【正文】 出峰 順 序 (RT) 峰名稱 鹽 酸四 環(huán) 素 4差向異金霉素（ EICTC） 去甲基金霉素 4差向金霉素 鹽 酸金霉素 乙 酰 2脫氨甲 酰 金霉素（ ADCTC） 2脫水四 環(huán) 素l l (2)多西環(huán)素分離圖 出峰順序 (Rt) 峰名稱 4－差向四環(huán)素 土霉素 差向脫水四環(huán)素 鹽酸四環(huán)素 鹽酸金霉素 脫水四環(huán)素 圖 .L 1EDTA鈉鹽 三乙胺（ 100： 10： 1）用冰醋酸調(diào)節(jié) pH值至 ]－乙腈 (85： 15) 鹽酸美他環(huán)素醋酸鹽緩沖液 [鹽酸土霉素等l 由于 2023年版藥典測(cè)定四環(huán)素類的流動(dòng)相中的草酸銨容易結(jié)晶析出造成系統(tǒng)堵塞，加之流動(dòng)相中的二甲基甲酰胺容易吸附在管路和檢測(cè)池中，影響后續(xù)品種的檢測(cè)，l 限度為：供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，土霉素、 4差向四環(huán)素、鹽酸金霉素、脫水四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素按校正后的峰面積計(jì)算（分別乘以校正因子 l l 限度是參考 。 如 :鹽酸多西環(huán)素在甲醇溶液中紫外特征較強(qiáng) ,故增加了紫外鑒別： 20ug/ml甲醇溶液在269nm和 354nm處有最大吸收，在 234nm和296nm處有最小吸收。 品種收載情況 ： 表 品種收載情況原料 制 劑 (12)注射用 眼膏 膠囊 軟 膏 片鹽 酸土霉素 √鹽 酸四 環(huán) 素 √ √ √鹽 酸多西 環(huán) 素 √ √鹽 酸米 諾環(huán)素√ √鹽 酸金霉素 √ √鹽 酸美他 環(huán) 素 √ √6 1 1 4 1 5l l 產(chǎn)生脫水四環(huán)類降解產(chǎn)物，脫水產(chǎn)物的共軛雙鍵的數(shù)目增多，因此色澤加深。土霉素由于 5位上的羥基和 4位上的二甲胺基易形成氫鍵，因而較穩(wěn)定，不易發(fā)生差向異構(gòu)化。l （ 2）阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制劑共 4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定采用柱前衍生化 HPLCUV方法。l 除部分品種仍采用原滴定方法，本版藥典首次采用 HPLCELSD方法對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。由于其色譜響應(yīng)值 (峰面積的對(duì)數(shù)值 )與對(duì)應(yīng)的質(zhì)量（溶液濃度的對(duì)數(shù)值）呈線性關(guān)系，因此用回歸方程計(jì)算含量。l ） 80%120% ） 檢查羥苯乙酯 滲透壓摩爾濃度 C）。取本品 5份，各 ，分別加微粒檢查用水 5ml使溶解，依法檢查（附錄 IX、不溶性微粒、 (3)無(wú)菌。（ 2） HPLCl l 以上（ 1）、（ 2）兩項(xiàng)可選做一項(xiàng)。l 例 個(gè)別品種也有用 IR作為鑒別反應(yīng)，l 氨基糖苷類抗生素的特點(diǎn)l 羅紅霉素系列完善系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)，增加主峰與紅霉素的分離度，并明確與前相鄰雜質(zhì)峰（相對(duì)保留時(shí)間為 ）和后相鄰雜質(zhì)峰（相對(duì)保留時(shí)間為 ）位置；l l l 紅霉素 C: 不得大于 5% ,用自身對(duì)照法計(jì)算。組分測(cè)定涉及品種共計(jì) 17個(gè)，較 2023年版增加 8個(gè)品種，l 分別為 :l 麥白霉素膠囊、l 乳糖酸紅霉素、 注射用乳糖酸紅霉素、l 硬脂酸紅霉素、 硬脂酸紅霉素片、l 硬脂酸紅霉素膠囊、硬脂酸紅霉素顆粒、l 紅霉素腸溶膠囊，l l 首次對(duì)紅霉素及其衍生物組分檢測(cè)方法進(jìn)行了統(tǒng)一，在其鹽類及制劑中均增加了紅霉素 A組分的檢查。