【正文】 ② 精氨酸： pI=(pK′α–NH3＋ +pK′R–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ ③ 丙氨酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ 用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂分離下述每對(duì)氨基酸，當(dāng)用 pH7． 0的緩沖液洗脫時(shí)，下述每對(duì)中先從柱上洗脫下來(lái)的是哪種氨基酸？ ① 天冬氨酸和賴氨酸： pH7． 0 天冬氨酸凈電荷－ 賴氨酸凈電荷＋ 1，天冬氨酸先洗脫。用糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr。 同功酶：催化相同化學(xué)反應(yīng)，但在蛋白質(zhì)分子的 結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶 可逆共價(jià)修飾：酶的催化下，酶分子上特定基團(tuán)與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆性共價(jià)結(jié)合，從而改變酶的活性。如磺胺藥抑菌。 別構(gòu)調(diào)節(jié)劑：能與別構(gòu)蛋白的別構(gòu)部位結(jié)合使蛋白產(chǎn)生別構(gòu)效應(yīng)的物質(zhì)。 二 .簡(jiǎn)答題 ?如何證明 ? 化學(xué)本質(zhì)： 大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)：酶水解的產(chǎn)物是氨基酸；使蛋白質(zhì)變性的因素也能使酶變性；酶具有兩性解離和等電點(diǎn)性質(zhì)；不能透過(guò)半透膜；和蛋白質(zhì)具有相同的顏色反應(yīng) Ribozyme（核酶）：有催化活性的天然 RNA ?有何區(qū)別 ? 共性：用量少而催化效率高；穩(wěn)定底物形成過(guò)渡態(tài)，降低反應(yīng)的活化能，加速反應(yīng)；改變化學(xué)反應(yīng)的速度，不改變化學(xué)反應(yīng)平衡；反應(yīng)前后酶本身不變化。根據(jù)基團(tuán)分成 8個(gè)亞類：轉(zhuǎn)移碳基、酮基或醛基、?；⑻腔?、烴基、含氮基、含磷基和含硫基的酶。 組成活性中心的氨基酸： His、 Lys、 Asp、 Glu、 Ser、 Cys等 ?有哪幾種類型 ? 又稱特異性，是指酶對(duì)底物嚴(yán)格的選擇性。 學(xué)說(shuō)說(shuō)明 酶的專一性 ? 酶降低化學(xué)反應(yīng)所需的活化能，使活化分子數(shù)增多，加快反應(yīng)速度。親電 催化：親電試劑 (具有接受電子對(duì)的原子 )引起的催化反應(yīng) ,是親核催化的反過(guò)程。 ⑥ His57 作為酸催化劑為 Ser195羥基 O提供質(zhì)子，四 面體中間物鍵斷裂，生成第二個(gè)產(chǎn)物羧酸化合物 ⑦ 游離酶重新形成。 4） pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 ① 最適 pH：表現(xiàn)出酶最大活性的 pH值 。 6）激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響：使酶活性由無(wú)變有或增加。 1）別構(gòu)抑制：負(fù)變構(gòu)劑與酶的別構(gòu)部位結(jié)合而引起酶活性下降。 退火：熱變性的 DNA緩慢冷卻的過(guò)程。 雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的主要特點(diǎn)是什么 ?此模型有何生物學(xué)意義 ?維持 DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu)的作用力是什么 ? 特點(diǎn)： ① 兩條反向平行 DNA 鏈沿同一根軸盤繞，形成右手雙螺旋，結(jié)構(gòu)上有大溝和小溝。 （ 1）一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： ① 分子量 25000左右，大約由 70－ 90個(gè)核苷酸組成，沉降系數(shù) 為 4S左右。 Sanger的雙脫氧鏈終止法測(cè)序的原理和步驟。 酮酸脫氫酶系輔酶，參與 酮酸的氧化脫羧。酰基載體。