【正文】 甲基紅、溴香草酚藍(lán)、中國藍(lán)、酸性復(fù)紅等酸堿指示劑；美藍(lán)氧化還原指示劑。空斑形成數(shù)PFU我國最早實(shí)驗(yàn)室生物安全衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是：微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用守則。糖類發(fā)酵是鑒定細(xì)菌最常用的生化反應(yīng)。合成RNA時DNA雙鏈要解旋，解旋部位稱為啟動子。與人工合成DNA區(qū)別。特點(diǎn)：過敏原進(jìn)入機(jī)體后，誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體。免疫球蛋白（Ig）的分類主要依據(jù)—重鏈恒定部份CH的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。在CFT反應(yīng)中為了查Ag，常常降低反應(yīng)溫度，稱為冷CFT，冷CFT反應(yīng)溫度通常是：4℃目前已知的可以在臨床上造成出血熱的病毒如下：布尼亞病毒科：流行性血熱、克里米亞剛果出血熱黃病毒科：登革出血熱絲狀病毒科：艾博拉出血熱。4．細(xì)胞病變（CPE）、二甲亞砜（DMSO）細(xì)胞保護(hù)劑、5．半數(shù)致死量（LD50）導(dǎo)致半數(shù)動物死亡的細(xì)菌感染量。潛伏期很長可達(dá)數(shù)月、數(shù)年或數(shù)十年之久。14. 空斑試驗(yàn)用于測定病毒的感染力。21. 乙腦病毒主要存在于血清中，用一于分離病的血清一般不加抗凝劑。用以分析細(xì)胞大小、細(xì)胞周期、DNA含量、細(xì)胞表面分子以及進(jìn)行細(xì)胞分選等。鏡檢：革蘭、莢膜染色。結(jié)核病的診斷依據(jù)：臨床表現(xiàn)、X線檢查特征的肺結(jié)核表現(xiàn)、結(jié)核菌的痰涂片檢查、以及結(jié)核菌素試驗(yàn)為主要手段的免疫測試。免疫功能決定了感染后是否發(fā)病及臨床類型。微需氧菌，～5%氧和10%CO2的環(huán)境中生長最好。多引物一步PCR擴(kuò)增法空腸彎曲菌mapA基因特異彩片段等。副流感嗜血桿菌生長只要Ⅴ因子。試管凝集法抗體的陽性標(biāo)準(zhǔn)：1≥320水是人類感染的主要來源，水樣1L，樣本采集到濃縮培養(yǎng)最長不超過14天，最好不超過2天。有些菌株還可產(chǎn)生LT和ST腸毒素。有獨(dú)特發(fā)育周期，能通過細(xì)菌濾器。人畜共患，立克次體的致病物質(zhì)主要有內(nèi)毒素（脂多糖）和磷脂酶 A。雄性豚鼠腹腔接種，,觀察陰囊紅腫（流—，地+）抗原結(jié)構(gòu)：一、可溶性群特異性抗原，與細(xì)胞壁表層的脂多糖構(gòu)成，耐熱。鼠、蚤傳播媒介，又稱鼠型斑疹傷寒。16種支原體中，肺炎、解脲、人型、生殖器、發(fā)酵支原體對人致病，肺炎支原體引起間質(zhì)性肺炎，其它4種引起泌尿生殖道感染。Dane顆粒呈雙層外殼圓形顆粒，攜帶核心抗原（HBcsAg）,抵抗力很強(qiáng)，100℃10分鐘滅活。戊型（HEV）：無包膜線狀單股正鏈RNA病毒球形，對高熱敏感。標(biāo)本：外周全血，抗凝劑：檸檬酸葡萄糖溶液B（ACD）用于新鮮抽提或凍存的血樣、肝素、CPD。確證試驗(yàn)法：免疫印跡試驗(yàn)（WB國常用）、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）116. 脊髓灰質(zhì)炎病毒：小兒麻痹癥，糞—口傳播。WHO推薦用：人橫紋肌肉瘤細(xì)胞（RD）、轉(zhuǎn)人脊灰病毒受體的小鼠肺細(xì)胞（L20B）117. 麻疹病毒：以發(fā)熱、呼吸道卡他癥狀和全身丘疹為特征的急性傳染?。ū悾?。細(xì)胞分離：Vero細(xì)胞（非洲綠猴腎細(xì)胞）、原代外周血單核細(xì)胞（PBMC）、B95a細(xì)胞（EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞），WHO推薦使用首選Vero/SLAM分離麻疹病毒；用ELISA方法檢測特異AgM抗體進(jìn)行麻疹診斷。鼠類為宿主和傳染源。119. 埃博拉出血熱：傳染性十分強(qiáng)烈的出血性發(fā)熱性疾病。屬黃病毒科，基因組長11 kb 單股正鏈RNA，球形，有包膜，根據(jù)E蛋白的核苷酸差異將乙腦分為5個基因組。12登革熱DF：乙類，傳播媒介伊蚊，屬黃病毒科及屬，正鏈RNA，含有一條單一開放讀碼框架，3個結(jié)構(gòu)蛋白：衣殼蛋白C、膜蛋白M、包膜蛋白E?？贵w陽性應(yīng)兩種方法同時陽性來最終確認(rèn)陽性結(jié)果。負(fù)鏈分節(jié)段RNA，3個基因節(jié)段：首選乳鼠腦內(nèi)、腹腔接種，取乳鼠腦組織制成抗體進(jìn)行血清學(xué)交叉試驗(yàn)。