【正文】 加入內(nèi)標(biāo)溶液 ，密封瓶口，作為供試品溶液。l 測(cè)定法 首先取甲烷氣體頂空進(jìn)樣，記錄甲烷的保留時(shí)間作為色譜系統(tǒng)的死時(shí)間（ t0）再取供試品溶液頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中如有色譜峰，按下式計(jì)算各色譜峰的保留時(shí)間（ tR）相對(duì)于正丙醇保留時(shí)間（ tR（正丙醇））的相對(duì)調(diào)整保留時(shí)間（ RART）；l 將得到的 RART值與下表的 RART值比較，確定供試品中的殘留溶劑種類(lèi)；再制備相應(yīng)的對(duì)照品溶液，取對(duì)照品溶液頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積比值計(jì)算，甲基異丁基酮不得過(guò) %；、其他均應(yīng)符合規(guī)定。l 如 :注射用頭孢他啶，因含有 10%的碳酸鈉對(duì)水分測(cè)定有干擾，改為 60℃ 真空減壓干燥，l 頭孢地尼膠囊也改為 60℃ 真空減壓干燥。考慮臨床使用的安全性，在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定：l 規(guī)格 ，每 1g樣品中，含 10181。m以上的微粒不得過(guò) 600粒。利用該類(lèi)藥物遇光照或加熱能產(chǎn)生反式異構(gòu)體或 E異構(gòu)體等有關(guān)物質(zhì)。取拉氧頭孢對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每 1ml中約含 ， 取上述溶液適量，在 80℃ 水浴中加熱 30分鐘，冷卻，取 10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，拉氧頭孢 R異構(gòu)體、拉氧頭孢 S異構(gòu)體依次流出；拉氧頭孢 R異構(gòu)體和拉氧頭孢 S異構(gòu)體的分離度應(yīng)不小于，兩主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)符合要求 。 取頭孢地尼對(duì)照品約 20mg，置 100ml量瓶中，加上述 酸鹽緩沖液 2ml溶解后，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，在水浴中加熱不少于 30分鐘，放冷，得每 1ml中約含 （其中相對(duì)主峰保留時(shí)間 2%），l 取 20μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，頭孢地尼峰保留時(shí)間約為 8分鐘， E異構(gòu)體峰保留時(shí)間約為頭孢地尼峰保留時(shí)間的 ，理論板數(shù)按頭孢地尼峰計(jì)算不低于 2023，頭孢地尼峰與其相對(duì)保留時(shí)間 度均應(yīng)不小于 。l 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 液（用 1mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié) pH值至 177。l 標(biāo)準(zhǔn)中涉及的已知雜質(zhì)，在標(biāo)準(zhǔn)最后列出其化學(xué)命名，便于與國(guó)外藥典標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)比較。l 紅霉素腸溶膠囊 訂項(xiàng) 目概況 見(jiàn) 表 表 2023年版 藥 典大 環(huán) 內(nèi) 酯類(lèi) 品種增修 訂項(xiàng) 目 項(xiàng)目 修訂 增訂 刪去結(jié) 構(gòu)式 1含量限度 5性狀 3鑒別 3（ HPLC 1項(xiàng) 和 IR 2 項(xiàng) ）23(HPLC 11項(xiàng) ， 顏 色反應(yīng) 和 TLC各 6項(xiàng) ) 3（IR）釋 放度 /溶出度 13 1組分與有關(guān)物質(zhì) 26 3殘留溶 劑 1干燥失重 2可 見(jiàn) 異物和不溶性微粒 1含量 37 其中 濁 度法增 訂 21項(xiàng) l 本類(lèi)抗生素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要點(diǎn)l 鑒別 l 標(biāo)準(zhǔn)中凡用 HPLC法測(cè)定組分含量以及有關(guān)物質(zhì)的品種均采用 HPLC法作為鑒別，并增加部分品種的 TLC法鑒別，大部分品種 HPLC法和 TLC法并列，可任選一項(xiàng)；l 原料藥也有用 IR作為鑒別，如羅紅霉素；l 有紫外吸收特性的品種也可用 UV法作為鑒別，如麥白霉素、交沙霉素；l 部分品種采用顯色反應(yīng)。