蛋白質(zhì)的分離純化剖析(存儲(chǔ)版)
【正文】 6。n)。 zǐ jiāo hu224。 zǐ jiāo hu224。n x236。,為防止緩沖液的離子參與離子交換(l237。 zǐ jiāo hu224。 樣品pH 和離子強(qiáng)度：與起始緩沖液具有相同的pH和離子強(qiáng)度。)目的的離子類型。 zǐ jiāo hu224。IgG可用QAE—Sephadex A—50或DEAE—Sephadex A—50別離。它主要用于別離分子大小不同的生物大分子及測(cè)定其分子量。分子直徑比凝膠孔徑大的分子，不能進(jìn)入凝膠顆粒的微孔里，只能經(jīng)過(guò)凝膠顆粒之間的孔隙。Kd由下式計(jì)算： Kd=(VeVo)/Vp 式中Ve為某種物質(zhì)從柱內(nèi)完全洗脫出來(lái)(chū l225。n)上考慮，別離分辨率可以表示為：,VV2是兩種物質(zhì)的洗脫體積，可以從加樣品開(kāi)始到洗脫峰的最高點(diǎn)為止的洗脫體積計(jì)算。,第四十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第五十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。u xi224。柱床體積：至少要比結(jié)合所有樣品所需要的要大2—5倍。特征：有一個(gè)固定相和一個(gè)流動(dòng)相。ng)總結(jié),第一節(jié) 引言。,第五十五頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第四十七頁(yè)，共六十一頁(yè)。從數(shù)學(xué)概念(g224。,(一) 根本原理,第四十四頁(yè)，共六十一頁(yè)。,凝膠層析載體是多孔凝膠。n)層系的應(yīng)用實(shí)例,第四十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。n)劑的再生條件,第四十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。 分級(jí)物收集量：關(guān)系到能否充分代表層析柱的分辨率。),第三十九頁(yè)，共六十一頁(yè)。y242。 zǐ jiāo hu224。所用緩沖液的種類、pH大小，決定 待別離(fēnl237。,交換顆粒大小的選擇 粒子大小主要影響分辨率和流速。這類交換劑即堅(jiān)硬、吸附容量大，形狀球形，能維持較好的流速及分辨率。n)葡聚糖凝膠〔Sephadex〕,第三十三頁(yè)，共六十一頁(yè)。,第三十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。nɡ y242。,離子交換(l237。,離子交換(l237。n)劑的根本類型,根據(jù)可供交換的離子的性質(zhì)，離子交換劑可被分為(fēn w233。 由于pH可改變蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)和帶電量，鹽離子會(huì)影響蛋白質(zhì)在交換劑上吸附。分為： 陽(yáng)離子交換劑: 解離基團(tuán)帶負(fù)電, 結(jié)合陽(yáng)離子。ngpǐn)，樣品(y224。,第二十二頁(yè)，共六十一頁(yè)。 選用任何單獨(dú)一種鑒定方法都不能最后確定蛋白質(zhì)的純度，必須同時(shí)采用23種不同的方法才能確定。,第四節(jié) 蛋白質(zhì)純度(chjīng)物常常作為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析之用。 不同的蛋白質(zhì)由于水化層厚度不同，發(fā)生沉淀需要的有機(jī)溶劑濃度不同，因此可利用不同濃度的有機(jī)溶劑別離不同的蛋白質(zhì)。,〔3〕有機(jī)溶劑法,與水互溶的極性有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇(yǐ chn),蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其溶解度與其凈電荷數(shù)量有關(guān)，隨溶液pH變化而變化。,不同的蛋白質(zhì)分子，由于其分子外表的極性基團(tuán)的種類(zhǒngl232。,〔1〕鹽析(y225。,主要是利用鹽析法、等電點(diǎn)沉淀、有機(jī)溶劑沉淀等方法，使目的蛋白(d224。,第三節(jié) 蛋白質(zhì)別離(fēnl237。,第九頁(yè)，共六十一頁(yè)。 如果(r,組織細(xì)胞的破碎方法很多，不同的實(shí)驗(yàn)規(guī)模，不同的實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)要求，使用的破碎方法和條件也不同。假設(shè)不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)或加工(jiā gōng)，應(yīng)冷凍保存。,第四頁(yè)，共六十一頁(yè)。 活性：要求大分子保持(bǎoch237。 ②工業(yè)生產(chǎn)的需要：食品、發(fā)酵、紡織、制革等工業(yè)，需要大量的高活性的酶制劑。)生物體中，是非常重要的生物大分子。n hu224。 ④基因工程的需要,第二頁(yè)，共六十一頁(yè)。而且提純步驟越多，損失越大。)的前處理,一、材料的選擇與預(yù)處理 選擇材料主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。bāo)的破碎,別離提取某一生物大分子，首先要求生物大分子從原來(lái)的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái)，并保持原來(lái)的天然(tiānr225。 細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較困難，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅(jiān)韌。各種細(xì)胞組分按質(zhì)量大小的不同，經(jīng)過(guò)不同速度的離心后，沉降于離心管的不同部位，經(jīng)屢次分步離心后，即可獲得所需組分。通常采用類似生理?xiàng)l件下的緩沖液，如2050m mol/L的磷酸鹽緩沖液〔pH7.07.5〕或0.1mol/L TrisHCl〔pH7.58.0〕緩沖液作提取液。,第十一頁(yè)，共六十一頁(yè)。nb225。zǐ)與水分子作用，使水的活度降低，原來(lái)溶液中大局部的自由
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