酶的分離純化ppt課件(存儲版)
【正文】 ？ 鹽在溶液中離解為正負(fù)離子，反離子作用改變蛋白酶分子表面的電荷；同時離子存在改變水活度使分子表面水化膜改變。與離子價數(shù)成正比，與離子半徑與溶液介電常數(shù)成反比。 透析袋 蛋白質(zhì)溶液 蒸餾水 利用兩性電解質(zhì)在等電點(diǎn)時溶解度最低，以及不同的兩性電解質(zhì)（如酶、蛋白質(zhì)、氨基酸等）具有不同的等電點(diǎn)這一特性進(jìn)行分離純化的方法。用 ε r表示 （ 1）所析出酶沉淀比鹽析法析出的易于 離心分離或過濾； （ 2）不含無機(jī)鹽，適于食品工業(yè)用酶制 劑的制備； （ 3）易于除去或回收。 超速離心 :差速離心法和密度梯度離心法，后者又分速率區(qū)帶離心和等密度離心。 常用來分離提取核酸、亞細(xì)胞器和質(zhì)粒。 指顆粒從樣品液面完全沉降到離心管底所需的時間 。 (1)常壓過濾 以液位差為推動力，易操作，分離效果差，難成規(guī)模。 以薄膜兩邊的流體靜壓差為推動力； 根據(jù)截留的顆粒大小可分為 3種； MEF微濾器 根據(jù)顆?；蚍肿油ㄟ^薄膜的原理和推動力不同分三類。 (3)反滲透 反滲透（ RO）是膜分離技術(shù)的一個重要組成部分 膜孔徑小于 20 197。透析設(shè)備簡單，但操作時間長，要更換水或緩沖液。 在發(fā)酵行業(yè)中，由于傳統(tǒng)分離工藝技術(shù)條件的限制，預(yù)處理中常有 515%的產(chǎn)品損失，大量的可溶性蛋白、大分子雜質(zhì)被帶入到下游工序，增加了后提取工藝的環(huán)節(jié)和負(fù)荷，影響產(chǎn)品質(zhì)量及生產(chǎn)收率。 二、膜分離技術(shù) 借助于一定孔徑的各種高分子薄膜，將不同大小、不同性狀和不同特性的物質(zhì)顆?；蚍肿臃蛛x的技術(shù)。 以膜為過濾介質(zhì)的過濾稱 膜分離 技術(shù)； 微濾、超濾、反滲透、透析、電滲析都屬于膜分離技術(shù) 表 44 過濾的分類與特性（ P112） 類別 截留的顆粒大小 主要物質(zhì) 過濾介質(zhì) 粗濾 2um 酵母、霉菌、動植物細(xì) 胞、固形物 濾紙、濾布、纖 維、多孔陶瓷 微濾 ~2um 細(xì)菌、灰塵 微濾膜 超濾 20A~ 病毒、生物大分子 超濾膜 反滲透 20A 生物小分子、 鹽、離子 反滲透膜 一、非膜過濾 截留顆粒直徑大于 2μ m,用于分離酵母、霉菌、動植物細(xì)胞、培養(yǎng)基殘?jiān)取?沉降時間 沉降系數(shù)已知顆粒 效率因子 K S：沉降系數(shù)； ω:角速度； r1， r2:轉(zhuǎn)軸中心到液面與管底距離。 操作：介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻，足夠時間離心。分析用超速離心機(jī)裝有光學(xué)檢測系統(tǒng)、自動記錄系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)； 一、離心機(jī)的種類與用途 臺式高、超速離心機(jī) 轉(zhuǎn) /分以上 離心機(jī) 制備性 分析性 分析性超速離心機(jī) 普通離心機(jī) 冰凍離心機(jī) 臺式（或地面式）普通離心機(jī) 大容量冰凍離心機(jī) 小于 轉(zhuǎn) /分 高速冰凍離心機(jī) 超速冰凍離心機(jī) 更高 (分析性超速離心主要用于檢測大分子物質(zhì)的沉降特征和結(jié)構(gòu)等 ) 概述 所分離的顆粒大小和密度相差較大 :常速、高速離心 。介電常數(shù)通常隨溫度和介質(zhì)中傳播的電磁波的頻率而變。脫鹽常用 透析法 。 I=1/2∑m iZi2 酶在溶液中的溶解度與溶液中的離子強(qiáng)度的關(guān)系式： 蛋白質(zhì)和酶在溶液中的溶解度與溶液中的離子強(qiáng)度有密切的關(guān)系 β =LogSo ： 取決于酶的性質(zhì)，也與溫度和 pH有關(guān)。 其本質(zhì)是降低溶液的溶解度。 蛋白質(zhì)（酶）的分離純化 ? 蛋白質(zhì)分離純化的方法很多，主要是根據(jù)蛋白分子之間特異性的差異，如分子大小，溶解度，電荷等建立起來的。 例 : 從一些粒線體（ Mitochondria)及微粒體（ Microsome)等含多量脂質(zhì)物質(zhì)中提取蛋白質(zhì)時，采用 Morton的丁醇法效果較好。如6磷酸葡萄糖脫氫酶用 。 適宜的自溶條件：溫度、 pH值、離子強(qiáng)度等 加入噬菌體感染細(xì)胞 電離輻謝 自溶法 Back 第二節(jié) 酶的提取 ?是指在一定條件下，用適當(dāng)?shù)娜軇┨幚砗冈希姑赋浞秩芙獾饺軇┲械倪^程。 革蘭氏陰性菌：除了 溶菌酶外，另加 EDTA才有效。 表面活性劑 Back 四、酶學(xué)破碎法 在一定條件下，通過外加的酶或細(xì)胞本身存在的酶的作用，使細(xì)胞破碎。 有機(jī)溶液 粉碎后的新鮮材料在 0℃ 以下加入 5～ 10倍量的丙酮，迅速攪拌均勻，可破碎細(xì)胞膜，破壞蛋白質(zhì)與脂質(zhì)的結(jié)合。對數(shù)生長期細(xì)胞，細(xì)胞濃度和溶液粘度不宜太高。 二、物理破碎法 通過溫度、壓力、聲波等各種物理因素的作用使組織細(xì)胞破碎
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