醫(yī)學超級全核醫(yī)學第六章-預覽頁
【正文】 量的非標記抗原。并且，標準抗原與待測抗原所處的介質(zhì)條件要相同。 穩(wěn)定性要好 ： ? 要保證在試劑盒的運輸、儲存和在實驗過程中應(yīng)該不發(fā)生降解，分離、破壞等。 ? 比活度高則在允許的相同的測量統(tǒng)計誤差的前提下，所使用的標記抗原的量必然減少，那么在反應(yīng)中與之競爭的待測抗原的量也相應(yīng)減少，方法的靈敏度就提高了。 ? 由于存在放射性核素的衰變，因此在長期儲存后的標記抗原一般要經(jīng)過重新提純后才能再次使用。 ?抗體的質(zhì)量之間關(guān)系到 RIA分析方法的靈敏度和特異性。 37 交叉反應(yīng)率： ? 指抗體識別相應(yīng)抗原類似物的能力，反應(yīng)了抗體的特異性 。 ? 即將被測物質(zhì)和其類似物，分別作競爭抑制曲線，比較兩者在其結(jié)合率為零管（ B/B0）的 50%時的劑量響應(yīng)濃度，其比值即為交叉反應(yīng)百分率，也就是該抗體對被測物某種類似物的相應(yīng)活力。 40 三、 RIA的分離方法 ?指分離標記抗原抗體復合物（ B）和游離標記抗原（ F）的方法。 ?不影響免疫反應(yīng)的平衡，即是要求在分離過程中不使抗原 抗體復合物解離或形成新的復合物。 ?常用的表面活性物質(zhì)是葡聚糖凝膠和活性碳顆粒。 ?在溶液中加入一定量的沉淀劑如聚乙二醇，乙醇等可以破壞大分子的水包膜，使大分子互相靠攏，形成更大的分子而沉淀下來。 47 磁性微粒分離技術(shù) ? 是一種新興的分離技術(shù)。 50 四、測量儀器 ?1. γ射線探測器（ γ免疫計數(shù)器） ： γ射線 ? (liquid scintillation counter) ： β 射線 51 五、 RIA的優(yōu)點 靈敏度高： 一般化學分析法的檢出極限為 103～ 106g，而 RIA通常為 109(ng)、 1012(pg)，甚至 1015 (fg)、 1018 (ag) 52 特異性強： RIA是基于抗原抗體免疫結(jié)合反應(yīng)，由于抗原 —抗體免疫反應(yīng)專一性強。 ? 近年來由于小分子半抗原制備抗體的技術(shù)有很大的發(fā)展，有人預測幾乎所有的生物活性物質(zhì)，只要其含量不低于 RIA的探測極限，都可建立適當?shù)?RIA法。 55 六、 RIA的質(zhì)量控制 ? 一個理想的、沒有誤差的“完美”測定，應(yīng)該是標本樣品的分析物無論是在一次測定中的任何位置，無論是重復測定幾次，甚至在不同實驗室所測得的結(jié)果都是一樣的，而且所測值就是這個樣品的真值。 實驗室應(yīng)該有嚴格的質(zhì)量控制體系。 ?系統(tǒng)誤差是可以避免的。 60 （二）質(zhì)量控制 質(zhì)量控制就是使用合適的方法以檢查、表示和消除來自試劑藥盒和測量體系的誤差，并使這種誤差降低到某一允許水平。 61 （三） RIA質(zhì)量控制指標 包括實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制和實驗室間的質(zhì)量控制。 ? 主要用變異系數(shù)或繪制精密度圖的方法來評價。 ? 質(zhì)控樣品和待測樣品為同一種物質(zhì)，具有相同的生物和免疫活性。 65 （ 2）回收率的測定： 設(shè)置回收管和對照管，在對照管中加入待測樣品，回收管中加入等量待測樣品和已知量的分析物，經(jīng)過反應(yīng)后計算其回收率。 67 靈敏度（ sensitivity）： ? 是指 RIA方法剛能與不含有標準抗原的零標準管在統(tǒng)計學上區(qū)別開來的抗原最低劑量，即該 RIA方法的最小可檢測量。 用抗體的交叉反應(yīng)率來表示。 ?優(yōu)點：使非標記抗原、標記抗原兩者與抗體有相同的反應(yīng)幾率，操作方便，精密度較好，穩(wěn)定性好。常用的緩沖液有磷酸鹽緩沖液 ， TrisHCL緩沖液等 。 ?％疊氮鈉：防腐劑。 1. 加樣：注意所有的試管加樣總體積要保持一致 ， 所處的介質(zhì)環(huán)境也要一致 。 5. 數(shù)據(jù)處理：繪制標準曲線和待測物濃度的計算。利用抗原 標記抗體復合物的放射性活度與抗原劑量之間的函數(shù)關(guān)系來測定待測抗原的量。反應(yīng)后得到固相抗體－抗原－第二抗體－標記第三抗體的復合物。 82 IRMA和 RIA的區(qū)別 反應(yīng)機制不同： RIA是競爭性反應(yīng)； IRMA是非競爭性反應(yīng) 反應(yīng)試劑： RIA主要試劑有三種，標記的是抗原； IRMA主要試劑只有兩種，標記的是抗體。 擬合的標準曲線 擬合的 NSB 擬合的標準曲線 擬合的 NSB IRMA的標準曲線及非特異結(jié)合曲線 RIA的標準曲線及非特異結(jié)合曲線 85 RIA IRMA 競爭性抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 非競爭性抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 采用標記抗原 采用標記抗體 三種主要反應(yīng)試劑 二種主要反應(yīng)試劑 所用抗體是限量的 所用抗體是過量的 AgAb的量與待測 Ag的量呈負相關(guān) AgAb的量與待測 Ag的量呈正相關(guān) 反應(yīng)到達平衡慢 反應(yīng)到達平衡快 非特異結(jié)合主要影響高劑量區(qū) 非特異結(jié)合主要影響低劑量區(qū) 低劑量區(qū)有不確定因素 低劑量區(qū)無不確定因素 IRMA與 RIA工作原理的主要區(qū)別 86 IRMA在實際應(yīng)用中的特點 ? 標記物的穩(wěn)定性好：標記的是抗體 IgG蛋白分子，含有多個酪氨酸或組氨酸殘基，標記方法簡單，穩(wěn)定性好。 ? 特異性：由于使用的是單克隆抗體，所以特異性一般比較高。 ?缺點：需要特殊的分離方法
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1