紅 霉素紅 霉素 腸 溶片紅 霉素 腸 溶膠囊紅 霉素 A紅 霉素 B紅 霉素 C修 訂 HPLC法紅 霉素 A： 對(duì) 照品外 標(biāo)法 計(jì) 算；紅 霉素 B：加校正因子自身 對(duì) 照 計(jì) 算；紅 霉素 C：自身 對(duì) 照法計(jì) 算。l 測(cè)定方法 :HPLC，色譜柱 C1檢測(cè)波長(zhǎng) 232nml 紅霉素、乳糖酸紅霉素、硬脂酸紅霉素l 紅霉素、乳糖酸紅霉素、硬脂酸紅霉素主要組分均為紅霉素 A、 B、 C .l 測(cè)定方法： HPLC法，色譜柱 C18 , l 檢測(cè)波長(zhǎng) 215 nm；l l 3個(gè)品種規(guī)定限度相同：l 紅霉素 A: 以無(wú)水物計(jì)不得少于 %，用對(duì)照品外標(biāo)法計(jì)算 .l 紅霉素 B: 不得大于 5%,用加校正因子（ ）的自身對(duì)照法計(jì)算。表 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 (1) 品種 方法（ HPLC）丙酸交沙霉素 對(duì) 照 波 長(zhǎng) 231nm交沙霉素 對(duì) 照 波 長(zhǎng) 231nm克拉霉素 克拉霉素片克拉霉素膠囊克拉霉素 顆 粒 對(duì) 照2． 檢測(cè) 波 長(zhǎng) 210nm阿奇霉素阿奇霉素干混 懸劑阿奇霉素片阿奇霉素分散片阿奇霉素膠囊阿奇霉素 顆 粒 TLC法修 訂為 HPLC法，無(wú) 該項(xiàng)檢查 的已增 訂（阿奇霉素 Gx為 紅 霉素 A偕 亞 胺 醚為 ）與不加校正因子（阿奇霉素 B和其他 單 個(gè) 雜質(zhì) ）的自身 對(duì) 照 波 長(zhǎng) 210nm 劑 用，不同限度 劑 扣除相 對(duì) 保留 時(shí)間 輔 料峰紅 霉素 （ 紅 霉素 烯 醇 醚為 雜質(zhì) 1為 ）與不加校正因子的自身 對(duì) 照 波 長(zhǎng) 215nm乳糖酸 紅 霉素注射用乳糖酸 紅 霉素（ 紅 霉素 烯 醇 醚為 雜質(zhì) 1為 ）與不加校正因子的自身 對(duì) 照 波 長(zhǎng) 215nm表 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 (2) 品種 方法（ HPLC）硬脂酸 紅 霉素硬脂酸 紅 霉素片硬脂酸 紅 霉素膠囊（ 紅 霉素 烯 醇 醚為 雜質(zhì) 1為 ）與不加校正因子的自身 對(duì) 照 波 長(zhǎng) 215nm依托 紅 霉素 紅 霉素 標(biāo) 法 計(jì) 算 檢測(cè) 波 長(zhǎng) 190nm麥白霉素 A1為 基準(zhǔn) ,外 標(biāo) 法 計(jì) 算各有關(guān)物 質(zhì)總 量（不得 過(guò) 25%）檢測(cè) 波 長(zhǎng) 232nm麥白霉素片 A1為 基準(zhǔn) ,外 標(biāo) 法 計(jì) 算各有關(guān)物 質(zhì)總 量（不得 過(guò) 30%） 波 長(zhǎng) 232nm麥白霉素膠囊 A1為 基準(zhǔn) ,外 標(biāo) 法 計(jì) 算各有關(guān)物 質(zhì)總 量（不得 過(guò) 30%） 波 長(zhǎng) 232nm羅紅 霉素羅紅 霉素片羅紅 霉素分散片羅紅 霉素膠囊 對(duì) 照 酰 胺峰外，并 對(duì)該 峰定位。l 共 25個(gè)制劑，其中 2個(gè)紅霉素腸溶制劑檢查釋放度，其他均檢查溶出度；l 顆粒劑中包衣顆粒和非包衣顆粒制訂了相應(yīng)的溶出度檢查法（如羅紅霉素顆粒）；l 混懸顆粒和干混懸劑根據(jù)溶出曲線考察結(jié)果決定是否定入標(biāo)準(zhǔn)。l l 因制劑中某些輔料與硫酸也會(huì)發(fā)生顯色反應(yīng)，采用硫酸顯色法時(shí) ,采用自身對(duì)照法，以抵消輔料的干擾；l 同時(shí)多組分品種亦采用自身對(duì)照法，以消除組分比例差異對(duì)結(jié)果的影響。 