多糖分離純化及含量測定(存儲版)
【正文】 的純度高 。 ? 陰離子交換柱層析適合于分離各種酸性 、 中性多糖及粘多糖 。 親和層析 ? 某些特定多糖具有和某些相對應的專一分子可逆結合的特性 , 如一種 凝集素 (刀豆球蛋白 ) 能專一地與分支多糖結合 。 苯酚 硫酸法的原理 ? 多糖在硫酸存在下先水解成單糖 , 再脫水生成具有呋喃環(huán)結構的化合物 。 ? 為排除還原性單糖的干擾 , 可采用 DNS( 3, 5二硝基水楊酸 )比色法測定還原糖含量 。 ? 現(xiàn)在應用較多的是 HPLC 法 ， 旋光度測定也是純度測定的一種方法 。 結構測定 —— 多糖高級結構測定 ? 研究多糖的二級結構常用的手段是 NMR 技術 ， 如 2D－ NMR， 13CNMR譜 ， 通用的方法是將現(xiàn)代 NMR 技術與理論計算相結合 ， 通過一定的理論計算篩選構象， 主要的理論計算方法有從頭計算 、 豐度經驗計算及經驗力場計算 。 ? 糖鏈、肽鏈連接方式：單糖與氨基酸組成、稀堿水解法、肼解反應； ? 多糖結構的分析方法很多 ， 迄今沒有一種方法可以單獨完成多糖結構的分析 。 四、純度與相對分子質量的檢測 ? 純度鑒定 ? 分子量的測定 ? 結構測定 包括多糖一級結構測定 、 多糖高級結構測定 純度鑒定 ? 多糖是高分子化合物 ， 其純品微觀上是不均一的 ， 通常所說的多糖純品實質上是一定分子量范圍的均一組分 。 ? 其次 , 顯色試劑的不專屬 , 單糖的干擾嚴重 , 實際上測得的結果是總糖的結果 。 三、多糖含量的測定方法 ? 多糖含量測定常規(guī)方法是以 無水葡萄糖為對照品 , 采用苯酚 硫酸法 , 或者蒽酮 硫酸法 。 ? 常用的凝膠有各種型號的交聯(lián)葡聚糖凝膠 (Sephadex)、 瓊脂糖凝膠 (Sepharose) 和聚丙烯酰胺凝膠 (Biogel)三大類 ， 以及后來在這些凝膠上進行性能改良的新一代凝膠 , 如 Sephacryl、 Superdex 和 Superose 等 。 通過柱層析, 多糖溶液得到濃縮及初步純化 (有的多糖通過該步驟即可得到各種均一多糖組分 )。 在洗脫過程中 , 由于各種多糖在柱上進行無數次的溶解和沉淀過程 , 最終將各種多糖分離開來 。 如采用中空纖維超濾膜 , 對多糖去蛋白質后的提取液通過超濾去除小分子雜質 。 ? 該法是在多糖水提液中滴加 5%～ 10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸 ， 混勻靜置過夜 ， 離心除去膠狀沉淀 ， 重復以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止 ， 得無蛋白質的多糖 。 ? 除蛋白的方法傳統(tǒng)上有 Sevage 法 、 三氯乙酸法 、 三氟三氯乙烷法 等 。 ? 在微波協(xié)助浸取過程中 ， 萃取劑種類 、 微波劑量 、 物料含水量 、 溫度 、 萃取時間及 pH值等都對萃取效果產生影響 。 ? 熱效應 增大了有效成分的溶解速度 ， 這種熱效應是瞬間的 ， 可使被提取成分的生物活性盡量保持不變 。 ? 纖維素酶 則能特異性地降解纖維素 ， 使植物細胞的細胞壁破裂 ， 有利于多糖易從胞內釋放 。 而且這種溶解能力隨著壓力的升高而增大 ， 提取結束后 ， 再通過減壓將其釋放出來 ，具有保持有效成分的活性和無溶劑殘留等優(yōu)點 。 ? 由于 H＋ 的存在抑制了酸性雜質的溶出 ， 稀酸提取法提取得到的多糖產品純度相對較高； ? 但在酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂 ， 且酸會對容器造成腐蝕 ， 除弱酸外 ， 一般不宜采用 。 水提醇沉法 是提取多糖最常用的一種方法 。 ? 藥理實驗研究顯示 , 多糖具有許多生物活性功能 , 包括免疫調節(jié) 、 抗腫瘤 、 降血糖 、 降血脂 、 抗輻射 、 抗菌、 抗病毒 、 保護肝臟等 , 且對機體毒副作用小 。 separation； extraction。 而其他一些多糖正在深入研究 , 如桑黃多糖 、 豬苓多糖 、 人參多糖 、 枸杞多糖 等 。 ? 該種方法提取多糖不需特殊設備 ， 生產工藝成本低 ，安全 ， 適合工業(yè)化大生產 ， 是一種可取的提取方法 。 不過用稀堿溶液提取時 , 提取溫度必須保持在 10 ℃ 以下 , 否則多糖容易發(fā)生降解反應 。 ? 由于糖類的化合物分子量較大 、 羥基多 、 極性大 ， 用純二氧化碳提取產率較低 ， 加入夾帶劑或加大壓力則可提高提取率 。 ? 酶解法 提取的實質是通過酶解反應強化傳質過程 。 ? 值得注意的是超聲時間不宜過長 ,否則提取量反而下降 , 原因可能是由于 超聲處理時間過長 , 導致多糖結構發(fā)生變化 , 糖鏈斷裂 , 使多糖提取含量下降 。 物理強化法
醫(yī)療健康相關推薦
鄂ICP備17016276號-1