l 如：頭孢哌酮鈉l 雜質(zhì) A： (5aR,6R)6[[(2R)2[[(4ethyl2,3dioxopiperazin1yl)carbonyl]amino] 2(4hydroxyphenyl)acetyl]amino]5a,6dihydro3H,7Hazeto[2,1b]furo[3,4d][1,3]thiazine1,7(4H)dionel 中文名： (5aR,6R)6[[(2R)2[[(4乙基 2,3二氧代哌嗪 1基 )甲?；?]氨基 ]2(4羥基苯基 )乙酰基 ]氨基 ] 5a,6二氫 3H,7H氮雜環(huán)丁烷并 [2,1b]呋喃并 [3,4d][1,3]噻嗪 1,7(4H)二酮l 如：頭孢唑林鈉l 雜質(zhì) A： R=H: (6R,7R)7amino3[[(5methyl1,3,4thiadiazol2yl)sulphanyl] methyl]8oxo5thia1azabicyclo[]oct2ene2carboxylic acid 中文名： (6R,7R)7氨基 3[[(5甲基 1,3,4噻二唑 2基 )硫代 ]甲基 ]8氧代 5硫代 1氮雜雙環(huán) []辛 2烯 2羧酸l 雜質(zhì) E： 5methyl1,3,4thiadiazol2thiol 中文名： 5甲基 1,3,4噻二唑 2甲硫醇l 2．大環(huán)內(nèi)酯類抗生素l 該類抗生素可分為十四元環(huán)、十五元環(huán)和十六元環(huán)三類。l 測(cè)定法 取本品約 20mg，精密稱定，置 100ml棕色量瓶中，加上述 2ml溶解后，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取 20μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取頭孢地尼對(duì)照品適量，同法測(cè)定。用于制備系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用分離度溶液 ， 測(cè)定分離度，l 結(jié)果按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算 ,即得。m以上的微粒不得過(guò) 6000粒，含25181。溶 劑 RART值甲醇丙 酮異丙醇乙 腈二 氯 甲 烷正丙醇丁 酮乙酸乙 酯四 氫呋 喃四 氯 化碳環(huán) 己 烷苯1,2二 氯 乙 烷乙酸異丙 酯甲基異丁基 酮二氧六 環(huán)吡 啶甲苯乙酸丁 酯l l 對(duì)生產(chǎn)工藝過(guò)程中使用 2乙基己酸的原料，增加 2乙基己酸檢查，采用氣相色譜法測(cè)定。進(jìn)樣口溫度為 200℃ ，檢測(cè)器溫度為 250℃ ，頂空瓶平衡溫度為 70℃ ，平衡時(shí)間為 30分鐘，取系統(tǒng)適用性溶液頂空進(jìn)樣，按正丙醇（內(nèi)標(biāo)）、丁酮、乙酸乙酯的順序出峰，各峰間的分離度均應(yīng)符合要求。 ％頭孢唑 林 鈉 比 對(duì)樣 品（上海新先 鋒 ） 均 值 ： % (n=2)　均 值 ： % (n=5)　177。% 頭孢唑 林 鈉 均 值 ： F=*103 (n=11)均 值 ： F=*103 (n=33)177。l 由于高分子聚合物的對(duì)照品不易獲得，樣品中的高聚物量較少，故不能直接用樣品與聚合物對(duì)照品配制分離度試驗(yàn)用溶液，l 根據(jù)本方法的分離原理，擬加入一定量的藍(lán)色葡聚糖 2023，制成含一定濃度藍(lán)色葡聚糖2023的樣品溶液來(lái)進(jìn)行分離度試驗(yàn)。l 如：頭孢他啶中吡啶與頭孢拉定中頭孢氨芐均采用雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法。l 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果計(jì)算可分為三種方法：l (1). 