促進(jìn)甲基轉(zhuǎn)移作用；促進(jìn)某些化合物的異構(gòu)作用；維持SH的還原型狀態(tài)等。 Ⅱ 階段：構(gòu)件分子進(jìn)一步代謝生成少數(shù)幾種分子，如丙酮酸、乙酰 CoA、氨。 ？生物體內(nèi)高能磷酸化合物如何利用？ 高能化合物的類型： 磷酸化合物： 1）磷氧型 ① 烯醇磷酸化合物 ② ?；姿峄衔?③ 焦磷酸化合物 2）磷氮型 非磷酸化合物： 1）硫酯鍵化合物 2）甲硫鍵化合物 高能磷酸化合物的利用： ATP 循環(huán)： ATP←→ADP+Pi 生物體細(xì)胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)換最基本方式；轉(zhuǎn)移至其他核苷三磷酸（ NTP）；儲(chǔ)存：磷酸肌酸的形成 生物氧化習(xí)題 一 .名詞解釋 生物氧化：生物體內(nèi)一切代謝物進(jìn)行的氧化作用。 二 .簡(jiǎn)答題 ⒈ 呼吸鏈有哪些組分 ?它們都有什么生化作用 ?在線粒體內(nèi)膜上如何排列 ? 多組分組成：煙酰胺脫氫酶類、黃素脫氫酶類、鐵硫蛋白類、細(xì)胞色素類、輔酶 Q類（非蛋白）等。 底物水平磷酸化：是在被氧化的底物上發(fā)生磷酸化作用。 伴隨著物質(zhì)分解代謝產(chǎn)生了大量的化學(xué)能，這些能量一般都是以核苷三磷酸（例如 ATP或 GTP）和還原型輔酶（例如 NADH或 FADH2）的形式保存的。 Ⅰ 階段：大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)降解成單體構(gòu)件分子，例如蛋白質(zhì)、多糖、脂等降解成氨基酸、葡萄糖、甘油和脂肪酸等。四氫葉酸的 N5和 N10位可與多種一碳單位結(jié)合作為它們的載體，為一碳單位轉(zhuǎn)移酶輔酶。參與遞氫。 缺乏癥：夜盲癥、干眼病、佝僂病、軟骨病、凝血時(shí)間延長(zhǎng)、腳氣病、口角炎 、癩皮病、壞血病、惡性貧血等。 ? 有關(guān)因素： G和 C的含量高， Tm值高； DNA的均一性；介質(zhì)中離子強(qiáng)度等。生物學(xué)意義： 20世紀(jì)最偉大的發(fā)現(xiàn)之一，第一次闡述了遺傳信息的儲(chǔ)存方式及 DNA復(fù)制的機(jī)理，準(zhǔn)確地回答了 DNA是如何成為遺傳物質(zhì)的，推動(dòng)了分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的發(fā)展。 DNA復(fù)性：適當(dāng)條件下，變性 DNA的兩條彼此分開單鏈重新締合形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 核小體： DNA雙鏈 146bp以左手螺旋纏繞組蛋白八聚體 (H2A、 H2B、 H H4各 2個(gè) )核心 13∕4 圈形成。這就是通過(guò)在其他酶的催化下，酶分子上特定基團(tuán)與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆性共價(jià)結(jié)合，從而改變酶的活性。 ① 不可逆抑制：與酶的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合 ,使酶喪失活性 ,不能用透析超濾等物理方法除去抑制劑使酶恢復(fù)活性。 ② 雙倒數(shù)作圖法：林 貝氏 (LineweaverBurk)作圖法（ 1934） 縱軸截距＝ 1∕Vmax，橫軸截距＝ 1/Km ？如何影響？ 影響因素： 1）底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 底物濃度與反應(yīng)速度關(guān)系曲線：矩形雙曲線一級(jí)反應(yīng)：當(dāng) [S]很低時(shí)， [S]↑與 v↑成比例；混合級(jí)反應(yīng)：當(dāng) [S]較高時(shí)， [S]↑與 v↑不成比例；零級(jí)反應(yīng)：當(dāng) [S]很高時(shí)， [S]↑， v不變，達(dá)到最大反應(yīng)速度 2）酶濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響： 反應(yīng)速度與酶濃度成正比 v=k3[E][S]/Km+[S]，當(dāng) [S][E],式中 Km忽略不計(jì)， v=k3[E] 3）溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 兩種不同影響： ① 最適溫度前，溫度升高，活化分子數(shù)增多，反應(yīng)速度加快； ② 最適溫度后，溫度升高，熱變性速度加快。 ⑤ 第二個(gè)底物水為 His57提供質(zhì)子，羥基Ｏ親核攻擊羰基Ｃ形成帶氧陰離子的四面體中間物。 共價(jià)催化：酶分子上的活性基團(tuán)與底物以共價(jià)鍵結(jié)合，形成過(guò)渡態(tài)。 幾何異構(gòu) 專一性：選擇性催化幾何異構(gòu)體的一種構(gòu)型潛 (前 )手性專一性 ?什么是誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō) ?此學(xué)說(shuō)說(shuō)明了什么 ? 鎖鑰學(xué)說(shuō)：酶和底物的關(guān)系就象鎖與鑰匙那樣的剛性關(guān)系，酶活性中心結(jié)構(gòu)與底物的結(jié)構(gòu)互相吻合，緊密結(jié)合成中間絡(luò)合物。 合成酶類（ LigasesorSynthetases）：連接酶，與 ATP分解反應(yīng)相偶聯(lián)催化 CC、CO、 CN以及 CS鍵的形成反應(yīng)。 ? 國(guó)際系統(tǒng)分類法： 1961 年國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)（ EnzymeCommittee,EC）根據(jù)酶所催化的反應(yīng)類型和機(jī)理，分成 6大類： 氧化 還原酶類（ Oxidoreductases）：催化氧化 還原反應(yīng)，主要是氫的轉(zhuǎn)移或電子傳遞的反應(yīng)。 酶的轉(zhuǎn)換數(shù)：每秒鐘每個(gè)酶分子能催化的發(fā)生變化的底物微摩爾數(shù)，用 kcat表示（ mmol/S）。 Vmax和表觀 Km都減小。如有機(jī)磷 化合物使羥基酶磷酰化失活。 活性部位（ activesite）：酶分子中直接與底物結(jié)合，并和酶催化作用直接有關(guān)的部位。該八肽用 CNBr處理得到 ① Ala、 Gly、 Lys、 Thr； ② Gly、Met、 Ser、 Tyr。 pH：保存液態(tài)樣品時(shí)注意其穩(wěn)定 pH范圍 時(shí)間：生化和分子生物學(xué)樣品不可能永久存活。 ? 含量測(cè)定方法：凱氏定氮法、 Lowry法、紫外吸收法、染料結(jié)合法、膠體金法 純度鑒定方法：電泳、離心沉降、 HPLC和溶解度分析等。 攪拌與氧化：溫和 攪拌，加入少量巰基乙醇或半胱氨酸防止巰基氧化。 ② 掌握目的產(chǎn)物的物理 化學(xué)性質(zhì)（文獻(xiàn)調(diào)研和預(yù)備性實(shí)驗(yàn)） ③ 建立相應(yīng)的可靠的分析測(cè)定方法。 變性特征 : 1）生物活性喪失（主要標(biāo)志）。 ? 維持蛋白質(zhì)構(gòu)象的作用力：氫鍵、鹽鍵、疏水鍵、范德華力、二硫鍵 ? 一級(jí)結(jié)構(gòu)決定空間結(jié)構(gòu) ,空間結(jié)構(gòu)是功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，功能是空間結(jié)構(gòu)的外在表現(xiàn)，空間結(jié)構(gòu)尤其活性中心構(gòu)象變化，功能變化。；重復(fù)單位 。 ? 測(cè)定每條小肽片段中的氨基酸排列順序（通常用 Edman降解法） ? 推斷蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序（重疊肽拼湊） ? 確定二硫鍵和酰胺基的位置。 ？ 一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定步驟： ? 純化樣品， N端或 C端末端分析，測(cè)定由幾條肽鏈組成。 親和層析：利用共價(jià)連接有特異配體的層析介質(zhì)，分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白或其他分子的層析技術(shù)。 但聚集沉淀析出。 別構(gòu)效應(yīng)：別 構(gòu)劑與蛋白質(zhì)別構(gòu)部位結(jié)合而引起其亞基和整個(gè)分子構(gòu)象、性質(zhì)和功能發(fā)生改變。）旋轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)角度 ψ角。 結(jié)合蛋白質(zhì)：由單純蛋白質(zhì)和非蛋白輔基 ——核酸、糖、脂、磷、金屬和色素等結(jié)合構(gòu)成。 肽鍵：一個(gè)氨基酸的 α羧基與另一氨基酸的 α