生物大分子分離純化技術(shù)(存儲版)
【正文】 多 ， 因而它的選擇性高 ， 洗脫強度相應(yīng)低 ， 有利于生物大分子的洗脫及生物活性的保持 。 因此 ， 單鏈 DNA分子的結(jié)合弱 ， 結(jié)合的雙鏈 DNA分子可以通過增加磷酸洗脫緩沖液的濃度使之解離 。 親和層析已被廣泛地用于酶類 、運輸?shù)鞍?、 抗體 、 激素受體蛋白 、 藥物結(jié)合蛋白 、核酸 、 神經(jīng)遞質(zhì)蛋白以及其它生物大分子物質(zhì)的分離分析 。 一些生物大分子能和高分子化合物發(fā)生特異性的化學(xué)反應(yīng) ， 這些反應(yīng)是可逆的 、 特異的 。 26 5． 床體積 (Bed Volume) 每 1g干凝膠吸水膨化后的最后體積就叫床體積 。 23 24 凝膠色譜的物理特性 1． 凝膠顆粒的大小和形狀 層析用凝膠的形狀均為球形 ， 內(nèi)部具有高密度網(wǎng)孔 ， 并能形成均一的柱床 。 液相色譜大都在室溫下操作 ， 所用流動相可以用與生理液相近的緩沖水溶液 。 14 CGE主要在生物學(xué)上用于大分子的分離分析 ， 如蛋白質(zhì)和核酸 。 一般可采用電動法或流體力學(xué)法 。 4 由于毛細管具有良好的散熱性能 ， 從而可以在毛細管兩端加上高達 30000 V 的高壓 、 分離可以在很短時間內(nèi)完成 ， 分離效率非常高 。 所以 ，HPCE可以看成是一種儀器化程度比較高的電泳方式 。 8 2． 進樣系統(tǒng) 為了保證 HPCE分離的高效性 ， 進樣系統(tǒng)應(yīng)盡量把 nLpL級的樣品以最短的樣品區(qū)帶引入到毛細管中 。 13 CZE是基于溶質(zhì)在自由溶液中淌度差異的電泳分離方法 ， 是目前應(yīng)用最廣泛的一種 ， 如氨基酸 、 多肽及無機離子的分析 ， 手性對映體分離 ，蛋白質(zhì)純度鑒定及構(gòu)型研究等 。 200V/cm， 毛細管有效長度：7cm， EB的濃度為 1?g/ml 16 標準蛋白質(zhì)的分離 17 液相色譜法 液相色譜是目前對生物大分子的分離純化能力最強 、 效率最高 、 使用最廣泛的手段之一 。 最終所產(chǎn)生的結(jié)果是：分子越大移動的越快 ， 從而達到大小不同分子間的分離 。 對 G－ 50凝膠 ， 其得水率為 ?， 這個數(shù)值只表示吸進凝膠顆粒內(nèi)部的水分 ， 不包括凝膠周圍的水分 。 30 近年來又發(fā)展了一種新的層析法－ “ 親和層析法 ” ， 又稱 ‘ 特異配基層析法 ” 。 然后用一種特殊的洗脫劑把抗體從親和柱上洗脫下來 ． 也可以固相抗體來提純 、 分離抗原 。 雜交的雙鏈 DNA及部分變性的 DNA分子的親和性適中 。 39 蛋白質(zhì)及多肽的疏水基因一般包埋在分子的內(nèi)部 ． 許多生物大分子盡管是親水性的 ， 但它們也有足夠多的疏水基團暴露在分子的表面 ， 因而可以與載體表面的疏水基團發(fā)生相互作用 。 這是由于陰離子和陽離子在兩相間的不等價分配造成的 。 41 常見的液 — 液分配色譜中含有兩種液體 ， 如水合聚乙烯醇 (PEG)和葡聚糖 (DX)。 生物大分子非常小的電荷差異都可以用 IEC法分離開 。 36 親和色譜的應(yīng)用
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