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算羅紅 霉素片羅紅 霉素分散片 , 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算 ,羅紅 霉素干混 懸劑 , , 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算 ,羅紅 霉素膠囊 , , 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算 , 酶 的加量以 單 位表示 ,羅紅 霉素 顆 粒（非包衣） , , 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算 ,克拉霉素片 , , 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算 ,克拉霉素膠囊 , , 照品外 標(biāo) 法 計(jì) 算 ,表 (2) 溶出度 測(cè) 定 (溶出液 HPLC法 測(cè) 定 )l 含量測(cè)定l 除個(gè)別品種（如克拉霉素、羅紅霉素、阿奇霉素）采用 HPLC法外，其他品種均采用微生物檢定法測(cè)定效價(jià)，見(jiàn)表 。依托紅霉素為紅霉素酯類(lèi)衍生物，故在微生物法測(cè)定含量時(shí)，必須使藥物完全水解成紅霉素，有抗菌活性后，方能測(cè)定抑菌能力，l 本版藥典進(jìn)行了充分研究后將水解條件由“37℃ 水浴中放置 6小時(shí) ”修訂為 “60℃ 水浴中放置 4小時(shí) ”，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。l l 修訂情況概要l 少數(shù)品種有顯色反應(yīng)鑒別。在鑒別試驗(yàn)中規(guī)定 TLC和 HPLC兩個(gè)色譜鑒別項(xiàng)，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件任選其中之一，便于靈活操作。（ 1） TLCl （ 3）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。阿米卡星 供無(wú)菌分裝的原料標(biāo)準(zhǔn)正文中增加了(1)可見(jiàn)異物、 (2)硫酸阿米卡星 取本品 3g，加微粒檢查用水 100ml，制成每 1ml中含 30mg的溶液，依法檢查（附錄 IXl 妥布霉素滴眼液、慶大霉素滴眼液和硫酸卡那霉素滴眼液（均為滲透壓摩爾濃度為 260320mOsmol/kg）l l 方法為 HPLC（限度： 檢查羥苯乙酯、羥苯丙酯、苯扎氯銨，80%120%HPLCELSD方法擴(kuò)大應(yīng)用，l 2023年版藥典除硫酸卡那霉素，硫酸慶大霉素 ,硫酸小諾霉素三個(gè)原料及其制劑共 9個(gè)品種的組分、特定雜質(zhì)檢查方法為 HPLCELSD方法，l l 2023年版藥典采用的薄層色譜法 (TLC)測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，屬于半定量方法，只能對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行限度檢查，不能準(zhǔn)確測(cè)定樣品中單個(gè)雜質(zhì)和總雜質(zhì)量。ELSD屬于通用型檢測(cè)器 ,柱前衍生 HPLC方法首次應(yīng)用在中國(guó)藥典氨基糖苷類(lèi)抗生素有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)中，l 圖 硫酸鹽 l 例如： 2023年版藥典中 。有以下五種形式，表 l （ 1）硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制劑共 7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定為 HPLCELSD方法。 表 含量測(cè)定HPLC ELSD法柱前衍生化 HPLCUV法微生物 檢 定法 ( 管碟法 )微生物 檢 定法 (濁 度法 ) 微生物 檢 定法 ( 管碟法 或 濁 度法 ) 7 4 5 2 21l 四環(huán)素類(lèi)抗生素l 四環(huán)類(lèi)抗生素的基本特點(diǎn)，l l 性狀 l l l 四環(huán)類(lèi)抗生素在酸性（ ～ ）溶液中， A環(huán)上 4位手性碳原子構(gòu)型易發(fā)生差向異構(gòu)化反應(yīng)，形成差向化合物，四環(huán)素、金霉素、去甲環(huán)素等很容易差向化，形成 4差向異構(gòu)體，l l 四環(huán)類(lèi)抗生素的差向異構(gòu)化反應(yīng)，可用下式表示：l l (1)酸性條件下 :l 四環(huán)類(lèi)在較酸溶液中特別在加熱情況下， 在紫外光照射下具有強(qiáng)烈熒光。