本規(guī)范規(guī)定了化妝品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則-免費(fèi)閱讀
【正文】 計(jì)算方法：先點(diǎn)數(shù)每個(gè)平板上生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌菌落數(shù)，求出每個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)。4 培養(yǎng)基和試劑 生理鹽水 。 三角瓶。六、霉菌和酵母菌 Molds and Yeast Count1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中霉菌和酵母菌數(shù)的檢測(cè)方法。挑取單個(gè)菌落分純?cè)谘傊桨迳希?7℃培養(yǎng)24h。血球下沉，取上面血漿。 制法： 將各成分加到蒸餾水中，加熱煮沸完全溶解，校正pH。 刻度吸管： 1mL、5mL、10mL。6 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽(yáng)性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌；如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。 染色鏡檢：挑取可疑的菌落，涂片，革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性者應(yīng)進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。 明膠培養(yǎng)基 成分： 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 明膠 120g 蒸餾水 1000mL制法：取各成分加到蒸餾水中浸泡20min，隨時(shí)攪拌加溫使之溶解，分裝于試管內(nèi)，(10 lb)20min滅菌后，直立制成高層備用。 接種針、接種環(huán)?！ ≡摼鷮?duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。 在蛋白胨水培養(yǎng)液中，觀察靛基質(zhì)反應(yīng)。℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報(bào)告為糞大腸菌群陰性。再取此液10mL加水90mL，即為稀石碳酸復(fù)紅液。陽(yáng)性者于試劑層顯深玫瑰紅色。臨用時(shí)加入乳糖并加熱融化瓊脂。 高壓滅茵器。 顯微鏡。表1 菌落計(jì)數(shù)結(jié)果及報(bào)告方式例 次不同稀釋度平均菌落數(shù)101 102 103兩稀釋度菌數(shù)之比菌落總數(shù) CFU/mL或 CFU/g 報(bào)告方式 CFU/mL或 CFU/g11365 164 20 ─ 1640016000 或 10422760 295 46 3800010432890 271 60 2710027000 或 1044不可計(jì) 4650 513 ─513000510000 或 1055 27 11 5 ─ 270270或 1026不可計(jì) 305 12 ─ 3050031000 或 1047 0 0 0 ─＜１10＜10 ＊CFU：菌落形成單位。 若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30～300個(gè)之間，則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來(lái)決定，若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2則報(bào)告其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)(見(jiàn)表1中例2及例3)。另取一個(gè)不加樣品的滅菌空平皿，加入約15mL卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，為空白對(duì)照。 卵磷脂、吐溫80—營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 氯化鈉 5g 瓊脂 15g 卵磷脂 1g 吐溫80 7g 蒸餾水 1000mL 制法：先將卵磷脂加到少量蒸餾水中，加熱溶解，加入吐溫80，將其他成分(除瓊脂外)加到其余的蒸餾水中，溶解。 高壓滅茵器。 二、菌落總數(shù)Aerobic Bacterial Count1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中菌落總數(shù)的檢驗(yàn)方法。 在檢驗(yàn)過(guò)程中，從打開(kāi)包裝到全部檢驗(yàn)操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染和擴(kuò)散，所用采樣用具、器皿及材料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行，或在相應(yīng)條件下，按無(wú)菌操作規(guī)定進(jìn)行。4 樣品的采集及注意事項(xiàng) 所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品數(shù)量大小，隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。 恒溫水浴箱。 高壓滅菌器。 振蕩器。 采樣用具：不銹鋼勺，剪刀，開(kāi)罐器等。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的樣品中共取10g或10mL。5 供檢樣品的制備 液體樣品 水溶性的液體樣品，量取10mL加到90mL滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1:10檢液?！ ”疽?guī)范適用于化妝品菌落總數(shù)的測(cè)定。 試管。加入已溶解的卵磷脂、吐溫80，混勻，調(diào)pH值為 ～，加入瓊脂，(15 lb)20min高壓滅菌，儲(chǔ)存于冷暗處備用。 為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，%的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無(wú)變化。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300個(gè)，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表1中例4)。 三、糞大腸菌群Fecal Coliforms1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中糞大腸菌群的檢驗(yàn)方法。 載玻片。 刻度吸管：10mL、2mL、1mL。冷至60℃左右無(wú)菌操作加入滅菌的伊紅美藍(lán)溶液，搖勻。 注：蛋白胨應(yīng)含有豐富的色氨酸，每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。 染色法 將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗。 如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，劃線(xiàn)接種到伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)18 h～24 h。陽(yáng)性者液面呈玫瑰紅
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