不加校正因子的自身對(duì)照法；l (2). 加校正因子的自身對(duì)照法；l (3). 已知雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法 。l l 有關(guān)物質(zhì)檢查均采用 HPLC法，l 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測(cè)。l 頭孢菌素品種有關(guān)物質(zhì)檢查均采用 HPLC法，除頭孢西丁鈉以苯基鍵合硅膠為填充劑外；其他均以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測(cè)。l 鑒別 l 原料藥與注射用粉針的鑒別均采用色譜法HPLC，光譜法 IR以及鉀、鈉離子火焰反應(yīng)，也有多個(gè)品種采用 HPLC與 TLC二法并列。 制劑：l 2023年版藥典方法色譜柱填充劑均為 sephadex G10。l 10. 增加有機(jī)溶媒檢查的品種較多。l 6. 四環(huán)素類統(tǒng)一了該品種有關(guān)物質(zhì)與含量測(cè)定的HPLC法色譜條件，與 2023年版方法比較有較大改進(jìn)。l 有關(guān)物質(zhì)采用自身對(duì)照時(shí)，對(duì)本身純度低于 85%的品種，提出對(duì)自身對(duì)照溶液主峰進(jìn)行校正。l 其他如 :l 氯霉素類，大環(huán)內(nèi)酯類，氨基糖苷類 ,利福平等均增修訂了有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。 同時(shí)又用該方法測(cè)定硫酸鹽（ SO4）的含量。 l 本版藥典使用 HPCE方法的品種有 2個(gè)，其中一個(gè)為鹽酸頭孢吡肟中 N甲基吡咯烷的含量測(cè)定。便于操作，保證了方法的有效性。l 本版藥典提出用 HPLC在主峰洗脫后梯度洗脫的方法，將 EP用 TLC、 HPLC兩種方法檢測(cè)的雜質(zhì)在同一HPLC系統(tǒng)中檢測(cè) .l 同時(shí)根據(jù)各雜質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)的不同，用雙波長(zhǎng)檢測(cè)， l 對(duì)照品外標(biāo)法與加校正因子與不加校正因子自身對(duì)照法同時(shí)并列。有利于同類品種間質(zhì)量的比較。使分析周期縮短至 4560分鐘，為原來(lái)周期的 1/3。 l ，其化學(xué)命名均在標(biāo)準(zhǔn)最后列出，便于與國(guó)外藥典的雜質(zhì)比較。 4.標(biāo)準(zhǔn)中大部分采用與標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行比濁和比色的目測(cè)法。表 l 如：頭孢克洛規(guī)定 : l 頭孢克洛峰的保留時(shí)間約為 23分鐘，頭孢克洛峰與頭孢克洛 δ3 異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)不小于 ，頭孢克洛峰的拖尾因子應(yīng)小于 。l 2023年版藥典已有２１個(gè)品種收載高分子聚合物檢查，本版藥典增加到 42 個(gè)品種。l 作為常規(guī)檢驗(yàn)方法有必要進(jìn)行改進(jìn)，考慮到原藥典收載的方法在原理，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以及方法驗(yàn)證專屬性、重現(xiàn)性、準(zhǔn)確性等方面均符合要求，而僅僅是分析周期過(guò)長(zhǎng) . l Kv=0也降低。l 因此本版藥典凝膠色譜高分子聚合物項(xiàng)下僅將色譜柱修訂為內(nèi)徑 ～ ,長(zhǎng)為 30～ 40cm的玻璃柱。