【正文】 常用的分流方法，不同儀器上的分流有不同的形式。此為分流模式。 快速分析時因峰寬只有幾秒或少于 1秒 ，要求檢測器 、 記錄器響應時間快 ， 則檢測器和記錄器的時間常數(shù) ， 應少于最早峰峰寬的流出時間的 1/20。 2022/2/4 色譜分析 1 157 毛細管柱的種類 經典的毛細管柱為壁涂開管柱 (WCOT——Wall Coated Open Tubular Column)。 大口徑毛細管柱：一般口徑在 米，液膜厚度為 ~，負載大，可不經分流而直接進樣分析。 GLC：影響氣相速率方程的傳質阻力相，需要合理選擇載氣種類。 2022/2/4 色譜分析 1 171 3. 載氣粘度的影響 載氣粘度直接影響柱壓降，進而影響柱效。 167。 低價、毒性小、純度高。 高純氣體可為首選。 國外氫焰離子化檢測器也用氦氣。 2022/2/4 色譜分析 1 166 流動相的基本情況 流動相的物理、化學性質及其純度將直接影響到色譜系統(tǒng)的： 1) 穩(wěn)定性 2) 分離效率 3) 分離速度 4) 檢測靈敏度 2022/2/4 色譜分析 1 167 流動相的基本種類 GC—— 永久性氣體 HPLC—— 各種低沸點有機溶劑及水溶液 2022/2/4 色譜分析 1 168 167。 熔融石英毛細管柱 (FSOT—— Fused Silica Open Tubular Column) ：其表面惰性度好，能耐高溫，最主要的是有彈性，不易折斷。 曾經用示波儀或電流計型記錄器記錄 ，其滿刻度筆速 。 增加尾吹氣將改善這一狀況。 注意 在分流前要有一段混合體積，內裝硅烷化玻璃球，可保證分流后組成不失真。 分析不同濃度的混合物時 ， 峰面積必須正比于濃度 。 故： 毛細管柱上可實現(xiàn)快速分析 。 可見 ， 一根 2米長的填充柱中固定液的含量是一根20米長毛細管柱中固定液含量約 150倍 ， 故允許進樣量也在一百倍以上 。 式中 Cg、 C1的大小取決于分配系數(shù)及柱的幾何性 （ 以相比 β為代表 ） ， 但一般毛細管柱液膜薄 ， β值較大 ， 液相傳質阻力C1項不起控制作用 。 這種柱子稱為 “ 無限直徑 ” 柱 。 2022/2/4 色譜分析 1 118 1. 壁效應 采用通常進樣方式時 ， 樣品和流動相一起加到柱入口 。 2022/2/4 色譜分析 1 116 液相色譜柱的保養(yǎng) 8． 使用衛(wèi)柱 (Guard Column,亦稱預柱 )。 若空穴形成 ， 應重新裝柱 。 在水溶液流動相（ 如緩沖液 ） 中 ， 細菌容易生長 ， 可能堵塞篩板 。 使其不能到達 FID噴嘴 ?色譜柱到進樣口安裝位置不正確 . 使其不能到達進樣口 ?色譜柱到進樣口及檢測器的位置安裝正確 108 2022/2/4 色譜分析 1 109 色譜柱安裝到進樣口 評定因素 ?安裝深度 柱到針的間隙 ? 按照廠方的介紹 , ? 在進樣針頭到柱保留 12厘米的間隙 ?對分析物和樣品基質選擇適用的襯管 ?使用專用的柱切割器 ?保證所有的柱接頭及其它接口不漏 高效液相色譜法的相關情況 2022/2/4 色譜分析 1 111 液相色譜柱的保養(yǎng) 柱的穩(wěn)定性與固定相類型及使用情況有關 。 2022/2/4 色譜分析 1 96 D. 色譜柱柱體的選擇，試漏和清洗 填充色譜柱一般是玻璃柱或不銹鋼柱(3~4mm 1~4m)， 根據實驗條件 (如柱壓柱溫 )和樣品性質 (如反應性能 、 腐蝕性等 )選擇合適柱材 ， 現(xiàn)多為螺旋形 (螺旋直徑與柱內徑之比一般為 15： 1到 25： 1)。 低于此溫度 ， 固定液溶解被測組份的能力降低 ，或分離效果很差 。 2022/2/4 色譜分析 1 92 5) 固定液使用中的有關問題 A． 固定液的純度和精制 固定液是一種高沸點的有機物 ， 由于固定液的生產過程 、 包裝 、 貯存和供應等方面的問題 ， 有時會使得固定液中含有影響色譜分析的雜質 ， 即達不到要求的純度 。 2022/2/4 色譜分析 1 85 混合固定相 單一固定液不能滿足分離需要時可考慮用混合柱。 