【正文】 最佳參數(shù)及各參數(shù)之間的相互作用。增大液料比雖有利于多糖提取，但會增大后續(xù)濃縮的時間與能耗，所以從成本考慮料液比應在 3040mL /g 左右。本實驗旨在研究銅綠微囊藻多糖的提取優(yōu)化條件，為微囊藻多糖的結構、理化性質研究、分離純化奠定基礎，也為生物活性研究和藥理藥效研究作鋪墊，充分利用這一寶貴資源為資源整合和利用做出貢獻。 在理想的環(huán)境下銅綠微囊藻可以持續(xù)產(chǎn)生對肝有害的微囊藻素 ，其為 飲用水污染 的來源之一，且這種毒素對熱的抗性高，甚至以 活性碳 吸附、加入 氯 或 臭氧 消毒也無法完全消除 ， 對經(jīng)濟的影響包括為了減輕毒素需要在凈水上花費的額外成本，和發(fā)生有害藻華的河湖需暫時封閉對當?shù)芈糜螛I(yè)造成傷害。 安徽大學 本科畢業(yè)論文 題 目： 響應曲面法優(yōu)化藍藻多糖提取工藝研究 學生姓名： 周維清 學號： D31014005 院（系）： 生命科學學院 專業(yè)： 生物 工程 入學時間： 20xx 年 09 月 導師姓名： 孔小衛(wèi) 、戴玲 職稱 /學位： 副教授 導師所在單位： 安徽大學生命科學學院 I 響應曲面法優(yōu)化藍藻多糖提取工藝的研究 作者：周維清 安徽大學生命科學學院 20xx 級生物工程專業(yè)， 230601 指導教師：戴玲 孔小衛(wèi) 安 徽大學生命科學學院， 230601 摘 要 目的： 利用響應面分析法研究銅綠微囊藻中水溶性多糖的提取工藝。微囊藻素是一些環(huán)狀的 非核糖體多肽 ，由 脫氫丙氨酸 衍生物和 ADDA氨基酸 等 非蛋白氨基酸 組成，可強烈抑制第一型與第二型蛋白質 磷酸酶 ，對動植物都有毒性，對 肝臟 的毒性很強，也和 全脂炎 有關。銅綠微囊藻無論在胞內(nèi)還 是胞外都能分離得到富含糖醛酸和硫酸基團的酸性多糖，展現(xiàn)出銅綠微囊藻作為藍藻酸性多糖提取的豐富資源的可貴前景。 結果見圖 2， 由圖 2 可知，多糖提取率隨液料比的增大而呈上升趨勢，這是由于加液量越大則提取出來的多糖越容易溶解，損失就越少，但料液比到達 30ml/g 左右時多糖提取率增幅不大，提取率緩慢增加。由實驗數(shù)據(jù)得各因素對多糖提取率的影響次序：提取溫度一次項＞提取溫度和液料比交互項＞提取溫度二次項＞提取時間二次項＞料液比二次項＞提取溫度和提取時間交互項。為檢驗 RSM 的可靠性，采用上述最優(yōu)條件進行驗證試驗，同時考慮多糖結構的完好性，將提取工藝參數(shù)修正，修正方式如下： 對上述回歸方程取一階偏導數(shù)等于零，整理可得如下三式： +— － =0 (1) — － － =0 (2) － － +=0 (3) 式 (1)、 (2)、 (3)聯(lián)立方程組，解得 A= ， B=， C=， 代入前述的變換公式得到提取溫度 T=℃ ， 液料比 z=，提取時間 t=，即該銅綠微囊藻多糖提取工藝最佳工藝條件為采用水為溶劑、提取溫度 ℃ 、提取時間 、 料液比 1:。此外，還要感謝 同實驗室的張弛、紀啟芳、汪洋等同學在實驗過程中對我的 關心和幫助，對我的實驗操作提出了很多寶貴的意見。 圖 8 提取溫度與提取時間（ AB）對多糖提取率影響的響應面圖 Response surface and contour plots showing the interactive effects of temperature and time in the extraction on yield of polysaccharides 圖 8中當 C＝ 50（料液比為 1:50），乙醇濃度為 95%時，當提取時間為 4h時，隨著溫度的升高，粗多糖得率先快速增加后增幅減少，說明提取溫度對多糖提取有重要的作用；提取溫度為 60℃時，隨提取時間的延長，多糖得率先上升，后減少，且在 4小時左右達到最大。 8 表 2 Box Behnken 試驗設計中水提藍藻多糖得量實測值與預測值 Table2. the expected and actural yield of Microcystis aeruginosa’polysaccharide and in the design of BoxBehnken experiment 實驗編號 A提取溫度/℃ B提取時間/ h C料液比/ml/g 多糖得率實際值 /g 多糖得率預測值 /g 1 0 1 1 2 0 1 1 3 1 1 1 4 1 1 0 5 0 0 0 6 0 1 1 7 0 0 0 1,06 8 1 0 1 9 0 1 1 10 1 1 0 11 0 0 0 12 0 0 0 13 1 1 0 14 1 0 1 15 1 0 1 16 1 0 1 17 0 0 0 采用 Design Expert 程序對所得數(shù)據(jù)進行回歸分析， 3個因素經(jīng)過擬合得到多糖提取量( R1) 回歸方程如下所示： R1=++*A+*B **A**A*C *B*C+**B2+*C2 9 表 3響應曲面二次模型方差分析 ANOVA for Response Surface Quadratic Model Analysis of variance table [Partial sum of squares Type III] 資源項 平方和 自由度 均方差 F值 Prob F Source Sum of Squares df Mean Squres Value pvalue 顯著性 Modle 9 * AA 1 ** BB 1 CC 1 AB 1 * AC 1 ** BC 1 A2 1 * B2 1 * C2 1 * 殘差 Residual 7 失擬項 Lack of Fit 3 純誤差 Pure Error 4 Cor Total 16 注： * ： 差異顯著， P ＜ 0 . 0 5 ； * * ： 差異極顯著， P ＜ 0 . 0 1 。 4 結果與分析 單因素提取對水溶性多糖得率的影響 提取溫度對多糖得率的影響 以 30 mL /g 的料液比，分別于 5