【正文】 整個實(shí)驗過程中，孔 老師 和戴玲老師 在實(shí)驗方案的設(shè)計和 解決實(shí)驗 各方面問題 給予了很大幫助 ， 及時對我們的問題進(jìn)行講解和指導(dǎo)，同時不斷跟進(jìn)我們的實(shí)驗進(jìn)度， 付出了很多的時間與精力。在此修正條件下，實(shí)際測得提取率為 ，回歸模型預(yù)測提取率理論值可達(dá) 、實(shí)際測定值比理論預(yù)測值低 %。表 3中BC 的 P 值 = 可驗證。當(dāng)響應(yīng)面分析圖為山谷形曲面，有極小值存在；當(dāng)為山丘曲面，有極大值存在；當(dāng)為馬鞍形曲面，無極值存在。由圖可知，凍融次數(shù)在 3次的時候，多糖得率最高，之后增加凍融次數(shù)反而抑制多糖的提取，實(shí)驗中為保證多糖結(jié)構(gòu)不被破壞，應(yīng)選凍融次數(shù)為 2次。 圖 2 料液比對多糖得率的影響 of liquid/solid ratio on yield of polysaccharides 影響 在 提取 溫度為 60℃下，以 30mL/g 的料液比進(jìn)行提取，時間分別為 5 和 6h，并以 95%的乙醇沉淀。以 A、 B、 C 為自變量， 以 2次試驗所得多糖提取率的平均值為響應(yīng)值 (R1)。 、試劑和儀器 銅綠微囊藻，在巢湖采集，經(jīng)在安徽大學(xué)環(huán)境科學(xué)學(xué)院冷凍凍融后，成為可利用的藻漿。 響應(yīng)曲面法的研究進(jìn)展 響應(yīng)曲面法 ( response surface method， RSM) 近年來被廣泛應(yīng)用于眾多過程的優(yōu)化控制，它 是一種優(yōu)化生物過程的統(tǒng)計學(xué) 試驗設(shè)計 ，建立 連續(xù)變量 曲面模型對影響生物過程的 因子 及其 交互作用 進(jìn)行評價，確定最佳水平范圍。也有研究顯 示銅綠微囊藻可以產(chǎn)生 2,6二叔丁基對甲酚 ，這種物質(zhì)主要在 食品添加劑 中被用作為 抗氧化劑 ，在工業(yè)上也具有許多用途 。 微囊藻屬 的特征為小型的細(xì)胞，細(xì)胞大小僅有 3 至 8 微米，且其外沒有鞘包覆 。 方法 ：在提取溫度、 料液 比、提取時間、凍融次數(shù)、溶菌酶和 EDTA6 個單因素實(shí)驗的基礎(chǔ)上，選擇提取溫度、提取時間、料液比 3 個因素3 水平的 Box Behnken 中心組合研究 , 并運(yùn)用 Design Expert 軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 water soluble polysaccharide。 微囊藻形成藻華時淡水溶氧量的顯著降低會導(dǎo)致水中動物的死亡 ，還能 產(chǎn)生神經(jīng)毒 素脂多糖 與 肝毒 素微囊藻素 。其初級和高級都直接決定多糖的生物活性。如何有效地利用微囊藻資源，使其變廢為寶是必須正視的問題，銅綠微囊藻多糖的開發(fā)和利用早已成為資源開發(fā)的熱點(diǎn)。試驗因素及水平編碼如表 1所示。 5 圖 1 提取溫度對多糖得率的影響 Effects of temperature on polysaccharides extraction rate 水料比對多糖得率的影響 在 提取 溫度為 60 ℃下，分別以 50mL /g 的料液比提取 4h，并以 95%的乙醇沉淀。然而，加入溶菌酶的同時，每組加入同等量的 EDTA，效果就不一樣，多糖提取率總體都因為 EDTA的加入而升高，如紅色趨勢線所示，隨著溶菌酶量變多，多糖提取率先增加后慢慢減少，并在溶 菌酶量為 達(dá)到最大值。此外，提取時間和提取溫度的交互作用、提取溫度、提取時間、液料比的二次 項也較為顯著 (P ＜ )。 二維圖為山谷曲面，有極小值存在，通過響應(yīng)面三維圖，反映了 提取溫度與液料比（ AC） 的交互作用對響應(yīng)值的影響，從而確定最佳工藝參數(shù)范圍。 