本規(guī)范規(guī)定了化妝品微生物學(xué)檢驗總則(參考版)
2024-08-15 17:04本頁面
【正文】 每g(或每mL)化妝品含霉菌和酵母菌數(shù)以CFU/g(mL)表示。判定結(jié)果時，應(yīng)選取菌落數(shù)在5～50個范圍之內(nèi)的平皿計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后，即為每g(或每mL)檢樣中所含的霉菌和酵母菌數(shù)。若有霉菌蔓延生長，為避免影響其它霉菌和酵母菌的計數(shù)時，于48h應(yīng)及時將此平板取出計數(shù)。 取1:10的檢液2mL分別注入2個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL（若菌量較多時可順序再做10倍稀釋），另取1個滅菌空平皿（作空白對照），每皿分別注入融化并冷至45℃左右的虎紅培養(yǎng)基約15mL，充分搖勻。另用少量乙醇溶解氯霉素，過濾除菌后，加入培養(yǎng)基中，若無氯霉素，可用鏈霉素代替，每1000mL培養(yǎng)基加鏈霉素30mg。 虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氫鉀 1g 硫酸鎂(含7H2O) 瓊脂 20g 1/3000虎紅溶液 100mL (四氯四碘熒光素) 蒸餾水 1000mL 氯霉素 100mg 制法： 將上述前5種成分加入蒸餾水中溶解后，再加入虎紅溶液。 高壓滅菌器。 量筒。 平皿：直徑90mm。 試管。 天平。3 儀器和設(shè)備 恒溫霉菌培養(yǎng)箱：28℃。 霉菌和酵母菌總數(shù)是指化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌菌落總數(shù)，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況?！ ”疽?guī)范適用于各種化妝品中霉菌和酵母菌的總數(shù)測定。6 檢驗結(jié)果報告 經(jīng)增菌培養(yǎng)后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌?；靹颍?7℃恒溫箱或恒溫水浴中，每半小時觀察一次，6h之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即為陽性。 甘露醇發(fā)酵試驗：取上述分純菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基液面上加入2mm～3mm 的滅菌液體石蠟，置37℃培養(yǎng)24h，金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。 染色鏡檢：挑取分純菌落，涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明帶。在Baird Parker 平板上為圓形，光滑，凸起，濕潤，直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明帶。 分離：自上述增菌培養(yǎng)液中，取1～2接種環(huán)，劃線接種在Baird Parker平板，如無此培養(yǎng)基也可劃線接種到血瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)24h～48h。 無菌液體石蠟。 兔(人)血漿制備 取 % 檸檬酸鈉溶液，(15 lb) 30min高壓滅菌，1份加兔(人)全血4份，混勻靜置；2000rpm～3000 rpm離心3min～5min。 血瓊脂培養(yǎng)基 成分： 營養(yǎng)瓊脂 100mL 脫纖維羊血(或兔血) 10mL 制法：將營養(yǎng)瓊脂加熱融化，待冷至50℃左右無菌操作加入脫纖維羊血，搖勻，制成平板，置冰箱內(nèi)備用。培養(yǎng)基應(yīng)是致密不透明的。分裝每瓶95mL。 增菌劑的配制：30%卵黃鹽水50mL與除菌過濾的1%亞碲酸鉀溶液10mL混合，保存于冰箱內(nèi)。 Baird Parker 氏培養(yǎng)基 成分： 胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏 1g 丙酮酸鈉 10g 甘氨酸 12g 氯化鋰(LiCl 酒精燈。 試管。 離心機。3 儀器和設(shè)備 顯微鏡。 2 定義 本規(guī)范采用下列定義 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。 五、金黃色葡萄球菌Staphylococcus Aureus1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中金黃金色葡萄球菌的檢驗方法。 42℃生長試驗：挑取可疑的綠膿桿菌純培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，放在41～42℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h～48h，綠膿桿菌能生長，為陽性，而近似的熒光假單胞菌則不能生長。凡在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)的小倒管中有氣體者，即為陽性，表明該菌能還原硝酸鹽，并將亞硝酸鹽分解產(chǎn)生氮氣。如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時為陽性，表示被檢物中有綠膿菌素存在。 氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒挑取綠膿桿菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，在15s～30s之內(nèi)，出現(xiàn)粉紅色或紫紅色時，為氧化酶試驗陽性；若培養(yǎng)物不變色，為氧化酶試驗陰性。 在缺乏十六烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基時也可用乙酰胺培養(yǎng)基進行分離，將菌液劃線接種于平板上，放37℃培養(yǎng)24h，綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其它菌不生長。 分離培養(yǎng)：從培養(yǎng)液的薄膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種在十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)18h～24h。5 操作步驟 增菌培養(yǎng)：
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