醫(yī)學(xué)超級(jí)全核醫(yī)學(xué)第六章-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 量的非標(biāo)記抗原。并且，標(biāo)準(zhǔn)抗原與待測(cè)抗原所處的介質(zhì)條件要相同。 穩(wěn)定性要好 ： ? 要保證在試劑盒的運(yùn)輸、儲(chǔ)存和在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該不發(fā)生降解，分離、破壞等。 ? 比活度高則在允許的相同的測(cè)量統(tǒng)計(jì)誤差的前提下，所使用的標(biāo)記抗原的量必然減少，那么在反應(yīng)中與之競(jìng)爭(zhēng)的待測(cè)抗原的量也相應(yīng)減少，方法的靈敏度就提高了。 ? 由于存在放射性核素的衰變，因此在長(zhǎng)期儲(chǔ)存后的標(biāo)記抗原一般要經(jīng)過(guò)重新提純后才能再次使用。 ?抗體的質(zhì)量之間關(guān)系到 RIA分析方法的靈敏度和特異性。 37 交叉反應(yīng)率： ? 指抗體識(shí)別相應(yīng)抗原類似物的能力，反應(yīng)了抗體的特異性 。 ? 即將被測(cè)物質(zhì)和其類似物，分別作競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線，比較兩者在其結(jié)合率為零管（ B/B0）的 50%時(shí)的劑量響應(yīng)濃度，其比值即為交叉反應(yīng)百分率，也就是該抗體對(duì)被測(cè)物某種類似物的相應(yīng)活力。 40 三、 RIA的分離方法 ?指分離標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物（ B）和游離標(biāo)記抗原（ F）的方法。 ?不影響免疫反應(yīng)的平衡，即是要求在分離過(guò)程中不使抗原 抗體復(fù)合物解離或形成新的復(fù)合物。 ?常用的表面活性物質(zhì)是葡聚糖凝膠和活性碳顆粒。 ?在溶液中加入一定量的沉淀劑如聚乙二醇，乙醇等可以破壞大分子的水包膜，使大分子互相靠攏，形成更大的分子而沉淀下來(lái)。 47 磁性微粒分離技術(shù) ? 是一種新興的分離技術(shù)。 50 四、測(cè)量?jī)x器 ?1. γ射線探測(cè)器（ γ免疫計(jì)數(shù)器） ： γ射線 ? (liquid scintillation counter) ： β 射線 51 五、 RIA的優(yōu)點(diǎn) 靈敏度高： 一般化學(xué)分析法的檢出極限為 103～ 106g，而 RIA通常為 109(ng)、 1012(pg)，甚至 1015 (fg)、 1018 (ag) 52 特異性強(qiáng)： RIA是基于抗原抗體免疫結(jié)合反應(yīng)，由于抗原 —抗體免疫反應(yīng)專一性強(qiáng)。 ? 近年來(lái)由于小分子半抗原制備抗體的技術(shù)有很大的發(fā)展，有人預(yù)測(cè)幾乎所有的生物活性物質(zhì)，只要其含量不低于 RIA的探測(cè)極限，都可建立適當(dāng)?shù)?RIA法。 55 六、 RIA的質(zhì)量控制 ? 一個(gè)理想的、沒(méi)有誤差的“完美”測(cè)定，應(yīng)該是標(biāo)本樣品的分析物無(wú)論是在一次測(cè)定中的任何位置，無(wú)論是重復(fù)測(cè)定幾次，甚至在不同實(shí)驗(yàn)室所測(cè)得的結(jié)果都是一樣的，而且所測(cè)值就是這個(gè)樣品的真值。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系。 ?系統(tǒng)誤差是可以避免的。 60 （二）質(zhì)量控制 質(zhì)量控制就是使用合適的方法以檢查、表示和消除來(lái)自試劑藥盒和測(cè)量體系的誤差，并使這種誤差降低到某一允許水平。 61 （三） RIA質(zhì)量控制指標(biāo) 包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制和實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量控制。 ? 主要用變異系數(shù)或繪制精密度圖的方法來(lái)評(píng)價(jià)。 ? 質(zhì)控樣品和待測(cè)樣品為同一種物質(zhì)，具有相同的生物和免疫活性。 65 （ 2）回收率的測(cè)定： 設(shè)置回收管和對(duì)照管，在對(duì)照管中加入待測(cè)樣品，回收管中加入等量待測(cè)樣品和已知量的分析物，經(jīng)過(guò)反應(yīng)后計(jì)算其回收率。 67 靈敏度（ sensitivity）： ? 是指 RIA方法剛能與不含有標(biāo)準(zhǔn)抗原的零標(biāo)準(zhǔn)管在統(tǒng)計(jì)學(xué)上區(qū)別開(kāi)來(lái)的抗原最低劑量，即該 RIA方法的最小可檢測(cè)量。 用抗體的交叉反應(yīng)率來(lái)表示。 ?優(yōu)點(diǎn)：使非標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗原兩者與抗體有相同的反應(yīng)幾率，操作方便，精密度較好，穩(wěn)定性好。常用的緩沖液有磷酸鹽緩沖液 ， TrisHCL緩沖液等 。 ?％疊氮鈉：防腐劑。 1. 加樣：注意所有的試管加樣總體積要保持一致 ， 所處的介質(zhì)環(huán)境也要一致 。 5. 數(shù)據(jù)處理：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)物濃度的計(jì)算。利用抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性活度與抗原劑量之間的函數(shù)關(guān)系來(lái)測(cè)定待測(cè)抗原的量。反應(yīng)后得到固相抗體－抗原－第二抗體－標(biāo)記第三抗體的復(fù)合物。 82 IRMA和 RIA的區(qū)別 反應(yīng)機(jī)制不同： RIA是競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)； IRMA是非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng) 反應(yīng)試劑： RIA主要試劑有三種，標(biāo)記的是抗原； IRMA主要試劑只有兩種，標(biāo)記的是抗體。 擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線 擬合的 NSB 擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線 擬合的 NSB IRMA的標(biāo)準(zhǔn)曲線及非特異結(jié)合曲線 RIA的標(biāo)準(zhǔn)曲線及非特異結(jié)合曲線 85 RIA IRMA 競(jìng)爭(zhēng)性抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 非競(jìng)爭(zhēng)性抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 采用標(biāo)記抗原 采用標(biāo)記抗體 三種主要反應(yīng)試劑 二種主要反應(yīng)試劑 所用抗體是限量的 所用抗體是過(guò)量的 AgAb的量與待測(cè) Ag的量呈負(fù)相關(guān) AgAb的量與待測(cè) Ag的量呈正相關(guān) 反應(yīng)到達(dá)平衡慢 反應(yīng)到達(dá)平衡快 非特異結(jié)合主要影響高劑量區(qū) 非特異結(jié)合主要影響低劑量區(qū) 低劑量區(qū)有不確定因素 低劑量區(qū)無(wú)不確定因素 IRMA與 RIA工作原理的主要區(qū)別 86 IRMA在實(shí)際應(yīng)用中的特點(diǎn) ? 標(biāo)記物的穩(wěn)定性好：標(biāo)記的是抗體 IgG蛋白分子，含有多個(gè)酪氨酸或組氨酸殘基，標(biāo)記方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好。 ? 特異性：由于使用的是單克隆抗體，所以特異性一般比較高。 ?缺點(diǎn)：需要特殊的分離方法
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1