病毒分離：BHK、C6/36傳代細(xì)胞。用熒光免疫法病毒抗原積聚在細(xì)胞漿內(nèi)。我國流行的是Ⅰ和Ⅱ型，伴三痛（頭，眼眶，腰）及紅（面，頸，上胸部）。F蛋白、H蛋白都是中和抗原118. 流行性出血熱：又稱腎綜合征出血熱HFRS。抵抗力弱?；颊叱?4天就診，采5位0—4歲密切接觸糞便。HIV1 p24抗原陽性結(jié)果須中和試驗(yàn)確認(rèn)。HIV屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，分HIVHIV2型，95%由HIV1造成，球形，由兩條單股正鏈RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶、核心蛋白質(zhì)組成。對各種滅活劑、脂溶劑敏感，耐干熱。乙型（HBV）：反轉(zhuǎn)錄病毒，嗜肝DNA病毒科，病毒顆粒3種：22nm小球形外膜顆粒、40—100nm 22nm管形顆粒、完整42nmDane顆粒。Giemsa染色呈淡紫色，Dienes染色呈藍(lán)色不易褪色。（一）普氏立克次體 () ：是流行性斑疹傷寒的病原體。常用姬姆尼次、姬姆薩染色，多形性，無芽無鞭。培養(yǎng)物中抑制劑二乙氨基葡聚糖。三亞種區(qū)別：IMViC試驗(yàn)：肺炎亞種――＋＋，臭鼻亞種－＋－d，鼻硬結(jié)亞種－＋――。是人呼吸道及腸道定殖菌，條件致病菌。活性炭酵母浸出液瓊脂（含焦磷酸鐵、L半胱氨酸），菌落呈灰白色，如加溴甲酚紫，菌落呈淺綠色。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子的酚紅肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，是鑒別所有嗜血桿菌菌株的方法。病原鑒定：氧化酶、過氧化酶陽性，G—呈S型、螺旋狀、紡錘形可初步確定為彎曲菌。：菌體輕度彎曲似逗點(diǎn)狀，菌體一端或兩端有鞭毛，運(yùn)動活潑，在暗視野鏡下觀察似飛蠅。具有多形性、抗酸性、聚集性，典型胞內(nèi)菌。結(jié)核菌素試驗(yàn)紅腫硬結(jié)：50IU/ml制劑，≤5㎜陰性，≥5㎜陽性；≥15㎜強(qiáng)陽性。毒素基因位于大質(zhì)粒pXO1上，莢膜基因位于小質(zhì)粒pXO2上，二者是致病必須的。即以熒光素標(biāo)記抗體結(jié)合相應(yīng)細(xì)胞，用激光束激發(fā)單行流動的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞所攜帶熒光(強(qiáng)度或類別)進(jìn)行分選或分析。19. 中和試驗(yàn)必須制備高效價免疫血清或取高滴度病人恢復(fù)期血清。12. 協(xié)同作用一種物質(zhì)的存在能促進(jìn)其他物質(zhì)效應(yīng)的作用。7．中和抗體抗病毒機(jī)制：改變病毒表面的構(gòu)型，阻止病毒吸咐、穿入易感細(xì)胞進(jìn)行繁殖。MEM、RPMI 16403．細(xì)胞培養(yǎng)液分生長液、維持液，兩者區(qū)別在血清含量不同。鑒別宋內(nèi)志賀菌與其他志賀菌的生化反應(yīng)是：鳥氨酸試驗(yàn)。免疫原性含義：剌激機(jī)體免疫系統(tǒng)，有誘生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的能力。合成中tRNA搬運(yùn)氨基酸作用、rRNA構(gòu)成核糖體骨架、mRNA直接決定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。DNA在合成中單核苷酸分子必須順序以共價鏈連接在已形成核酸鏈3’末端的羥基上。鑒定腸桿菌科基本條件；發(fā)酵葡萄糖、氧化酶陰性、還原硝酸鹽。糖發(fā)酵試驗(yàn)原理：多糖→單糖→丙酮酸→酸性產(chǎn)物（或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）→PH下降→指示劑呈酸性變色?；罹?jì)數(shù)最準(zhǔn)確的方法傾注平板計(jì)數(shù)法。二、水分。病毒的分子生物學(xué)鑒定：病毒核酸和蛋白質(zhì)測定。用水平電泳槽，充分分離DNA片段最佳范圍200bp50kb等電聚焦電泳（IFE）蛋白質(zhì)分離以兩性電解質(zhì)制造凝膠有不同PH，使帶不同電荷的多肽在電泳條件下于等電點(diǎn)停留。三、檢測儀 分光光度計(jì)及檢測物質(zhì)分光光度計(jì)波長nm比色皿檢測細(xì)菌濃度可見分光光度計(jì)600玻璃測定顏色可見分光光度計(jì)450檢測蛋白紫外分光光度計(jì)280石英檢測核酸紫外分光光度計(jì)260石英紫外透射儀：暗室紫外線下看DNA條帶。微量吸管5—1000ul。（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動物）慢性毒性試驗(yàn)?zāi)康模鹤钚∮凶饔脛┝?