵罐直徑3100 mm。 fermentation pot 第一章 緒論 木聚糖酶（Xylanase）[EC ]是指將木聚糖降解成低聚糖和木糖的一組酶的總稱，是木聚糖降解酶系中最關鍵的酶。1，4木聚糖酶[]是從木聚糖主鏈的內(nèi)部切割223。根據(jù)對幾十種內(nèi)切223。木聚糖在低溶度時，因與水分子直接互作而增加了食糜的粘度。 木聚糖酶的研究始于20世紀60年代。但固體發(fā)酵同時也存在不易控制，酶系復雜，纖維素等酶含量高，難以精酶化等缺點；相比較而言，液體發(fā)酵由于是在液態(tài)環(huán)境中進行，菌體、底物、產(chǎn)物（包括熱）均易于擴散，使得發(fā)酵能夠在均質或擬均質條件下進行。木聚糖酶在造紙工業(yè)中還應用于廢紙脫墨這一重要環(huán)節(jié)，不僅使脫墨工藝變得容易，而且減少了化學藥品的用量。另據(jù)報道，木聚糖酶在去污洗滌，醫(yī)藥制造，以及在果實成熟、種子萌發(fā)、真菌的寄生及植物的抗性等諸多生理過程中都有著重要的應用。該方法便于在生產(chǎn)過程中進行實時檢測、控制，易于擴大生產(chǎn)規(guī)模。由于巴斯德畢赤酵母能夠在簡單培養(yǎng)基上高密度發(fā)酵生長,所以它最初是作為一種工業(yè)的甲醇營養(yǎng)型酵母,主要用來生產(chǎn)單細胞蛋白質?？紤]到面包酵母和畢氏酵母在代謝行為和菌體形態(tài)多方面有很大的相似性，因此面包酵母的很多研究成果可以為畢氏酵母所借鑒。經(jīng)過糖酵解過程，磷酸二羥丙酮被分解成丙酮酸（PYR）。關于甘油期內(nèi)細胞的合成代謝，在此假定細胞物質小部分由 G3P 轉化生成，其余大部分在 TCA 循環(huán)中生成。在分解代謝中，甲醛首先被甲醛脫氫酶（FLD1p）氧化為甲酸鹽，并進一步被甲酸鹽脫氫酶（FDH）氧化為二氧化碳，同時以電子 NADH 的形式釋放能量，同時也避免了細胞內(nèi)部甲醇積累過多而產(chǎn)生毒害作用（Sibirny et al., 1990）。不可否認，φ 的取值未必精確，還需要進一步的實驗結果來修正。CMeOH過低,會限制菌體生長和誘導強度。謝靜莉等在發(fā)酵后期添加(NH4 ) 2 SO4 ,使NH4+濃度維持在150mmol/L以上,蛋白表達量提高58. 8%。,降低蛋白酶降解在培養(yǎng)基中添加VitC、VitE可以減少菌體死亡,減少蛋白酶的分泌。因此,必須選擇合適的pH,一般在3. 0～7. 0,而且在不同階段,應選擇不同pH,采用變pH發(fā)酵。(DO )的影響　　高密度發(fā)酵需要消耗大量的氧氣,尤其是在甲醇誘導階段,供氧往往成為限制性因子。 的獲得－pPIC9K 的構建－pPIC9K－GS115 將可以分泌木聚糖酶的重組畢赤酵母加入到大型種子罐中進行擴大培養(yǎng)，種子罐操作。(6)攪拌速率：220r/min（1）原料的選擇選來源豐富、質量好、且便于儲存運輸?shù)脑希灰虻刂埔?，就近取材，盡量降低成本；符合生產(chǎn)工藝要求；（2）菌種:根據(jù)實際需要，本次設計用到的重組巴斯德畢赤酵母基因工程菌由本實驗室構建（如上所述）并保藏。7Hz0 。H20 。 yeast extract 10。甘油期間歇發(fā)酵培養(yǎng)基:甘油40。發(fā)酵過程采用了Invitrogen Corporation的發(fā)酵規(guī)范（Carlsbad, CA, USA, 2002），整個發(fā)酵過程分為甘油期和甲醇期兩個階段。(4)總空氣管道：120～150℃，～,1h,每月一次。(5)攪拌轉速：220r/min(6)pH控制：37。此外, K atakura等研究表明, 在畢赤酵母高密度補料 批式發(fā)酵過程中, 在過渡階段流加甘油/甲醇混合底物有助于菌體更快地進行甲醇代謝 。 ，~。 將料液分散為霧滴的霧化器是噴霧干燥器的關鍵部件，常用的三種霧化器是氣流式霧化器、壓力式霧化器和旋轉式霧化器。具體如下：1＝2，設計種子罐2個。Δtm）=[6000103/]/( 400)= m2發(fā)酵罐：采用立式蛇管換熱器，換熱系數(shù)為K＝400Kg/(m3內(nèi)部設擋板和攪拌器，大型罐內(nèi)設列管式換熱器。按通用罐系列，取攪拌槳直徑Di=(1/3)D=(1/3)=，取整Di=材料：1Cr18Ni9Ti耐酸不銹鋼罐體厚：S0=(PD)/[(230[σ]Ф)P]+C1+C2(mm)其中：P—耐受壓強， D—罐徑，單位mmФ—焊縫系數(shù)，取Ф= C1—腐蝕欲度，取C1=3mmC2—鋼板抗拉欲度，取C2=1mm [Ф]—許用應力，取12則S0=(3100)/(23012)+3+1=取S0=,。 ρ=179。/735)/100]1/4= 根據(jù)資料得，應按彎曲強度計算，考慮到軸上開鍵槽，軸徑增加20%， （1+20%）= (4)擋板：取4塊擋板(5)減速器設計與電機選型大功率皮帶減速機選用YPV9a1301150型，出軸轉速150r/min，傳動比：4功率：130KW。=S—罐體厚 ρ鋼=10179。具體部件的計算過程同發(fā)酵罐，其材料為1Cr8Ni9Ti耐酸不銹鋼材料。除平面圖外，有時還必須畫出生產(chǎn)車間剖面圖，剖面圖又叫“立剖面圖”。必須注意：要盡可能利用生產(chǎn)車間的空間運輸；合理安排生產(chǎn)車間各種廢料的排出，人員進出要和物料進出分開。，對生產(chǎn)車間或流水線的衛(wèi)生控制等級要進行明確的區(qū)域劃分和區(qū)間隔離，不同衛(wèi)生等級的制品不能混流、混放，更不能倒流，造成重復性加工和污染。，確定生產(chǎn)流水線方向。管路系統(tǒng)是飼料工廠生產(chǎn)過程中不可少的部分。（3）具有良好的交通運輸條件。散發(fā)煤煙灰塵的車間和易燃倉庫及堆場應盡可能集中布置在場地的邊沿地帶和主導的下風向。它是工廠的主體。南門主要功能是小型車輛、人員通行。場地空間根據(jù)自然地勢和環(huán)境條件，地勢坡度由東向西下降和排放雨水。這樣便于集中管理。 土曲霉植酸酶基因在巴斯德畢赤酵母中的高效表達. 湖北農(nóng)業(yè)科學,