3) 判斷峰形好壞 (在某固定相上已拖尾，則在常數(shù)值大的柱上拖尾將更嚴重 )。l o gitqt??? ????苯環(huán)己烷2022/2/4 色譜分析 1 76 按極性分類的考慮 計算相對極性 按 20為一級分類 1121 0 0 1 xxqqPqq?? ??? ?????2022/2/4 色譜分析 1 77 B. 固定液特征常數(shù)概述 以不同性質的多種物質分別考察某固定液，將得到不同結果。 2022/2/4 色譜分析 1 72 1) 集團結構適應理論 在色譜分離中，有許多反常例子，出峰順序與常規(guī)分子間作用力大小有違（ 20種典型化合物在 12種固定相上 201個相對保留數(shù)據中有 66個與預測值不相符）。 2022/2/4 色譜分析 1 67 2. 非硅藻土載體 有多種類型，主要有： 1) 高分子小球 ：（如前述） 2) 氟載體：可分析腐蝕性氣體或強極性物質，但柱效不高，且裝填困難。 2022/2/4 色譜分析 1 57 Poropak 固定相結構 苯乙烯 二乙烯苯共聚體小球 2022/2/4 色譜分析 1 58 碳分子篩分離含硫化合物 2. 硫化氫 3. 氧硫化碳 4. 三氧化硫 5. 甲基硫醇 6. 二硫化碳 2022/2/4 色譜分析 1 59 上試 402有機載體 (1)水 (2)甲酸 (3)乙酸 (4)丙酸 (5)丁酸 粒度： 20/80目， 柱長： 2米 Ф4mm， 柱溫： 160℃ 載氣： H2 25ml/分 2022/2/4 色譜分析 1 60 Poropak Q 測溶劑中水 英寸 (0D)SS. Porapak Q(150200目 ) TC=220℃ , He 37ml/min, TCD 2022/2/4 色譜分析 1 61 167。 浙江省關于色譜方面的網站有： sepu . 色譜柱系統(tǒng) Chromatographic Column System 2022/2/4 色譜分析 1 47 色譜柱是色譜分析的心臟 色譜分析是分離方法，完成分離任務的色譜柱十分重要。 液 相 色 譜 雜 志 （ J, of Liquid Chromatography） , 1978年創(chuàng)刊 ,主要發(fā)表HPLC的研究報告 。239。 即相達成 “ 平衡 ” 所需的距離 H值越大 ， 則色譜峰展寬也就越嚴重 。 1N r kRrk?????? ??????? ??222 221161rkNRrk?? ???? ??????? ??? ? 32 222239。( 2 ) ( 2 )2 / 1 39。()P R MMSK t VktV? ? ???k ? 組分在固定相中的量組分在流動相中的量2022/2/4 色譜分析 1 23 基本關系式 相對保留值 39。 2022/2/4 色譜分析 1 16 二、儀器的發(fā)展 ? 1967年時全世界共有色譜儀 7萬臺 ? 1972年就發(fā)展到 20萬臺 ? 現(xiàn)在我國的儀器就有數(shù)十萬臺 ? 過去龐大的體積，到現(xiàn)在的越來越小巧 ? 過去只有進口的，現(xiàn)在國產的也很好 2022/2/4 色譜分析 1 17 二、色譜法的特點 1． 分離效率高： 可在很短的時間內分離多達二 、 三百個組分的復雜物質 ， 柱效能可達 106的理論板 。 2022/2/4 色譜分析 1 6 石油化工 ?石油產品質量監(jiān)控 ?油田開發(fā)（吸附絲技術） 2022/2/4 色譜分析 1 7 環(huán)保 ?污水檢測 ?大氣檢測 (室內和環(huán)境中空氣質量監(jiān)測、汽車內空氣質量監(jiān)測 ) 2022/2/4 色譜分析 1 8 醫(yī)藥衛(wèi)生 ?提純凈化 — 如手性色譜分離有效成分 ?藥物中間體的處理 ?食品衛(wèi)生監(jiān)測 （瘦肉精、農殘、抗生素） 2022/2/4 色譜分析 1 9 化學研究 ?樣品提純 — 如合成產品的檢驗等 ?