(3) 四環(huán)類(lèi)抗生素能與許多金屬離子形成有色絡(luò)合物。在無(wú)菌檢查去抑菌作用時(shí)可以利用該性質(zhì)。也可用于四環(huán)類(lèi)抗生素的分析和鑒定。l 一般采用 TLC/HPLC、 IR和氯化物反應(yīng)，部分品種增加了紫外鑒別。有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法仍以 HPLC為主，但測(cè)定條件隨含量測(cè)定方法修改有所改變。l Hyclate）中有 6個(gè)潛在雜質(zhì)，分別命名為雜質(zhì) A、 B、 C、 D、 E、 F，其中雜質(zhì) Al 2023年版藥典標(biāo)準(zhǔn)中土霉素作為特定雜質(zhì)的單獨(dú)規(guī)定限度，因多批原料及片劑中均未檢出土霉素，故將土霉素作為其他雜質(zhì)控制，另增加對(duì)其他單個(gè)雜質(zhì)和總雜質(zhì)的限度控制。國(guó)內(nèi)樣品 4差向土霉素和四環(huán)素的含量很少，故將其作為其他雜質(zhì)控制，不再單獨(dú)規(guī)定限度，其他雜質(zhì)總和 ≤% ；l 2乙酰 2去酰胺土霉素雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的 （ % ），其他各雜質(zhì)峰峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（% ）?！? ，差向脫水四環(huán)素 ≤% 。經(jīng)試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)樣品 4差向四環(huán)素的含量均小于 % ，故將《中國(guó)藥典》 2023年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的 4差向四環(huán)素 ≤% 的限度改為 % 。鹽酸四環(huán)素 ,2023年版藥典的起草時(shí)對(duì)流動(dòng)相作了較大修改，對(duì)多西環(huán)素及其制劑色譜分離的影響因素包括水相緩沖鹽的種類(lèi)和濃度、 pH值、掃尾劑、有機(jī)相、柱溫等進(jìn)行了系統(tǒng)的考察，確定了新的流動(dòng)相 . l L 1醋酸銨 L 1醋酸銨 L 1醋酸銨 二甲基甲酰胺 四氫呋喃 (600： 398： 2)，內(nèi)含 EDTA鈉（與 2023年版）鹽酸金霉素高氯酸 二甲亞砜 水 (8:525:467)(pH小于 )l 圖中代號(hào) EP代號(hào) 峰名稱(chēng)1 E 雜質(zhì) E(土霉素 )2 D 雜質(zhì) D（ 4差向 6差向多西環(huán)素 ,3 C 雜質(zhì) C（ 4差向多西環(huán)素）4 B 雜質(zhì) B（美他環(huán)素）5 A 雜質(zhì) A(β 多西環(huán)素 )多西環(huán)素6 F 雜質(zhì) F(2乙酰 6脫碳酰胺多西環(huán)素 )圖 .圖 .由于流動(dòng)相 pH值在 ，因此需要選擇耐堿性的色譜柱。主峰與其有關(guān)物質(zhì)的峰形和分離效果受柱溫影響較大，本品檢測(cè)時(shí)控制柱溫是有必要的。在土霉素、多西環(huán)素中都存在，故在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中應(yīng)規(guī)定與其的分離度。注意：采用耐酸的色譜柱。金霉素分離圖圖 4.. 金。圖 .采用酸性流動(dòng)相：氯酸 二甲亞砜 水(8:525:467)(pH小于 )取代了 2023年版的流動(dòng)相，分離效果如下。l (1)四環(huán)素分離圖出峰順序(RT)峰名稱(chēng) 4差向四環(huán)素峰（與土霉素色譜峰相對(duì)保留時(shí)間約為 ）10789 土霉素峰 2乙酰 2去酰胺土霉素峰（與土霉素色譜峰相對(duì) 保留時(shí)間約為 ）L 1醋酸銨 L 1醋酸銨 土霉素，四環(huán)素等同系品種經(jīng)系統(tǒng)考察后也采用了上述流動(dòng)相系統(tǒng)，僅在醋酸銨的濃度、比例以及 pH值等條件進(jìn)行了調(diào)整。l 并在流動(dòng)相中添加了少量的 EDTA，用經(jīng)于競(jìng)爭(zhēng)性抑制色譜填料中殘留重金屬離子與四環(huán)素類(lèi)及雜質(zhì)的絡(luò)合，l 、