、閾劑量、最大未觀察到有害作用劑量（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動物）危害性評價組成：認(rèn)定、描述、接觸評定、特征分析毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目：第一階段：急性毒性試驗(yàn)。MIC最小抑菌濃度101．決定細(xì)菌的形態(tài)因素：培養(yǎng)基的成份、PH、培養(yǎng)時間、溫度。（白喉類毒素、百日咳菌苗、破傷風(fēng)類毒素的混合疫苗DPT） 98. 百日咳鮑特菌：專性需氧，常用包姜培養(yǎng)基（含青霉素G）細(xì)小S銀灰色不透明珍珠狀菌落，在加血培養(yǎng)基上,周圍有狨毛狀狹窄溶血環(huán)，液體培養(yǎng)基中混濁生長。95. 肉毒梭菌：G+，芽胞膠囊于次極端呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，8型，以A，B多見，毒素不耐熱，1min煮沸即死。每份標(biāo)本至少接種三個血平板，置于有氧，無氧，5%～10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)。標(biāo)本：胃黏膜活檢組織；病原鑒定：生物特性是具有大量高活性的尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶＋、觸酶＋，具有堿性磷酸酶、r谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，硝酸鹽還原＋，可生長于5%甘氨酸、%氯化三苯四氮唑培養(yǎng)基中，三糖鐵中不產(chǎn)生硫化氫，微需氧5～8%，37℃生長，25℃和42℃均不生長的G－菌，初次分離要3～4天。產(chǎn)毒基因鑒定：用PCR檢測ct基因，流行株常帶有霍亂腸毒素。常用的保存或運(yùn)送及增菌用堿性蛋白胨水，文臘二氏，卡布。其優(yōu)點(diǎn)標(biāo)記物非常穩(wěn)定。小腸耶爾森：無動無芽無莢G－，25℃有動力，有周鞭毛，最適溫20～28℃，VP試驗(yàn)25℃陽性，37℃陰性，KIA只利用葡萄糖，MIU22℃動力陽性37℃陰性。血清學(xué)診斷：肥達(dá)試驗(yàn)，一般傷寒沙門菌O凝集效價＞1：80、H＞1：160，副傷寒H＞1：160具有診斷意義。（3）、敗血癥：無癥狀帶菌者：標(biāo)本：第12周采血，接種于室溫＞20℃平衡血培養(yǎng)瓶，不能超過2小時送樣，不能即時送樣放在室溫，切勿放冰箱；第34周取糞便；第3周起還可取尿液；整病程均可取骨髓液。志賀菌表達(dá)黏附、穿透上皮細(xì)胞、胞內(nèi)繁殖、及擴(kuò)散等活性的基因存在于大質(zhì)粒上。腸侵襲性型（EIEC）：作用大腸，志賀樣腹瀉，很像菌痢，發(fā)熱腹痛膿血便及里急后重。VDRE以膽固醇為載體。標(biāo)本：Ⅰ期梅毒取下疳滲出液（20分鐘內(nèi)查）；Ⅱ梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽出液；先天性梅毒取臍血；神經(jīng)梅毒取腦脊液。上清液可—20度凍存長時間。臨床上分離最高的是糞腸球菌，可分慶霉素高耐藥和低耐藥，一般用β內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類聯(lián)合。培養(yǎng)時間過長會自溶管底澄清，以奧普托欣試驗(yàn)、分解菊糖，膽汁溶菌陽性區(qū)別于甲型溶血性鏈球菌。69. 致病性鏈球菌：沉淀生長（肺鏈為混濁），在含腹水的培養(yǎng)物上生長良好，溶血株呈絮狀或顆粒狀生長，不溶血株呈均勻混濁生長。其中鼠類和豬為主要的傳染源和儲存宿主，通過人的皮膚黏膜侵入。診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清試管凝集試驗(yàn)（SAT）1：100++以上，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：1；10++67. 萊姆病原：伯道疏螺旋體引起萊姆病，細(xì)胞結(jié)構(gòu)：原生質(zhì)柱、表層、外膜、鞭毛。是抵抗力最強(qiáng)的無芽胞菌。冷凍干燥保存法是最有效的方法，利用各種斜面和半固體加石蠟油是最常用和最簡便的方法，一般不含糖，不用液體。悉生動物：給出無菌動物引入已知的5～ 17種正常腸道菌的動物。50. 直接鏡檢2h報告，最后鑒定和藥敏一般不過3天，除血外，必須在24h內(nèi)預(yù)報53. α溶血是草綠色，β溶血是透明環(huán)，γ溶血紅細(xì)胞不溶解，雙環(huán)。：菌體表面結(jié)構(gòu)，菌毛，侵襲性酶（凝固酶，透明質(zhì)酸酶，鏈激酶，膠原酶等）。