12 通過回歸模型的預(yù)測，從多糖最佳得量考慮，其它條件不變，得熱水提取藍(lán)藻多糖的最佳工藝條件 :提取溫度為 80℃、液料比為 1： 提取時間為 、預(yù)測響應(yīng)值為 。在此條件下預(yù)期的多糖得率是 ，實(shí)際得率是 。 最后，我要感謝各位論文評閱老師和答辯委員會的全體老師們，感謝你們在百忙之中抽出時間來評閱我的論文。在熱水法提取藍(lán)藻多糖的過程中，提取溫度是影響多糖提取率的最關(guān)鍵因素，各提取因素對熱水提取微囊藻多糖得率的影響順序為：提取溫度＞料液比＞提取時間。由此可以推斷出，在料液比和酒精沉淀濃度一定的條件下，提取時間和提取溫度的 有明顯交互作用，這與表 3中的 AC的 P小于 。比較響應(yīng)面三維圖可知，所選范圍內(nèi)是 10 否存在極值；等高線的形狀反映出交互作用的大小，圓形表示兩因素的交互作用不顯著，橢圓形則表示兩因素交互作用顯著。 RSquared擬合度 = 表三為響應(yīng)曲面二次方差回歸模型分析，因為 R2=，表明該模型與實(shí)際擬合較好，自變量 (提取溫度、提取時間和液料比 )與響應(yīng)值 (提取量 )之間線性關(guān)系顯著。單因素試驗的結(jié)果顯示，提取時間應(yīng)在 45h 左右。 結(jié)果如圖 1， 由圖可知，隨著溫度的升高，多糖的提取率逐漸增加，且增幅明顯，當(dāng)溫度增 到 70℃ 左右后增幅變小， 80℃時多糖的提取率最高，之后隨著溫度的增加，多糖提取率逐漸減小。 分別以不同的溫度、水料比、提取時間，凍融次數(shù)及溶菌酶濃度做單因素試驗 , 考察各單因素對多糖得率的影響。 響應(yīng)曲面設(shè)計參考步驟如下： 1． 確定實(shí)驗的指標(biāo)（變量）； 2． 確定因素水平編碼，參照有關(guān)的正交表進(jìn)行實(shí)驗編號； 3． 進(jìn)行實(shí)驗； 4． 計算分析，得回歸方程，并進(jìn)行顯著性檢驗；5．作圖，分析最終結(jié)果。 銅綠微囊藻多糖是一種由單糖組成的天然高分子化合物，其 不同單糖殘基、 主鏈 連接 方 2 式 和 側(cè)鏈基團(tuán) ,形成 了 鏈內(nèi)和鏈間氫鍵的 不同 結(jié)構(gòu) 層次，從而形成了 不同的構(gòu)象、不 同分子量和功能的復(fù)雜的多糖結(jié)構(gòu) 。 群體呈球形團(tuán)塊狀或不規(guī) 則 穿孔的網(wǎng)狀團(tuán)塊，橄欖綠色或污綠色，幼時球形、橢圓形、中實(shí)；成熟后為中空地 囊 狀體，隨著群體地不斷增長，膠被某些區(qū)域破裂或穿孔，使群體成窗格狀的 囊 狀體或不規(guī)則裂片狀的網(wǎng)狀體；群體最后破裂成不規(guī)則的、大小不一的裂片；此裂片又可成為一個窗格狀群體。 結(jié)論： 所得最佳提取條件 ：提取溫度 53℃，料液比 1:51，提取時間 ，在此條件下，預(yù)期的粗多糖得率為 %，實(shí)際得率為 %。 結(jié)果 ：試驗結(jié)果表明 ，各提取因素對銅綠 微囊藻多糖得率的影響順序為：提取溫度＞料液比＞提取時間＞。囊泡提供微囊藻足夠的浮力，使其停留在 有足夠光線和 二氧化碳提供生長的水層。除此之外微囊藻多糖還能抗氧化、增強(qiáng)免疫功能，抗凝血降血脂，抗突變等多種功效，而決定其生物活性和功能就是它復(fù)雜的構(gòu)效關(guān)系、溶解度、粘度以及其物理化學(xué)性質(zhì)，具有深遠(yuǎn)的研究意義。本試驗采用熱水法提取銅綠微囊藻中的多糖，選定提取溫度、料液比、提取時間 3個主要因素 3水平進(jìn)行中心組合試驗，通過 Design Expert 軟件進(jìn)行響應(yīng)面分析得出銅綠微囊藻多糖水提法提取的最佳條件。 儀器設(shè)備 （ 1）電子天平 ：上海越平科學(xué)儀器有限公司 （ 3） DKS24型電熱恒溫水浴鍋：上海精宏實(shí)驗設(shè)備有限公司 （ 4） TDL5M臺式大容量冷凍離心機(jī)：長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司