蛋白質(zhì)的分離純化剖析(存儲版)
【正文】 6。n)。 zǐ jiāo hu224。 zǐ jiāo hu224。n x236。,為防止緩沖液的離子參與離子交換(l237。 zǐ jiāo hu224。 樣品pH 和離子強度：與起始緩沖液具有相同的pH和離子強度。)目的的離子類型。 zǐ jiāo hu224。IgG可用QAE—Sephadex A—50或DEAE—Sephadex A—50別離。它主要用于別離分子大小不同的生物大分子及測定其分子量。分子直徑比凝膠孔徑大的分子，不能進入凝膠顆粒的微孔里，只能經(jīng)過凝膠顆粒之間的孔隙。Kd由下式計算： Kd=(VeVo)/Vp 式中Ve為某種物質(zhì)從柱內(nèi)完全洗脫出來(chū l225。n)上考慮，別離分辨率可以表示為：,VV2是兩種物質(zhì)的洗脫體積，可以從加樣品開始到洗脫峰的最高點為止的洗脫體積計算。,第四十九頁，共六十一頁。,第五十七頁，共六十一頁。u xi224。柱床體積：至少要比結(jié)合所有樣品所需要的要大2—5倍。特征：有一個固定相和一個流動相。ng)總結(jié),第一節(jié) 引言。,第五十五頁，共六十一頁。,第四十七頁，共六十一頁。從數(shù)學(xué)概念(g224。,(一) 根本原理,第四十四頁，共六十一頁。,凝膠層析載體是多孔凝膠。n)層系的應(yīng)用實例,第四十二頁，共六十一頁。n)劑的再生條件,第四十一頁，共六十一頁。 分級物收集量：關(guān)系到能否充分代表層析柱的分辨率。),第三十九頁，共六十一頁。y242。 zǐ jiāo hu224。所用緩沖液的種類、pH大小，決定 待別離(fēnl237。,交換顆粒大小的選擇 粒子大小主要影響分辨率和流速。這類交換劑即堅硬、吸附容量大，形狀球形，能維持較好的流速及分辨率。n)葡聚糖凝膠〔Sephadex〕,第三十三頁，共六十一頁。,第三十二頁，共六十一頁。nɡ y242。,離子交換(l237。,離子交換(l237。n)劑的根本類型,根據(jù)可供交換的離子的性質(zhì)，離子交換劑可被分為(fēn w233。 由于pH可改變蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)和帶電量，鹽離子會影響蛋白質(zhì)在交換劑上吸附。分為： 陽離子交換劑: 解離基團帶負電, 結(jié)合陽離子。ngpǐn)，樣品(y224。,第二十二頁，共六十一頁。 選用任何單獨一種鑒定方法都不能最后確定蛋白質(zhì)的純度，必須同時采用23種不同的方法才能確定。,第四節(jié) 蛋白質(zhì)純度(chjīng)物常常作為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析之用。 不同的蛋白質(zhì)由于水化層厚度不同，發(fā)生沉淀需要的有機溶劑濃度不同，因此可利用不同濃度的有機溶劑別離不同的蛋白質(zhì)。,〔3〕有機溶劑法,與水互溶的極性有機溶劑如甲醇、乙醇(yǐ chn),蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其溶解度與其凈電荷數(shù)量有關(guān)，隨溶液pH變化而變化。,不同的蛋白質(zhì)分子，由于其分子外表的極性基團的種類(zhǒngl232。,〔1〕鹽析(y225。,主要是利用鹽析法、等電點沉淀、有機溶劑沉淀等方法，使目的蛋白(d224。,第三節(jié) 蛋白質(zhì)別離(fēnl237。,第九頁，共六十一頁。 如果(r,組織細胞的破碎方法很多，不同的實驗規(guī)模，不同的實驗材料和實驗要求，使用的破碎方法和條件也不同。假設(shè)不立即進行實驗或加工(jiā gōng)，應(yīng)冷凍保存。,第四頁，共六十一頁。 活性：要求大分子保持(bǎoch237。 ②工業(yè)生產(chǎn)的需要：食品、發(fā)酵、紡織、制革等工業(yè)，需要大量的高活性的酶制劑。)生物體中，是非常重要的生物大分子。n hu224。 ④基因工程的需要,第二頁，共六十一頁。而且提純步驟越多，損失越大。)的前處理,一、材料的選擇與預(yù)處理 選擇材料主要根據(jù)實驗?zāi)康亩āāo)的破碎,別離提取某一生物大分子，首先要求生物大分子從原來的組織或細胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來，并保持原來的天然(tiānr225。 細菌細胞的破碎比較困難，因為整個細菌細胞壁的骨架實際上是一借共價鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅韌。各種細胞組分按質(zhì)量大小的不同，經(jīng)過不同速度的離心后，沉降于離心管的不同部位，經(jīng)屢次分步離心后，即可獲得所需組分。通常采用類似生理條件下的緩沖液，如2050m mol/L的磷酸鹽緩沖液〔pH7.07.5〕或0.1mol/L TrisHCl〔pH7.58.0〕緩沖液作提取液。,第十一頁，共六十一頁。nb225。zǐ)與水分子作用，使水的活度降低，原來溶液中大局部的自由
外語相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1