高分子聚合物 測(cè) 定 結(jié) 果的比 較 品種 批號(hào)2023年版 藥 典方法高聚物含量（ %）改 進(jìn) 后的方法高聚物含量（ %） 相 對(duì) 偏差阿莫西林囊 0507501（ 聯(lián) 邦制 藥 ）均 值 ： % (n=2)　均 值 ： % (n=4)　177。l 由于生產(chǎn)工藝的不同，各廠使用的有機(jī)溶媒也不同，同一品種中可能有幾十種的溶媒，為方便操作、經(jīng)試驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定各溶劑的相對(duì)調(diào)整保留時(shí)間（ RART），l 檢查時(shí)可先做供試品，從供試品中檢出的溶媒的 RART與規(guī)定的 RART比較，確定為何種溶媒時(shí)，再進(jìn)行對(duì)照品測(cè)定，可減少工作量，大大降低檢驗(yàn)成本，提高工作效率。分別精密稱取各溶劑適量，用內(nèi)標(biāo)溶液定量稀釋制成規(guī)定濃度的溶液，作為混合對(duì)照品溶液，混合對(duì)照品溶液中各溶劑的濃度分別為每 1ml中含甲醇 600 ug、丙酮 1mg、異丙醇 1mg、乙腈 82ug、二氯甲烷 120ug、丁酮 1mg、乙酸乙酯 1mg，四氫呋喃 150 ug、四氯化碳 1 ug、環(huán)己烷 760 ug、苯 1 ug、 1,2二氯乙烷 1 ug、乙酸異丙酯 1mg、二氧六環(huán) 76 ug、甲基異丁基酮 1mg、吡啶 40 ug、甲苯 178 ug。l 由于不溶性微粒光阻法測(cè)定結(jié)果僅與一定濃度范圍內(nèi)的樣品溶液成正比關(guān)系，因此在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定不溶性微粒檢查供試品溶液濃度。l 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，反相色譜，紫外檢測(cè)。l 如：頭孢地尼l 【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測(cè)定。 l 測(cè)定法 取本品約 50mg，精密稱定，置 50ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 20μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氨曲南對(duì)照品適量，同法測(cè)定。如圖 。 紅 霉素Ａ峰與 紅 霉素 烯 醇 醚 峰的分離度 應(yīng) 大于 ， 紅 霉素A的拖尾因子 應(yīng) 小于 。4. 檢測(cè) 波 長(zhǎng) 210nm 統(tǒng) 適用性增加主峰與 紅 霉素的分離度，并明確前相 鄰雜質(zhì) 峰（相 對(duì) 保留 時(shí)間為 ）和后相 鄰雜質(zhì) 峰（相 對(duì) 保留 時(shí)間為 ）位置琥乙 紅 霉素 方法（ TLC法）l 溶出度l 除乳糖酸紅霉素是供注射用外，其他均為口服制劑（片、膠囊、干混懸劑、顆粒）。見(jiàn)表。表 含量 測(cè) 定 品種 HPLC 微生物法( 管碟法 或 濁 度法 ) 48 10 38l 氨基糖苷類抗生素 l 本類抗生素有效成分為游離鹼，一般均以硫酸鹽形式存在作為藥物，由于都含有易溶于水的氨基糖堿性苷，故均能以分子中的堿性基團(tuán)（ NH2基）與無(wú)機(jī)酸結(jié)合成可溶于水、但幾乎不溶于有機(jī)溶劑的鹽類。含量測(cè)定或組分采用 HPLCELSD的方法時(shí)，也可用 HPLC作為鑒別，l （ 2） HPLCl l l 、檢查l H），應(yīng)符合規(guī)定。硫酸新霉素 l 方法為 l l 2023年版中測(cè)定硫酸鹽含量采用的是容量法與傳統(tǒng)的重量法測(cè)定相比，有其先進(jìn)性，但滴定終點(diǎn)突躍不明顯 .l 是兩性化合物。l 四環(huán)類抗生素的游離堿，在水中的溶解度很小，當(dāng) pH值低于 4或高于 8時(shí)，可以得到高濃度的四環(huán)類化合物的水溶液。(2)l 可能是多西環(huán)素在溶液或放置過(guò)