37. 轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到愛體菌內(nèi)而致受體菌基因改變，分普遍和局限。B細(xì)胞第一個合成產(chǎn)物是u鏈。病毒的復(fù)制周期：吸附、穿入、脫殼、生物合成及組裝、成熟和釋放：條件致死性突變株，空斑和宿主依賴性。抗酸染色法：5%石炭酸復(fù)紅、5%鹽酸酒精脫色、美蘭復(fù)染。甘油（10％）或10%二甲基亞砜的血清作懸浮細(xì)胞的液體在液氮中保存細(xì)胞，在干冰溫度（70℃）和液態(tài)氮溫度（196℃）下長期保存其感染性；將凍存在小管或安瓿里的細(xì)胞以較慢的冷凍速率（1℃／分鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管貯存在—150～－196℃的液氮中，解凍做法是：將封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。23. ，另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱Seitz濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EKS最小，可阻止大病毒通過EK：居中，除去一般細(xì)菌。熱原質(zhì)：脂多糖，多由G產(chǎn)生，耐高溫，可引起發(fā)熱反應(yīng)，高壓蒸氣滅菌（121℃20分鐘）使其破壞。細(xì)菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來。18. 細(xì)菌生長繁殖的條件:充足的營養(yǎng)、適宜的溫度、合適的酸堿度、必須的氣體環(huán)境。補(bǔ)體C：存在血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞作用的必要補(bǔ)充條件。免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板。噬菌體可以根據(jù)不同細(xì)菌的表面受體來裂解目標(biāo)菌是判定某些種類病原體的重要依據(jù)。質(zhì)粒的分離提純使用酚處理，用乙醇沉淀。一般菌落有：油煎蛋樣（L），顆粒型（G），絲狀菌落（F），鑒定要點(diǎn)：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現(xiàn)象。7. 病原細(xì)菌確定原則：（郭霍Koch原則）從一種疾病病人中能有規(guī)律地發(fā)現(xiàn)一種細(xì)菌能夠分離這種細(xì)菌獲得純培養(yǎng)把這種細(xì)菌的培養(yǎng)物引入易感動物體內(nèi)，可以引起與病人類似的疾病在實(shí)驗(yàn)感染引起的疾病中仍然能夠分離同一種細(xì)菌。核酸雜交（基因探針雜交技術(shù)）是指單鏈RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根據(jù)堿基配對原則，借氫鍵相連而形成雜交分子的過程。引物是PCR特異性的決定因素，PCR反應(yīng)中TaqDNA聚合酶、引物加量過多，可引起非靶序列擴(kuò)增。藥物敏感實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn) ：抑菌圈直徑（毫米）：20以上極敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。屬名VRirus結(jié)尾的單詞,亞科名VRirinae結(jié)尾的單詞,科名VRiridae結(jié)尾的單詞。2. 結(jié)核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流感嗜血桿菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生長。：酶免疫技術(shù)（EIA）、協(xié)同凝集試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)（IF）、對流免疫電泳（CIE）、免疫印跡技術(shù)。3）增色效應(yīng)。有很大功能的DNA指紋技術(shù)。9. 奧普托欣試驗(yàn)：肺炎鏈球菌敏感。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌。大多數(shù)DNA噬菌體的DNA為線狀雙鏈（有尾噬菌體的核酸）；RNA噬菌體的RNA為線狀單鏈（無尾噬菌體的核酸為環(huán)狀單鏈DNA或線狀單鏈RNA）。外膜層由脂多糖，脂質(zhì)雙層，脂蛋白組成。體液免疫：（B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，CD4+Th輔助，Th2細(xì)胞能分泌細(xì)胞因子ILILILIL10）；效應(yīng)是抗體（Ab）；病毒中和