物質性質與其配比的相關性 —— 色譜法和化學計量學方法結合 2022/2/4 色譜分析 1 10 生命科學研究 ?DNA測序 — 用 CE、 HPLC技術、 ?生物工程下游技術 — 細胞的培養(yǎng)、分離、純化和分析檢測 參見 劉國詮主編 《 生物工程下游技術 》 化學工業(yè)出版社， 1993年 2022/2/4 色譜分析 1 11 一、方法的發(fā)展 ? 1952年， Martin和 Synge首次用氣體為流動相，配合微量酸堿滴定，發(fā)明了氣相色譜法。已廣泛地用于石油化工、有機合成、生理生化、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測、刑事偵查、生產在線控制，乃至空間探索等許多領域，以解決各種分離分析課題。 2022/2/4 色譜分析 1 14 二、儀器的發(fā)展 ? 五十年代第一臺色譜儀問世 2022/2/4 色譜分析 1 15 二、儀器的發(fā)展 ? 六十年代就有數(shù)臺 5公斤重的色譜儀隨阿波羅飛船同登月球，自動取樣分析， ? 1970年更有一臺 100克重的色譜儀飛上了火星。( 1 )R M S P MV V V K V k? ? ? ?39。39。4 39。 4. 所有組分濃度以起始塔板中的濃度為基準 2022/2/4 色譜分析 1 30 色譜理論 —— 塔板理論 由塔板理論可得到：在色譜過程中色譜峰是要展寬的 ， 展寬的寬度平方值和理論板高 H成正比 。39。 Jouynal of Chromatography Library, 不定期出版 。 2022/2/4 色譜分析 1 45 色譜網站 已有很多國際網站 ， 包括美國化學會的網站 ，可搜索后查取相關文獻 。 高分子多孔小球 (Porapak, Chropmosorb等 ): 既是吸附劑又是載體，效果好。此法可拓展應用于特殊基團的引入 釉化 ：目的是堵塞載體表面的微孔和改變表面性質 加脫活劑 ：用表面活性劑飽和 (鍵合 )載體表面的吸附中心。其實是 “ 超分子化學 ” 理論的不同表述而已。39。 2) 選擇替代品 (常數(shù)基本相同的便可替代 )。 引入特殊基團可提高柱選擇性 (類似于具有選擇作用的螯合樹脂 )。 被分離樣品為極性物質（或易被極化物質）和非極性物質的混合物，一般也選用極性固定液 2022/2/4 色譜分析 1 90 4) 固定液選用原則 被分離的樣品若為形成氫鍵的物質，一般選擇極性或氫鍵型固定液 被分離樣品為具有酸性和堿性（吡啶類）的極性物質，會產生嚴重拖尾，一般選用極性固定液，并加酸性或堿性減尾劑 2022/2/4 色譜分析 1 91 4) 固定液選用原則 被分離樣品為異構體，一般選用強極性或有特殊作用力的固定液 被分離樣品為不同族的混合物，視具體情況而定，或用單一固定液，或用混合物固定液。 有的固定液使用溫度有一個 “ 下限 ” ， 即最低使用溫度 。 老化操作通常在較低的載氣流速 、 略高于操作柱溫 ， 但又不超地固定液的最高使用溫度的條件下 ， 加熱十幾個小時 ， 然后接入正常氣路 ， 直至記錄器上的基線平直 ， 就可進行分析 。 2022/2/4 色譜分析 1 99 柱故障的診斷與排除 (1. 多出峰 ) 有兩種類型的附加峰 1. 即使不進樣也會出現(xiàn)的峰 (鬼峰 ) ， 并且在色譜分析過程中也會出現(xiàn)在真實的峰之中 2. 由樣品產生的附加峰 2022/2/4 色譜分析 1 100 鬼峰 ? 柱頭污染 ? 烘焙色譜柱，然后做空運行（無樣品） ? 進樣墊流失 ?使用高質量的產品 ? 進樣口污染 ? 殘留在進樣口或襯管中的物質 ? 載氣不純 ?使用高純度的載氣及高質量的氣體凈化器，并定期更換 ? 載氣中雜質與固定相發(fā)生反應 ? 若使用分離 /無分流進樣口 ?進樣口底部的密封墊可能會與樣品反應 ?使用精制進口密封墊 2022/2/4 色譜分析 1 101 樣品產生的附加峰 ? 即使進純樣，也會出現(xiàn)附加峰 ? 做一次空運行 ? 如果這些峰還存在，不是由樣品產生的，按照前面介紹的方法檢查 ?進樣口溫度過熱，可以導致樣品組分的降解 ?每次將進樣口降低 20℃ ，