【正文】 ） 首選化學(xué)鍵合相，勻漿法裝柱 2. 流動相及其流速的選擇： 選粘度小、低流速的流動相 —— 甲醇， 約 1ml/min 3. 柱溫的選擇： 選室溫 250C左右 四、 HPLC法中分離條件的選擇 一、液固吸附色譜法（ LSC） (liquidsolid adsorption chromatography) 二 、 液液分配色譜法 （ LLC） (liquidliquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography 三 、 離子色譜法 （ IC） （ ionexchange chromatography and ion pair chromatography) 四 、 空間排阻色譜法 （ SEC） （ steric exclusion chromatography 167。39。 利用手性固定相可以拆分分離具有手性的化 合物 。 高壓： 150350*105 Pa 高效：大于 30000塔板 /米 高靈敏： 109g （紫外檢測）、 1011g （熒光檢測） ? 第三章 高效液相色譜分析法 HPLC （ High Pertormance Liquid Chromatography， ） ? 167。分析試樣時， 取和制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時同樣量的試樣 (固定量進樣 )， 測得該試樣的響應(yīng)訊號，由標(biāo)準(zhǔn)曲線即可查出其百分含量。)m(s39。 ? 二、利用保留指數(shù)進行 I進行定性分析 )lglglglg(1001ZXXXXZZZiiI?????? ? Xz+1 ， Xz 分別代表含 Z+ Z個碳原子的正構(gòu)烷烴在測定柱上的調(diào)整保留參數(shù)， Xi代表待測物質(zhì)在測定柱上的調(diào)整保留參數(shù)。 Selfstudy amp。 ? 非硅藻土型擔(dān)體：聚合氟塑料擔(dān)體、玻璃 ? 微球擔(dān)體、高分子微球擔(dān)體等。當(dāng)然被測物的保留時間要短、峰形不能有嚴(yán)重拖尾。 ? ★ R 越大，表明兩組分分離效果越好 ? ★ 保留值之差取決于固定液的熱力學(xué)性質(zhì) ? ★ 色譜峰寬窄反映色譜過程動力學(xué)因素 ? 及柱效能高低 21)1()2(21)1()2( )(22wwttwwttR RRRR?????? ? 對于峰形對稱且滿足正態(tài)分布的色譜峰： R=1, 分離程度為 98%； R=，分離程度可達 %。設(shè)柱長為 L，理論塔板高度為 H，則 ? H = L / n ? 式中 n為理論塔板數(shù)。 ? 167。 ? 死體積 : ? 不被固定相滯留的組分，從進樣至出現(xiàn)濃度最大值時流動相通過的體積稱為死體積 (dead volume) ， VM。 ? Ⅴ 記錄系統(tǒng)：放大器、記錄儀、 ? 色譜工作站。 ? 色譜柱： 進行色譜分離用的細(xì)長管。 ? 按固定相的幾何形式分類： ? ， ? ， ? 。用 h表示。 ? VR ? = VR – VM 或 VR ? = tR ? F0 ? 相對保留值（ relative retention） ? 在相同的操作條件下，待測組分與參比組分的調(diào)整保留值之比，用 ri， s 表示 )()()()(sRiRsRiRsiVVttr??????， ? 色譜分析的實驗依據(jù)： ? １、根據(jù)色譜峰的位置（保留時間）可以進行定性分析。 ? 容量因子 （ capacity factor） 在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相之間分配達到平衡時的質(zhì)量比，稱為容量因子，也稱分配比，用 k表示。 Heff=L/neff n = 1+k k 2 ? neff ? 速率理論 （ J. J. Van Deemter 1956） 速率理論認(rèn)為，單個組分粒子在色譜柱內(nèi)固定相和流動相間要發(fā)生千萬次轉(zhuǎn)移，加上分子擴散和運動途徑等因素，它在柱內(nèi)的運動是高度不規(guī)則的，是隨機的，在柱中隨流動相前進的速度是不均一的。 4n)1)(4(1,21,2rrnR e f f????r 12， 相對保留因子 ? 與柱效的關(guān)系（柱效因子） ? 與容量因子的關(guān)系 R ∝ n 1/2 增加柱長 減小塔板高度 限制： L過長，保留時間延長，分析時間延長，色譜峰擴展。 ? 汽化室與檢測室溫度 （與被測對象的利用度有關(guān)） ? 汽化溫度、檢測室溫度高于柱溫 3070度。 ? 二、固定液的類型： ? 三、固定液的極性： ? 固定液與待測化合物之間的作用力主要屬定向力、誘導(dǎo)力、色散力、氫鍵力等弱相互作用為主，所以固定相的極性對分離過程非常重要，固定相極性用相對極性 P的公式表示： ? 規(guī)定： β ,β ’ 氧二丙腈固定液的 P=100、 角鯊?fù)楣潭ㄒ旱?P=0 、測試標(biāo)樣為環(huán)己烷 苯 rttqqqqqPRRxx2121211lglg100100)(，???????? ? 按 P的數(shù)值將固定液的極性以 20間隔分為五級： ? 0~20 為 0~+1 ，稱非極性固定液； ? 20~40 為 +1~+2 ，稱弱極性固定液； ? 40~60 為 +2~+3 ，稱中極性固定液； ? 80~100 為 +4~+5 , 稱強極性固定液； ? ? 固定液的極性與待測組分極性的選擇原則為： ? “相似相溶原理” ? 四、固定液選擇示例 ? ? ? 167。 Selfstudy amp。 27 氣相色譜定量法 ? 一、色譜定量公式： mi = fi′? Ai mi ：待測物質(zhì)質(zhì)量 fi ′ ：待測物質(zhì)定量校正因子 Ai ：待測物質(zhì)色譜峰的積分面積 ? 二、色譜峰的面積求法： ? 峰高乘半峰寬法 ? 峰高乘平均峰寬法 ? 峰高乘保留值法 ? 電子積分法 0 103hY1/2SignalthYA h ??? 2/2) YYhA ??? （tbhYhA Rh ????? 2/ ? 三、定量校正因子 ? （ Quantitative calibration factor） ? 絕對校正因子： ? 相對校正因子：用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為參照物、求出待測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物之間絕對校正因子的比值。)M(iM MMfMmAMmAfff ??? ? 四、定量計算方法 ? 歸一化法：若樣品中所有的組分均能流出色譜